用于调节RTEL1表达的寡核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及一种RTEL1抑制剂，其用于在HBV感染，特别是慢性HBV感染的治疗中的用途。本发明专利技术特别地涉及用RTEL1抑制剂使cccDNA，例如HBV cccDNA不稳定。本发明专利技术还涉及与RTEL1互补并且能够减少RTEL1mRNA的反义寡核苷酸。本发明专利技术还包括一种药物组合物及其在HBV感染的治疗和/或预防中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于调节RTEL1表达的寡核苷酸
本专利技术涉及RTEL1抑制剂，例如与RTEL1互补的寡核苷酸(寡聚物)，其可导致对RTEL1表达的调节或对RTEL1活性的调节。本专利技术特别地涉及RTEL1靶核酸分子用于在乙型肝炎病毒(HBV)感染，特别是慢性HBV感染的治疗和/或预防中的用途。本专利技术特别地涉及用RTEL1抑制剂使cccDNA，例如HBVcccDNA不稳定。本专利技术还包括一种药物组合物及其在HBV感染的治疗和/或预防中的用途。
技术介绍
乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒(HBV)引起的传染病，乙型肝炎病毒是一种小型的嗜肝病毒，其可通过逆转录复制。慢性HBV感染是导致严重肝病(例如肝硬化和肝细胞癌)的关键因素。目前对慢性HBV感染的治疗是基于施用聚乙二醇化的1型干扰素或核苷(核苷酸)类似物的，例如拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦、替诺福韦二吡呋酯和替诺福韦艾拉酚胺，它们可靶向病毒聚合酶(一种多功能逆转录酶)。治疗是否成功通常以乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的损失量来衡量。然而，由于感染后乙型肝炎病毒DNA仍然存在于体内，因此很难完全清除HBsAg。HBV持续性是由附加体形式的HBV基因组介导的，该基因组稳定地存在于细胞核中。这种附加体形式被称为“共价闭合环状DNA”(cccDNA)。cccDNA可作为所有HBV转录本的模板，包括前基因组RNA(pgRNA，一种病毒复制中间体)。少量cccDNA拷贝的存在可能足以再次引发全面的HBV感染。目前对HBV的治疗并不针对cccDNA。然而，治愈慢性HBV感染需要清除cccDNA(由Nassal综述，Gut.2015Dec；64(12):1972-84.doi:10.1136/gutjnl-2015-309809)。调控端粒延伸解旋酶1(RTEL1)编码一种DNA解旋酶，该DNA解旋酶在端粒的稳定性、保护和延伸中发挥作用，并与已知在DNA复制过程中保护端粒的保卫蛋白复合物(shelterin)中的蛋白质相互作用。该基因的突变与先天性角化不全和霍耶尔-赫里达斯(Hoyerall-Hreidarsson)综合征有关(参见例如Vannier等人的综述，2014TrendsCellBiol.Vol24p.416)。RTEL1位于细胞核中，作为一种ATP依赖性DNA解旋酶，参与端粒长度调节、DNA修复和基因组稳定性维持。RTEL1用作一种抗重组酶，可抵抗毒性重组并限制减数分裂过程中的交叉，以及通过物理解离链侵入事件来调节减数分裂重组和交叉稳态，从而通过减数分裂合成依赖性链退火(SDSA)和分解D环重组中间体来促进非交叉修复。另外，RTEL1可解构T环并通过抵消端粒G4-DNA结构来预防端粒脆性，这些共同确保端粒的动态性和稳定性。RTEL1已在siRNA筛选中被识别为HPV附加体的稳定剂：(Edwards等人，2013PLoSOneVol8，e75406)。靶向RTEL1的siRNA同样已被用于在霍耶尔-赫里达斯综合征中识别与RTEL1的相互作用物(Schertzer等人，2015NucleicAcidResVol43p.1834)。此外，从必需宿主蛋白的siRNA筛选中将RTEL1识别为HIV宿主依赖性因子，以提供用于抑制HIV感染的靶标(WO2007/094818)。据我们所知，在cccDNA的稳定性和维持性方面，从未将RTEL1识别为cccDNA依赖性因子，也没有有人提出将抑制RTEL1的分子用作cccDNA去稳定剂用于治疗HBV感染。专利技术目的本专利技术表明在HBV感染的细胞中RTEL1的抑制与cccDNA的减少之间存在相关性，这与HBV感染者的治疗有关。本专利技术的目的是识别减少HBV感染的细胞中cccDNA的RTEL1抑制剂。此类RTEL1抑制剂可用于治疗HBV感染。本专利技术进一步识别了新型核酸分子，其能够在体外和体内抑制RTEL1的表达。
技术实现思路
本专利技术涉及靶向核酸的寡核苷酸，所述寡核苷酸能够调节RTEL1的表达并治疗或预防与RTEL1功能有关的疾病。因此，一方面，本专利技术提供了一种RTEL1抑制剂，其用于在乙型肝炎病毒(HBV)感染的治疗和/或预防中的用途。特别地，一种能够减少cccDNA和/或前基因组RNA(pgRNA)的RTEL1抑制剂是有用的。这种抑制剂优选地选自长度为12个至60个核苷酸的核酸分子，其能够减少RTEL1mRNA，例如与哺乳动物RTEL1互补的单链反义寡核苷酸，siRNA或shRNA。另一方面，本专利技术涉及12-60个核苷酸(例如12-30个核苷酸)的寡核苷酸，其包含与哺乳动物RTEL1互补的至少10个核苷酸(特别是16-20个核苷酸)的连续核苷酸序列。此类寡核苷酸能够抑制RTEL1的表达。寡核苷酸可以是单链反义寡核苷酸或shRNA核酸分子。反义寡核苷酸可具有缺口聚体设计。优选地，反义寡核苷酸能够通过切割靶核酸来抑制RTEL1的表达。切割优选地通过核酸酶募集来实现。另一方面，本专利技术提供了药物组合物，其包含本专利技术的反义寡核苷酸和药学上的赋形剂。另一方面，本专利技术提供了用于调节正在表达RTEL1的靶细胞中RTEL1表达的体内或体外方法，该方法通过向所述细胞施用有效量的本专利技术的反义寡核苷酸或组合物来实施。另一方面，本专利技术提供了用于治疗或预防与RTEL1的体内活性有关的疾病、病患或功能障碍的方法，该方法包括向患有或易患所述疾病、病症或功能障碍的受试者施用治疗或预防有效量的本专利技术的反义寡核苷酸。本专利技术的其他方面是本专利技术的核酸分子与药物组合物的缀合物，该缀合物包含本专利技术的分子。特别关注靶向肝脏的缀合物，例如GalNAc簇。附图说明图1说明了示例性的反义寡核苷酸缀合物，其中寡核苷酸以波浪线(A-D)或“寡核苷酸”(E-H)或T2(I)表示，并且靶向缀合物部分的脱唾液酸糖蛋白受体是三价N-乙酰半乳糖胺部分。化合物A至D包含二赖氨酸支链分子，PEG3间隔物和三个末端GalNAc碳水化合物部分。在化合物A和B中，寡核苷酸直接附接至靶向缀合物部分的脱唾液酸糖蛋白受体，无需接头。在化合物C和D中，寡核苷酸通过C6接头附接于靶向缀合物部分的脱唾液酸糖蛋白受体。化合物E-I包含可商业获得的三倍体支链分子和不同长度和结构的间隔物以及三个末端GalNAc碳水化合物部分。定义HBV感染术语“乙型肝炎病毒感染”或“HBV感染”在本领域中是公知的，是指由乙型肝炎病毒(HBV)引起并影响肝脏的传染病。HBV感染可以是急性或慢性感染。慢性乙型肝炎病毒(CHB)感染是一种全球性疾病难题，影响着全球2.48亿人。每年约有686,000例死亡归因于HBV相关的晚期肝病和肝细胞癌(HCC)(GBD2013；Schweitzer等人，2015)。WHO预测，如果不加大干预措施，未来40至50年内，CHB感染者的人数将保持在目前的高水平，2015年至2030年之间累计死亡人数将达到2000万(WHO2016)。CHB感染不是具有单一临床表现的同质性疾病。感染者在其一生中经历了与CHB相关本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RTEL1抑制剂，其用于在乙型肝炎病毒(HBV)感染的治疗和/或预防中的用途。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180713 EP 18183477.11.一种RTEL1抑制剂，其用于在乙型肝炎病毒(HBV)感染的治疗和/或预防中的用途。


2.根据权利要求1所使用的RTEL1抑制剂，其中所述HBV感染是慢性感染。


3.根据权利要求1或2所使用的RTEL1抑制剂，其中，所述RTEL1抑制剂能够还原感染细胞中的cccDNA。


4.根据权利要求1至3中任一项所使用的RTEL1抑制剂，其中所述抑制剂是长度为12个至60个核苷酸的寡核苷酸，所述寡核苷酸包含与哺乳动物RTEL1靶核酸，特别是人RTEL1核酸至少95％互补的、长度为至少10个核苷酸的连续核苷酸序列，并且所述抑制剂能够还原RTEL1mRNA。


5.根据权利要求1至4中任一项所使用的RTEL1抑制剂，其选自单链反义寡核苷酸、siRNA或shRNA分子。


6.根据权利要求1至5中任一项所使用的RTEL1抑制剂，其中所述哺乳动物RTEL1靶核酸选自SEQIDNO:1或SEQIDNO:2。


7.根据权利要求4至6中任一项所使用的RTEL1抑制剂，其中所述连续核苷酸序列与SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的靶核酸至少98％互补。


8.根据权利要求3至7中任一项所使用的RTEL1抑制剂，其中当与对照相比时，HBV感染的细胞中的所述cccDNA减少了至少60％。


9.根据权利要求4至7中任一项所使用的RTEL1抑制剂，其中当与对照相比时，所述RTEL1mRNA减少了至少60％。


10.一种长度为12-30个核苷酸的单链反义寡核苷酸，其包含与哺乳动物RTEL1，特别是人RTEL1互补的、至少10个核苷酸的连续核苷酸序列，其中所述寡核苷酸能够抑制RTEL1的表达。


11.根据权利要求10所述的反义寡核苷酸，其中所述连续核苷酸序列与SEQIDNO:1至少90％互补，例如完全互补。


12.根据权利要求10或11所述的反义寡核苷酸，其包含长度为12个至25个，特别是15个至21个核苷酸的连续核苷酸序列。


13.根据权利要求11至12中任一项所述的寡核苷酸，其中所述连续核苷酸序列与选自SEQIDNO:3至SEQIDNO:21的靶序列100％互补。


14.根据权利要求10至13中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含选自由SEQIDNO:22至SEQIDNO:237组成的组的序列。


15.根据权利要求10至14中任一项所述的反义寡核苷酸，其包含一个或多个2'糖修饰的核苷。


16.根据权利要求15所述的反义寡核苷酸，其中所述一个或多个2'糖修饰的核苷独立地选自由以下项组成的组：2'-O-烷基-RNA、2'-O-甲基-RNA、2'-烷氧基-RNA、2'-O-甲氧基乙基-RNA、2'-氨基-DNA、2'-氟-DNA、阿拉伯糖核酸(ANA)、2'-氟-ANA和LNA核苷。


17.根据权利要求15或16中任一项所述的反义寡核苷酸，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·贝勒拉，J·费尔伯，JC·霍夫拉克，S·卡姆勒，T·卡姆通，B·伦纳德，L·佩德森，P·特罗伯格，M·特里耶特尼，D·J·特利，A·沃利尔，张继涛，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH