多瘤病毒复制的抑制制造技术

本发明专利技术涉及调节多瘤病毒T抗原前体mRNA剪接的反义分子和方法。一方面，本发明专利技术涉及长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其包含这样的序列，所述序列是多瘤病毒T抗原前体mRNA的至少12个核碱基的连续延伸的反向互补序列，并且该反义寡核苷酸可以调节所述大T‑抗原前体mRNA在细胞中的剪接。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多瘤病毒复制的抑制
本专利技术涉及特异性结合多瘤病毒RNA的分子。在一些实施方案中，所述分子包含识别具有多瘤病毒T抗原编码区的前体mRNA的反义寡核苷酸。多瘤病毒的例子是人类多瘤病毒，如JC病毒(JCV)、BK病毒(BKV)或Merkel细胞病毒(MCV)。
技术介绍
多瘤病毒是小型无包膜双链DNA病毒，其天然宿主通常是哺乳动物和鸟类。成年感染大多无症状，但当免疫系统受损时，可能会变成病理性感染。人类多瘤病毒的非限制性例子是BK病毒、JC病毒和Merkel细胞病毒。JCV和BKV都是机会性病原体，感染人类的幼儿期人群(Leploeg,M.D.et.al.,ClinicalInfectiousDiseases,2001)。成人的血清阳性率很高。这两种病毒都被认为持续潜伏在宿主的肾细胞中(Wunderink,H.F.et.al.,AmericanJournalofTransplantation,2017)。例如，在免疫抑制的个体中可以发生再激活(Wunderink,H.F.et.al.,AmericanJournalofTransplantation,2017；Parajuli,S.et.al.,ClinicalTransplantation,2018；Gard,L.et.al.,PLoSOne,2017)。多瘤病毒具有共同的基因组结构。它们具有在感染周期的早期和晚期都表达的基因。早期和晚期基因均产生RNA，所述RNA通过差异剪接可翻译多种蛋白质。如图1所示，晚期RNA通常编码三种衣壳蛋白，而早期基因编码小和大T抗原，通常还有一个或多个其他选择性剪接的编码区(Helle,F.et.al.,Viruses,2017)。WO2015/042466描述了一种基于反义寡核苷酸的方法来抑制JC病毒的复制和增殖。其中公开的反义寡核苷酸可以是寡脱氧核糖核苷酸(ODN)，也可以是嵌合寡核苷酸(其具有ODN内部，侧翼是一个或多个具有核酸酶抗性骨架的核苷酸。后者使RNA:寡核苷酸杂交体对RNaseH的作用敏感。所述脱氧核糖核苷酸内部具有至少4个脱氧核糖核苷酸，并且其两侧是具有2’-糖修饰的核苷酸的核酸酶抗性区域。所述反义寡核苷酸针对JC病毒mRNA中存在的特定序列。在一些实施方案中，本专利技术提供了能够调节多瘤病毒T抗原前体mRNA剪接的反义寡核苷酸。反义寡核苷酸可具有与所述前体mRNA中的剪接供体位点和/或剪接受体位点互补的序列。反义寡核苷酸可具有与一个或多个外显子相邻内含子核碱基互补的序列(见图2)。在一些实施方案中，所述反义寡核苷酸使得所述反义寡核苷酸与其多瘤病毒T抗原前体mRNA靶标的双链体对RNaseH的作用具有抗性。
技术实现思路
本专利技术提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其包含这样的序列，该序列是多瘤病毒大T抗原前体mRNA的至少12个核碱基的连续延伸的反向互补序列，并且所述反义寡核苷酸可以调节所述大T抗原前体mRNA在细胞中的剪接(见图1)。本专利技术的调节剪接的反义寡核苷酸通常需要至少17个、优选至少18个、更优选至少19个、更优选至少20个与多瘤病毒大T抗原前体mRNA互补的核碱基的连续延伸。本专利技术还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其包含这样的序列，该序列是多瘤病毒大T抗原前体mRNA的至少12个核碱基的连续延伸的反向互补序列，该延伸包含所述前体mRNA中的剪接供体、剪接受体序列或其组合。所述剪接供体或受体序列优选为多瘤病毒大T抗原剪接受体或多瘤病毒大T抗原剪接供体序列。还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其与获自NC_001538的核苷酸4537-4596或4881-4940具有至少80％的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自NC_001699的区域4397-4456或区域4741-4800中的核苷酸具有至少80％的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自NC_009238的区域4299-4358或区域4686-4745中的核苷酸具有至少80％的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自NC_009539的区域4477-4536或区域4876-4935中的核苷酸具有至少80％的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自NC_010277的区域4693-4752或区域5124-5183中的核苷酸具有至少80％的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自NC_014406的区域4264-4323或区域4654-4713中的核苷酸具有至少80％的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自NC_014407的区域4272-4331或区域4677-4736中的核苷酸具有至少80％的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自NC_014361的区域4352-4411或区域4765-4824中的核苷酸具有至少80％的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自NC_015150的区域4408-4467或区域4760-4819中的核苷酸具有至少80％的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自NC_018102的区域4303-4362或区域4658-4717中的核苷酸具有至少80％的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。还提供了长度为12至30个、优选17、18、19或20至30个核碱基的反义寡核苷酸，其优选与获自NC_020106的区域4159-4218或区域4504-4563中的核苷酸具有至少80％的互补性，并且至少包含与相应区域中的剪接供体或剪接受体序列的互补性。还提供了长度为12至3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种反义寡核苷酸，其长度为12至30，优选17、18、19或20至30个核碱基，其包含多瘤病毒T-抗原前体mRNA的至少12个核碱基的连续延伸的反向互补序列，并且所述反义寡核苷酸可以调节细胞中所述T-抗原前体mRNA的剪接，其中所述反义寡核苷酸包含以下序列的至少12个连续核碱基：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQID NO:25、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180302 EP 18159797.21.一种反义寡核苷酸，其长度为12至30，优选17、18、19或20至30个核碱基，其包含多瘤病毒T-抗原前体mRNA的至少12个核碱基的连续延伸的反向互补序列，并且所述反义寡核苷酸可以调节细胞中所述T-抗原前体mRNA的剪接，其中所述反义寡核苷酸包含以下序列的至少12个连续核碱基：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26或SEQIDNO:27。


2.一种反义寡核苷酸，其包含以下序列的至少12个连续核碱基：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、SEQIDNO:25、SEQIDNO:26或SEQIDNO:27，其中所述至少12个核苷酸包含相应多瘤病毒的大T抗原前体mRNA的剪接供体序列或剪接受体序列的反向互补序列。


3.根据权利要求1或权利要求2所述的反义寡核苷酸，其包含使所述mRNA-寡核苷酸双链体对RNaseH的作用具有抗性的修饰。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的反义寡核苷酸，其包含至少一个具有修饰的聚合物骨架的核碱基，所述修饰的聚合物骨架优选具有2’-O-甲基(2’-O-Me)、2’-O-甲氧基乙基(2’-MOE)、2’-S-约束乙基(2’-cEt)、锁核酸(LNA)、肽核酸(PNA)或吗啉代(PMO)核苷酸。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的反义寡核苷酸，其包含以下序列的至少17个，优选至少18个、19个，优选至少20个连续的核碱基：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24、...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克·彼得·范德维尔，安东·扬·范宗内维德，朱瑞恩·普林斯，
申请(专利权)人：莱顿大学医学中心附属莱顿教学医院，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL