表达异源靶向构建体的淋巴细胞制造技术

本发明专利技术提供了包含异源靶向构建体的工程化的淋巴细胞(例如γδT细胞、NK细胞、NK样T细胞、工程化的先天淋巴样细胞或MAIT细胞)，该异源靶向构建体缺乏能够激活表达该构建体的淋巴细胞的细胞内信号传导结构域。还提供了工程化的淋巴细胞(例如γδT细胞)的组合物以及使用所述工程化的淋巴细胞(例如γδT细胞，例如过继性T细胞疗法的一部分)的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达异源靶向构建体的淋巴细胞
技术介绍
癌症是一组涉及异常细胞生长的疾病，这种异常细胞生长具有转移到身体其他部位的潜能。癌症类型的多样性是众所周知的，并且许多类型的癌症在患者之间的遗传组成可以有巨大差异。这种差异给确定靶向某些癌症的有效治疗策略带来了艰巨负担。特别地，需要针对任何给定的癌症靶标制定个性化的治疗策略。因此，基于我们可以利用免疫系统的细胞识别并破坏外来或病原细胞的识别，对T细胞免疫疗法的兴趣日益浓厚。迄今为止，T细胞免疫疗法涉及工程化αβT细胞以表达嵌合抗原受体(CAR)。此类CART细胞可以基于嵌合抗原受体识别的靶抗原(例如肿瘤相关抗原)的表达来识别癌症靶。在结合其靶抗原后，CAR的一个或多个胞内结构域传播信号1激活和/或信号2激活(共刺激)以激活CART细胞，从而触发靶细胞的脱粒和裂解。然而，这种CART细胞方法仍存在多种问题。例如，由于健康细胞适度表达靶抗原，因此CART细胞具有产生脱靶细胞毒性的风险。因此，在该领域中需要改进的方法来工程化免疫系统的这些强大成分同时增强治疗的安全性和有效性。
技术实现思路
本专利技术提供了CART细胞的替代方法。具体地，本文的特征是异源靶向构建体，其缺乏功能性胞内结构域，该功能性胞内结构域能够激活表达它的细胞。当在具有先天样效应物功能和/或不受MHC限制的淋巴细胞(如γδT细胞、NK细胞、NK样T细胞、先天淋巴样细胞和工程化的粘膜相关恒定T(MAIT)细胞)上表达时，工程化的淋巴细胞可通过避免与健康细胞上低水平的靶抗原结合后的异常TCR活化而对患病细胞表现出增强的特异性。r>在第一方面，本专利技术提供了一种工程化的γ-δ(γδ)T细胞，其包含异源靶向构建体，其中异源靶向构建体包含细胞外抗原结合结构域和可操作地连接至抗原结合结构域的跨膜结构域，其中异源靶向构建体缺乏能够激活所述工程化的γδT细胞的细胞内结构域(例如，如果存在，细胞内结构域不传播信号1激活，也不传播信号2共刺激)。在一些实施方式中，异源靶向构建体还包括将抗原结合结构域可操作地连接至跨膜结构域的茎结构域(stalkdomain)。在另一方面，本专利技术提供了一种包括异源靶向构建体的工程化的γδT细胞，其中异源靶向构建体包含抗原结合结构域和跨膜结构域，其中跨膜结构域是末端跨膜结构域(即具有未连接的末端端部的跨膜结构域，例如未与肽或蛋白质连接的C末端)。因此，末端跨膜结构域未连接到细胞内结构域，如细胞内信号传导结构域。跨膜结构域不传播信号1激活。在一些实施方式中，末端跨膜结构域不参与细胞内信号途径(例如TCR途径，例如T细胞信号途径，例如信号2共刺激)。在其他实施方式中，跨膜结构域可以与内源性分子结合，从而传播信号2共刺激。在一些实施方式中，异源靶向构建体还包括将抗原结合结构域可操作地连接至跨膜结构域的茎结构域。在本专利技术任何方面的一些实施方式中，跨膜结构域不激活工程化的γδT细胞。在另一方面，本专利技术提供了一种工程化的γδT细胞，其包含由抗原结合结构域、可操作地连接抗原结合结构域的茎结构域和可操作地连接至所述茎结构域的跨膜结构域组成的异源靶向构建体。在本专利技术任何方面的一些实施方式中，工程化的γδT细胞为Vδ2阴性(例如Vδ2阴性γδT细胞是Vδ1阳性或双阴性)。在本专利技术任何方面的替代实施方式中，工程化的γδT细胞可以为Vδ2阳性。抗原结合结构域可以包括单链可变片段(scFv)、单克隆抗体、Fab片段、B细胞受体、T细胞受体、抗体支架、受体特异性配体或配体特异性受体(例如对表面表达的配体特异的受体)。在一些实施方式中，茎结构域包括从下列中选择的结构域中的一个或多个：CD8茎、IgG1铰链-CH2结构域、IgG1-铰链-CH3结构域、IgG1-铰链-CH2-CH3结构域、(G4S)3铰链、IgG1铰链、CD7茎、IgD铰链、IgD铰链-CH2结构域、IgD铰链-CH3结构域、IgD铰链-CH2-CH3结构域、IgG4铰链、IgG4铰链-CH2结构域、IgG4铰链-CH3结构域、IgG4铰链-CH2-CH3结构域或FcεRI茎结构域。在本专利技术任何方面的一些实施方式中，跨膜结构域包括CD8跨膜结构域、CD4跨膜结构域、CD3ε跨膜结构域、CD3ζ跨膜结构域、CD28跨膜结构域、CD45跨膜结构域、CD5跨膜结构域、CD8跨膜结构域、CD9跨膜结构域、CD16跨膜结构域、CD22跨膜结构域、CD33跨膜结构域、CD37跨膜结构域、CD64跨膜结构域、CD80跨膜结构域、CD86跨膜结构域、CD134跨膜结构域、CD137跨膜结构域、CD154跨膜结构域、CD7跨膜结构域、CD71跨膜结构域、CD18跨膜结构域、CD29跨膜结构域、CD11a跨膜结构域、CD11b跨膜结构域、CD11c跨膜结构域、CD11d跨膜结构域、CD94跨膜结构域、FcγR跨膜结构域或NKG2D跨膜结构域。在一些实施方式中，不超过50％的末端跨膜结构域的氨基酸驻留在细胞内(例如末端跨膜结构域(例如C末端跨膜结构域)的氨基酸的不超过45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或5％驻留在细胞内)。在本专利技术任何方面的一些实施方式中，抗原结合结构域与靶抗原结合后，异源靶向构建体的聚簇基本上不激活工程化的γδT细胞中的TCR途径。在本专利技术任何方面的一些实施方式中，抗原结合结构域结合肿瘤相关抗原。例如，肿瘤相关抗原可以是在肿瘤细胞表面上表达的蛋白质或肽抗原(例如CD19)。可替代地，肿瘤相关抗原可以是肿瘤细胞表面上表达的碳水化合物。在一些实施方式中，肿瘤相关抗原是肿瘤细胞表示上表达的神经节苷脂(例如GD2)。在一些实施方式中，肿瘤相关抗原是免疫抑制抗原。在一个实施方式中，抗原结合结构域结合实体瘤细胞表达的靶抗原。在任何前述实施方式的一些中，相对于具有功能性胞内结构域的参考细胞，抗原结合结构域与健康细胞上表达的靶抗原的结合触发通过工程化γδT细胞的细胞溶解大幅减少(例如少至少5％，少至少10％，少至少20％，少至少30％，少至少40％，少至少50％，少至少60％，少至少70％，少至少80％，少至少90％或少至少95％的细胞溶解)(例如其基本上不触发通过工程化的γδT细胞的细胞溶解)。在一些实施方式中，抗原结合结构域与肿瘤细胞或受感染细胞上表达的靶抗原的结合显著触发通过工程化的γδT细胞的细胞溶解。细胞溶解可以取决于工程化的γδT细胞对NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46或DNAM1的内源表达。在一些实施方式中，细胞溶解的特征是从CD107脱粒、颗粒酶释放、穿孔素释放、颗粒溶素释放、靶细胞杀伤、γδT细胞增殖和细胞因子产生中选择的响应中的一个、两个、三个、四个、五个或全部六个。在另一方面，本专利技术提供了一种工程化的NK细胞或NK样T细胞，其具有任何本文所描述的实施方式的异源靶向构建体。在一些实施方式中，异源靶向构建体包含细胞外抗原结合结构域和可操作地连接至抗原结合结构域的跨膜结构域。异源靶向构建体缺乏工程化的NK细胞或NK样T细胞的细胞内结构域。在另一方面，本专利技术提供了一种工程化的先天淋巴样细胞(IL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含异源靶向构建体的工程化的γ-δ(γδ)T细胞，其中，所述异源靶向构建体包含细胞外抗原结合结构域和可操作地连接至所述抗原结合结构域的跨膜结构域，其中所述异源靶向构建体缺乏能够激活所述工程化的γδT细胞的细胞内结构域。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180323 GB 1804701.91.一种包含异源靶向构建体的工程化的γ-δ(γδ)T细胞，其中，所述异源靶向构建体包含细胞外抗原结合结构域和可操作地连接至所述抗原结合结构域的跨膜结构域，其中所述异源靶向构建体缺乏能够激活所述工程化的γδT细胞的细胞内结构域。


2.根据权利要求1所述的工程化的γδT细胞，还包含将所述抗原结合结构域可操作地连接至所述跨膜结构域的茎结构域。


3.一种包含异源靶向构建体的工程化的γδT细胞，其中，所述异源靶向构建体包含抗原结合结构域和跨膜结构域，其中所述跨膜结构域是不传播所述工程化的γδT细胞的信号1激活的末端跨膜结构域。


4.根据权利要求3中所述的工程化的γδT细胞，还包含将所述抗原结合结构域可操作地连接至所述跨膜结构域的茎结构域。


5.一种包含异源靶向构建体的工程化的γδT细胞，其中，所述异源靶向构建体由抗原结合结构域、可操作地连接所述抗原结合结构域的茎结构域和可操作地连接所述茎结构域的跨膜结构域组成，其中所述异源靶向构建体不传播所述工程化的γδT细胞的信号1激活。


6.根据权利要求3至5中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，所述跨膜结构域不激活所述工程化的γδT细胞。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，所述工程化的γδT细胞是Vδ2阴性的。


8.根据权利要求6所述的工程化的γδT细胞，其中，所述Vδ2阴性γδT细胞是Vδ1阳性的。


9.根据权利要求1至8中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，所述抗原结合结构域包含单链可变片段(scFv)、单克隆抗体、Fab片段、B细胞受体、T细胞受体、抗体支架、受体特异性配体或配体特异性受体。


10.根据权利要求2或4至9中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，所述茎结构域包含从下列中选择的一种或多种结构域：CD8茎、IgG1铰链、IgG1铰链-CH2结构域、IgG1-铰链-CH3结构域、IgG1-铰链-CH2-CH3结构域、(G4S)3铰链、CD7茎、IgD铰链、IgD铰链-CH2结构域、IgD铰链-CH2-CH3结构域、IgD铰链-CH3结构域、IgG4铰链、IgG4铰链-CH2结构域、IgG4铰链-CH2-CH3结构域、IgG4铰链-CH3结构域或FcεRI茎。


11.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，所述跨膜结构域包含CD8跨膜结构域、CD4跨膜结构域、CD3ζ跨膜结构域、CD28跨膜结构域、CD45跨膜结构域、CD5跨膜结构域、CD8跨膜结构域、CD9跨膜结构域、CD16跨膜结构域、CD22跨膜结构域、CD33跨膜结构域、CD37跨膜结构域、CD64跨膜结构域、CD80跨膜结构域、CD86跨膜结构域、CD134跨膜结构域、CD137跨膜结构域、CD154跨膜结构域、CD7跨膜结构域、CD71跨膜结构域、CD18跨膜结构域、CD29跨膜结构域、CD11a跨膜结构域、CD11b跨膜结构域、CD11c跨膜结构域、CD11d跨膜结构域、CD94跨膜结构域、FcγR跨膜结构域或NKG2D跨膜结构域。


12.根据权利要求1至11中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，C末端跨膜结构域的氨基酸的不超过50％驻留在细胞内。


13.根据权利要求1至12中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，在所述抗原结合结构域结合靶抗原后，所述异源靶向构建体的聚簇基本上不激活所述工程化的γδT细胞内的TCR途径。


14.根据权利要求1至13中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，所述抗原结合结构域结合肿瘤相关抗原。


15.根据权利要求14所述的工程化的γδT细胞，其中，所述肿瘤相关抗原是表达在肿瘤细胞表面上的蛋白质或肽抗原。


16.根据权利要求15所述的工程化的γδT细胞，其中，所述肿瘤相关抗原是CD19。


17.根据权利要求16所述的工程化的γδT细胞，其中，所述肿瘤相关抗原是表达在肿瘤细胞表面上的碳水化合物。


18.根据权利要求14所述的工程化的γδT细胞，其中，所述肿瘤相关抗原是表达在肿瘤细胞表面上的神经节苷脂。


19.根据权利要求18所述的工程化的γδT细胞，其中，所述神经节苷脂是GD2。


20.根据权利要求14至19中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，所述肿瘤相关抗原是免疫抑制抗原。


21.根据权利要求1至20中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，所述抗原结合结构域结合实体肿瘤细胞表达的靶抗原。


22.根据权利要求1至21中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，相对于具有功能性胞内结构域的参考细胞，所述抗原结合结构域与健康细胞上表达的靶抗原的结合触发基本上更少的通过所述工程化的γδT细胞的细胞溶解。


23.根据权利要求22所述的工程化的γδT细胞，其中，所述抗原结合结构域与健康细胞上表达的靶抗原的结合基本上不触发通过所述工程化的γδT细胞的细胞溶解。


24.根据权利要求1至23中任一项所述的工程化的γδT细胞，其中，所述抗原结合结构域与肿瘤细胞或受感染的细胞上表达的靶抗原的结合基本上触发通过所述工程化的γδT细胞的细胞溶解。


25.根据权利要求22所述的工程化的γδT细胞，其中，所述细胞溶解取决于所述工程化的γδT细胞对NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46或DNAM1的内源性表达。


26.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：奥利弗·努斯鲍默，伊斯特万·科瓦奇，艾琳·皮齐托拉，拉伊·梅塔，
申请(专利权)人：伽马三角洲疗法有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB