抗CD38抗体、其抗原结合片段及医药用途制造技术

本公开提供了抗CD38抗体、其抗原结合片段及医药用途。具体的，本公开涉及包含所述抗CD38抗体CDR区的鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体，以及包含抗CD38抗体或其抗原结合片段的药物组合物，以及其作为药物的用途。特别地，本公开提供了一种人源化的抗CD38抗体在制备用于治疗CD38阳性疾病或病症的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD38抗体、其抗原结合片段及医药用途
本公开属于生物
，更具体地，本公开涉及抗CD38抗体及其组合物的治疗性用途和用于生产所述抗体分子的方法。
技术介绍
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。多发性骨髓瘤(Multiplemyeloma，MM)是一种恶性浆细胞病，其肿瘤细胞起源于骨髓中的浆细胞，而浆细胞是B淋巴细胞发育到最终功能阶段的细胞。因此，多发性骨髓瘤也可以归到B淋巴细胞淋巴瘤的范围。多发性骨髓瘤特征为骨髓浆细胞异常增生伴有单克隆免疫球蛋白或轻链(M蛋白)的过度生成，极少数患者是不产生M蛋白的未分泌型MM。多发性骨髓瘤常伴有多发性溶骨性损害、高钙血症、贫血、肾脏损害。由于正常免疫球蛋白的生成受到抑制，因此容易出现各种细菌性感染。中国国内发病率估计为2至3人/10万，男女比例为1.6：1，大多患者年龄>40岁，多为>60岁的老人。目前，中国国内预计有7万左右的患者，全球大概每年新增8万多患者。多发性骨髓瘤在各种血液瘤中占比约10％左右。随着老龄化趋势的加重，患者的数量有进一步加剧的趋势。目前，多发性骨髓瘤是一种无法治愈的血液系统恶性肿瘤，现有主要的治疗手段包括：骨髓移植、多重小分子药物化疗，尤其是卡非佐米(carfilzomib)为代表的蛋白酶抑制剂，和来那度胺(lenalidomide)为代表的免疫调节剂，大大延长了MM患者的生存期。但是，该病最后几乎都会复发，复发后平均生存周期仅9个月左右。在复发性或难治性MM患者(Refractorymultiplemyeloma，RRMM)身上，单用Janssen公司的达雷木单抗(Daratumumab，Dara)表现出良好效果，因而被FDA视为突破性药物，并于2015年11月获批上市，用于RRMM患者的治疗。目前在开展多个Dara和小分子联用的临床试验，Dara和小分子药物的联用可以大大提高临床疗效。CD38是具有256氨基酸胞外域的II型跨膜多功能蛋白。一方面，通过间接方式证明CD38通过配体CD31发挥横向信号传递的作用，可引起细胞粘附，在淋巴细胞活化和B细胞分化等方面起作用，但是该功能未有生化方面的直接证据。另一方面，CD38具有环化酶及水解酶的功能，可以通过环化酶的作用促进NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)转化成cADPR(环腺苷二磷酸核糖)，也可以通过cADPR水解酶作用，促进cADPR转化成ADPR(二磷酸腺苷核糖)。CD38可以调节Ca2+流，也可以促进细胞产生腺苷从而抑制免疫，Ca2+流的变化可能会影响胰岛素的分泌。敲除CD38基因的小鼠显示能够正常存活，但存在体液免疫应答下降、胰岛素下降、心/肺肌肉缺陷等不同症状。人体内CD38在造血细胞、免疫细胞及多种正常组织如脑、胰脏、肾脏、肌肉等中表达，RNA水平检测显示在前列腺及胸腺中有较高表达，而在多种血液瘤细胞尤其是多发性骨髓瘤细胞中明显高表达，达雷木单抗的临床数据也验证了CD38抗体在多发性骨髓瘤领域的药效及安全性，提示CD38靶点开发的潜在价值。各类文献研究显示抗CD38的抗体在治疗MM中的作用机制主要包括：1)ADCC、CDC、ADCP，主要和表位及IgG1-Fc相关的作用机制；2)凋亡引起的直接杀伤作用；3)通过抑制CD38酶活性对于肿瘤细胞的生存产生的影响；4)潜在的对于表达CD38的Treg细胞的清除作用。CD38靶点成为多发性骨髓瘤治疗的一大热点。另一个重要的靶向CD38的抗体是Sanofi的伊沙妥昔单抗(Isatuximab)，同样开展了多个单用及与小分子药物联用的临床实验，从现有的数据来看伊沙妥昔单抗具有和达雷木单抗相当的疗效及安全性。目前还有MOR202(Morphasys)及TAK-079(Takeda)等抗体已进入临床，也有CD38/CD3双特异性抗体及CD38-CAR-T等在临床前研究阶段。其他针对CD38靶点的抗体相关专利可参见如：WO2006099875、WO2007042309、WO2008047242、WO2012092612、WO2016164656、WO2017149122等。继续开发具有高选择性、高亲和力和良好药效的抗体仍是目前急需的。
技术实现思路
本公开提供一系列亲和力(affinity)更高，体内抑瘤活性更好，且具有良好体内代谢活性的CD38抗体。具体地，本公开提供一种与人CD38特异性结合的单克隆抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，本公开提供一种抗CD38抗体或其抗原结合片段，所述抗体与人CD38特异性结合，所述抗体或其抗原结合片段包含，如下所示的CDR：(i)分别如SEQIDNO：9、10、11所示的重链HCDR1、HCDR2、HCDR3或与SEQIDNO：9、10、11所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别具有3、2或1个氨基酸差异的HCDR变体；和分别如SEQIDNO：12、13、14氨基酸序列所示的轻链LCDR1、LCDR2、LCDR3或与SEQIDNO：12、13、14所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别具有3、2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或(ii)分别如SEQIDNO：15、16、17所示的重链HCDR1、HCDR2、HCDR3或与SEQIDNO：15、16、17所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别具有3、2或1个氨基酸差异的HCDR变体；和分别如SEQIDNO：18、19、20所示的轻链LCDR1、LCDR2、LCDR3或与SEQIDNO：18、19、20所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别具有3、2或1个氨基酸差异的LCDR变体；或(iii)分别如SEQIDNO：15、21、17所示的重链HCDR1、HCDR2、HCDR3或与SEQIDNO：15、21、17所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别具有3、2或1个氨基酸差异的HCDR变体；和分别如SEQIDNO：22、19、23所示的轻链LCDR1、LCDR2、LCDR3或与SEQIDNO：22、19、23所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别具有3、2或1个氨基酸差异的LCDR变体。在一些实施方式中，所述抗CD38抗体或抗原结合片段的CDR(包括3个重链CDR和3个轻链CDR)具有3、2或1个氨基酸差异的CDR变体是经亲和力成熟方法筛选获得的具有3、2或1个氨基酸差异的CDR变体。在一些实施方案中，所述抗CD38抗体或抗原结合片段与人CD38的亲和力(KD)小于10-8M、小于10-9M、小于10-10M或小于10-11M。在一些实施方案中，所述抗CD38抗体为鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体，优选人源化抗体。在一些实施方案中，所述抗体为鼠源抗体或嵌合抗体，所述抗体的重链可变区，其氨基酸序列如SEQIDNO：3、5、7所示或与SEQIDNO：3、5、7具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；和/或所述的抗体的轻链可变本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗CD38抗体或其抗原结合片段，所述抗CD38抗体或抗原结合片段与人CD38特异性结合，所述抗体或其抗原结合片段包含：/n(i)重链HCDR1，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示或与SEQ ID NO：9具有3、2或1个氨基酸差异，/n重链HCDR2，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示或与SEQ ID NO：10序列具有3、2或1个氨基酸差异，/n重链HCDR3，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示或与SEQ ID NO：11序列具有3、2或1个氨基酸差异，/n轻链LCDR1，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示或与SEQ ID NO：12具有3、2或1个氨基酸差异，/n轻链LCDR2，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示或与SEQ ID NO：13序列具有3、2或1个氨基酸差异，和/n轻链LCDR3，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示或与SEQ ID NO：14序列具有3、2或1个氨基酸差异；或者/n(ii)重链HCDR1，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示或与SEQ ID NO：15具有3、2或1个氨基酸差异，/n重链HCDR2，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示或与SEQ ID NO：16序列具有3、2或1个氨基酸差异，/n重链HCDR3，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：17所示或与SEQ ID NO：17序列具有3、2或1个氨基酸差异，/n轻链LCDR1，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示或与SEQ ID NO：18具有3、2或1个氨基酸差异，/n轻链LCDR2，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示或与SEQ ID NO：19序列具有3、2或1个氨基酸差异，和/n轻链LCDR3，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示或与SEQ ID NO：20序列具有3、2或1个氨基酸差异；或者/n(iii)重链HCDR1，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示或与SEQ ID NO：15具有3、2或1个氨基酸差异，/n重链HCDR2，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：21所示或与SEQ ID NO：21序列具有3、2或1个氨基酸差异，/n重链HCDR3，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：17所示或与SEQ ID NO：17序列具有3、2或1个氨基酸差异，/n轻链LCDR1，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：22所示或与SEQ ID NO：22具有3、2或1个氨基酸差异，/n轻链LCDR2，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：19所示或与SEQ ID NO：19序列具有3、2或1个氨基酸差异，和/n轻链LCDR3，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：23所示或与SEQ ID NO：23序列具有3、2或1个氨基酸差异。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180911 CN 2018110603412一种抗CD38抗体或其抗原结合片段，所述抗CD38抗体或抗原结合片段与人CD38特异性结合，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(i)重链HCDR1，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：9所示或与SEQIDNO：9具有3、2或1个氨基酸差异，
重链HCDR2，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：10所示或与SEQIDNO：10序列具有3、2或1个氨基酸差异，
重链HCDR3，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：11所示或与SEQIDNO：11序列具有3、2或1个氨基酸差异，
轻链LCDR1，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：12所示或与SEQIDNO：12具有3、2或1个氨基酸差异，
轻链LCDR2，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：13所示或与SEQIDNO：13序列具有3、2或1个氨基酸差异，和
轻链LCDR3，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：14所示或与SEQIDNO：14序列具有3、2或1个氨基酸差异；或者
(ii)重链HCDR1，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：15所示或与SEQIDNO：15具有3、2或1个氨基酸差异，
重链HCDR2，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：16所示或与SEQIDNO：16序列具有3、2或1个氨基酸差异，
重链HCDR3，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：17所示或与SEQIDNO：17序列具有3、2或1个氨基酸差异，
轻链LCDR1，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：18所示或与SEQIDNO：18具有3、2或1个氨基酸差异，
轻链LCDR2，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：19所示或与SEQIDNO：19序列具有3、2或1个氨基酸差异，和
轻链LCDR3，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：20所示或与SEQIDNO：20序列具有3、2或1个氨基酸差异；或者
(iii)重链HCDR1，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：15所示或与SEQIDNO：15具有3、2或1个氨基酸差异，
重链HCDR2，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：21所示或与SEQIDNO：21序列具有3、2或1个氨基酸差异，
重链HCDR3，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：17所示或与SEQIDNO：17序列具有3、2或1个氨基酸差异，
轻链LCDR1，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：22所示或与SEQIDNO：22具有3、2或1个氨基酸差异，
轻链LCDR2，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：19所示或与SEQIDNO：19序列具有3、2或1个氨基酸差异，和
轻链LCDR3，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：23所示或与SEQIDNO：23序列具有3、2或1个氨基酸差异。


根据权利要求1所述的抗CD38抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。


根据权利要求2所述的抗CD38抗体或其抗原结合片段，其中所述的鼠源抗体或嵌合抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：
(a)所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：3所示或与SEQIDNO：3具有至少95％序列同一性，且所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：4所示或与SEQIDNO：4具有至少95％序列同一性；
(b)所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：5所示或与SEQIDNO：5具有至少95％序列同一性，且所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：6所示或与SEQIDNO：6具有至少95％序列同一性；或
(c)所述重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：7所示或与SEQIDNO：7具有至少95％序列同一性，且所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：8所示或与SEQIDNO：8具有至少95％序列同一性。


根据权利要求2所述的抗CD38抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为人源化抗体，所述人源化抗体包含来源于人抗体的框架区或框架区变体，所述框架区变体在人抗体的轻链框架区和/或重链框架区上分别具有至多10个氨基酸的回复突变；
优选地，所述人源化抗体包含选自以下(d)至(f)中的任一项：
(d)重链可变区，所述重链可变区包含：重链HCDR1、HCDR2、HCDR3以及重链框架区，其中，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：9所示或与SEQIDNO：9具有3、2或1个氨基酸差异，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：10所示或与SEQIDNO：10具有3、2或1个氨基酸差异，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：11所示或与SEQIDNO：11具有3、2或1个氨基酸差异，所述重链框架区包含选自以下一个或更多个回复突变：2F、38K、44S、48I、67A、66K、69L、71V和73Q；和/或
轻链可变区，所述轻链可变区包含：轻链LCDR1、LCDR2、LCDR3以及轻链框架区，其中，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：12所示或与SEQIDNO：12具有3、2或1个氨基酸差异，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：13所示或与SEQIDNO：13具有3、2或1个氨基酸差异，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：14所示或与SEQIDNO：14具有3、2或1个氨基酸差异，所述轻链框架区包含选自以下一个或更多个回复突变：2F、43S、49K和87F；
(e)重链可变区，所述重链可变区包含：重链HCDR1、HCDR2、HCDR3以及重链框架区，其中，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：15所示或与SEQIDNO：15具有3、2或1个氨基酸差异，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：16所示或与SEQIDNO：16具有3、2或1个氨基酸差异，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：17所示或与SEQIDNO：17具有3、2或1个氨基酸差异，所述重链框架区包含选自以下一个或更多个回复突变：79F、
82AT、91S和76S；和/或；

轻链可变区，所述轻链可变区包含：轻链LCDR1、LCDR2、LCDR3以及轻链框架区，其中，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：18所示或与SEQIDNO：18具有3、2或1个氨基酸差异，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：19所示或与SEQIDNO：19具有3、2或1个氨基酸差异，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：20或与SEQIDNO：20序列具有3、2或1个氨基酸差异，所述轻链框架区包含选自以下一个或更多个回复突变：58I、68R和85T；和
(f)重链可变区，所述重链可变区包含：重链HCDR1、HCDR2、HCDR3以及重链框架区，其中，所述HCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：15所示或与SEQIDNO：15具有3、2或1个氨基酸差异，所述HCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：21所示或与SEQIDNO：21具有3、2或1个氨基酸差异，所述HCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：17所示或与SEQIDNO：17具有3、2或1个氨基酸差异，所述重链框架区包含选自以下一个或更多个回复突变：48I、77T和
82AT；和/或

轻链可变区，所述轻链可变区包含：轻链LCDR1、LCDR2、LCDR3以及轻链框架区，其中，所述LCDR1的氨基酸序列如SEQIDNO：22所示或与SEQIDNO：22具有3、2或1个氨基酸差异，所述LCDR2的氨基酸序列如SEQIDNO：19所示或与SEQIDNO：19具有3、2或1个氨基酸差异，所述LCDR3的氨基酸序列如SEQIDNO：23所示或与SEQIDNO：23具有3、2或1个氨基酸差异，所述轻链框架区包含选自以下一个或更多个回复突变：4L、9A、22S、58I、60A和68R；
其中，所述回复突变的位点根据Kabat编号规则编号。


根据权利要求4所述的抗CD38抗体或其抗原结合片段，其中所述的人源化抗体包含：序列如SEQIDNO：24、32或37所示的重链可变区或其变体，所述变体在序列如SEQIDNO：24、32或37所示的重链可变区中的框架区上具有1-10个氨基酸突变。


根据权利要求5所述的抗CD38抗体或其抗原结合片段，其中所述的变体选自以下(g)至(i)中的任一项：
(g)在序列如SEQIDNO：24所示的重链可变区中的框架区上具有选自以下一个或更多个回复突变：2F、38K、44S、48I、67A、66K、69L、71V和73Q；
(h)在序列如SEQIDNO：32所示的重链可变区中的框...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶鑫，孙乐，宋明娟，傅蓓蓓，王小华，张蕾，陶维康，
申请(专利权)人：江苏恒瑞医药股份有限公司，上海恒瑞医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32