多层细胞膜片的制备方法及利用其制备的多层细胞膜片技术

本说明书涉及一种多层细胞膜片的制备方法，包括：(a)在0℃至30℃中任一点位的温度具有熔点或从疏水性变换为亲水性的第一基材上形成第一细胞层的步骤；(b)在由酶所分解的第二基材上形成第二细胞层的步骤；(c)使所述第一细胞层与所述第二细胞层接触的步骤；(d)提供所述第一基材的熔点以下温度或所述第一基材变换成亲水性的温度而选择性地去除所述第一基材的步骤；及(e)使所述第二基材接触于包含酶的溶液而选择性地去除所述第二基材的步骤。本说明书还涉及利用所述制备方法制备的多层细胞膜片。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多层细胞膜片的制备方法及利用其制备的多层细胞膜片
本说明书主张2018年7月31日向韩国特许厅提交的韩国专利申请第10-2018-0089461号的申请日的权益，其内容全部包括于本专利技术。本专利技术涉及组织工程学及再生医学领域，更具体地，涉及一种多层细胞膜片的制备方法及利用其制备的多层细胞膜片。
技术介绍
在再生医学领域，组织工程学治疗正在向以生物降解性高分子支架为基础培养细胞来重建组织后，移植到损伤的部位而使得诱导正常功能的方向发展。只是，将生物降解性高分子支架移植到体内时，存在因生成酸性物质而发生炎症反应的问题(RonnebergerBetal.,JBiomedMaterRes,30(1)(1996),31-40)。作为与此不同方向的接近方法，提出了将细胞与生物降解性高分子溶液掺和而注入损伤部位的方法，但这存在由于细胞外基质(ECM：ExtraCellularMatrix)的损伤而存在移植部位的细胞再生效率大幅下降的问题(CanavanHetal.,JBiomedMaterResA.2005Oct1；75(1):1-13)。为了解决如上所述的问题，作为无需生物降解性高分子而用于移植细胞的手段，开发了细胞膜片(YangJetal.Biomaterials.2005Nov；26(33):6415-22)。只是，即使制作了细胞膜片，为了将其进行临床应用，需要将细胞膜片层叠为多层的过程，但是现在已知的方法由于过于复杂的过程及长期的制备时间，从而存在不够经济的问题。
技术实现思路
r>技术问题本专利技术旨在提供一种通过简单工序制备多层结构的细胞膜片的方法及利用其制备的多层细胞膜片。解决问题的方案本专利技术的一种实施状态提供一种多层细胞膜片的制备方法，包括：(a)在0℃至30℃中任一点位的温度具有熔点或从疏水性变换为亲水性的第一基材上形成第一细胞层的步骤；(b)在由酶所分解的第二基材上形成第二细胞层的步骤；(c)使所述第一细胞层与所述第二细胞层接触的步骤；(d)提供所述第一基材的熔点以下温度或所述第一基材变换成亲水性的温度而选择性地去除所述第一基材的步骤；及(e)使所述第二基材接触于包含酶的溶液而选择性地去除所述第二基材的步骤。本专利技术的另一实施状态提供一种利用所述制备方法制备的多层细胞膜片。专利技术的效果本专利技术的多层细胞膜片具有可以通过简单、经济的方法制备多层细胞膜片的优点。附图说明图1图示根据本专利技术一种实施状态的多层细胞膜片的制备方法。图2显示根据实施例制备的普流尼克(Pluronic)水凝胶膜片的放大图像。图3显示去除实施例中的普流尼克水凝胶膜片的面的细胞膜片的放大图像。图4显示通过染色确认去除实施例中的普流尼克水凝胶膜片的面的细胞膜片的细胞生存与否的结果。图5显示去除实施例中的海藻酸盐水凝胶膜片的面的细胞膜片的放大图像。图6显示通过染色确认去除实施例中的海藻酸盐水凝胶膜片的面的细胞膜片中细胞生存与否的结果。图7显示了拍摄根据实施例的普流尼克水凝胶膜片及海藻酸盐水凝胶膜片全部被去除的细胞膜片的情形。具体实施方式在本说明书中，当说某个部件位于其它部件“上”时，这意指不仅是某个部件与其它部件相接的情形，还包括在两个部件之间还存在其它部件的情形。在本说明书中，当说某个部分“包括”某个构成要素时，这意指只要没有特别相反的记载，并不是除外其它构成要素，而且还可以包括其它构成要素。在本说明书中，“追加的第一基材”可以全部包括关于第一基材的内容，也可以与第一基材相同。在本说明书中，“追加的第二基材”可以全部包括关于第二基材的内容，也可以与第二基材相同。在本说明书中，“追加的第一细胞层”可以全部包括关于第一细胞层的内容，也可以与第一细胞层相同。在本说明书中，“追加的第二细胞层”可以全部包括关于第二细胞层的内容，也可以与第二细胞层相同。下面对本专利技术进行详细说明。本专利技术的一种实施状态包括：(a)在0℃至30℃中任一点位的温度具有熔点或从疏水性变换为亲水性的第一基材上形成第一细胞层的步骤；(b)在由酶所分解的第二基材上形成第二细胞层的步骤；(c)使所述第一细胞层与所述第二细胞层接触的步骤；(d)提供所述第一基材的熔点以下温度或所述第一基材变换成亲水性的温度而选择性地去除所述第一基材的步骤；及(e)使所述第二基材接触于包含酶的溶液而选择性地去除所述第二基材的步骤。本专利技术的多层细胞膜片的制备方法具有可以以简单的方法制备由多层细胞层层叠的细胞膜片的优点。所述多层细胞膜片的制备方法可以使用在0℃至30℃中任一点位的温度具有熔点或从疏水性变换成亲水性的第一基材；及由酶所分解的第二基材而层叠细胞层后，选择性地去除任一基材。由此，可以在由选择性地去除的基材而露出的细胞层上层叠追加的细胞层。另外，具备在未去除的基材上层叠的细胞层，因而可以轻松转录，转录后可以选择性地去除剩余基材，从而进行多层细胞层的移植。根据本专利技术的一种实施状态，(d)步骤及(e)步骤可以依次执行，在(d)步骤与(e)步骤之间可以还包括：(d')使露出的所述第一细胞层与在追加的第一基材上配备的追加的第一细胞层接触后，提供所述第一基材的熔点以下温度或所述第一基材变换成亲水性的温度而选择性地去除所述追加的第一基材的步骤。具体地，由(c)步骤形成的“第一基材/第一细胞层/第二细胞层/第二基材”的层叠结构体，由(d)步骤及(d')步骤而可以形成“追加的第一细胞层/第一细胞层/第二细胞层/第二基材”的层叠结构体。另外，根据本专利技术的一种实施状态，(d')步骤可以反复执行2次以上而在所述第一细胞层上形成多个追加的第一细胞层。具体地，(d')步骤可以经多次反复执行，由此，可以形成“追加的第一细胞层/.../追加的第一细胞层/第一细胞层/第二细胞层/第二基材”的层叠结构体。根据所述多层细胞膜片的用途及目的而可以适宜地调节所述追加的第一细胞层的数量。根据本专利技术的一种实施状态，(e)步骤及(d)步骤可以依次执行，在(e)步骤与(d)步骤之间，可以还包括：(e')使露出的所述第二细胞层与在追加的第二基材上配备的追加的第二细胞层接触后，使所述追加的第二基材接触于包含酶的溶液而选择性地去除所述追加的第二基材的步骤。具体地，由(c)步骤而形成的“第一基材/第一细胞层/第二细胞层/第二基材”的层叠结构体，由(e)步骤及(d')步骤而可以形成“第一基材/第一细胞层/第二细胞层/追加的第二细胞层”的层叠结构体。另外，根据本专利技术的一种实施状态，(e')步骤可以反复执行2次以上而在所述第二细胞层上形成多个追加的第二细胞层。具体地，(e')步骤可以经多次反复执行，由此，可以形成“第一基材/第一细胞层/第二细胞层/追加的第二细胞层/.../追加的第二细胞层”的层叠结合体。所述追加的第二细胞层的数量可以根据所述多层细胞膜片的用途及目的而适宜地调节。根据本专利技术的一种实施状态本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多层细胞膜片的制备方法，包括：/n(a)在0℃至30℃中任一点位的温度具有熔点或从疏水性变换为亲水性的第一基材上形成第一细胞层的步骤；/n(b)在由酶所分解的第二基材上形成第二细胞层的步骤；/n(c)使所述第一细胞层与所述第二细胞层接触的步骤；/n(d)提供所述第一基材的熔点以下温度或所述第一基材变换成亲水性的温度而选择性地去除所述第一基材的步骤；及/n(e)使所述第二基材接触于包含酶的溶液而选择性地去除所述第二基材的步骤。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180731 KR 10-2018-00894611.一种多层细胞膜片的制备方法，包括：
(a)在0℃至30℃中任一点位的温度具有熔点或从疏水性变换为亲水性的第一基材上形成第一细胞层的步骤；
(b)在由酶所分解的第二基材上形成第二细胞层的步骤；
(c)使所述第一细胞层与所述第二细胞层接触的步骤；
(d)提供所述第一基材的熔点以下温度或所述第一基材变换成亲水性的温度而选择性地去除所述第一基材的步骤；及
(e)使所述第二基材接触于包含酶的溶液而选择性地去除所述第二基材的步骤。


2.根据权利要求1所述的多层细胞膜片的制备方法，其特征在于，
(d)步骤及(e)步骤依次执行，在(d)步骤与(e)步骤之间还包括：(d')使露出的所述第一细胞层与在追加的第一基材上配备的追加的第一细胞层接触后，提供所述追加的第一基材的熔点以下温度或所述追加的第一基材变换成亲水性的温度而选择性地去除所述追加的第一基材的步骤。


3.根据权利要求2所述的多层细胞膜片的制备方法，其特征在于，
反复执行(d')步骤2次以上而在所述第一细胞层上形成多个追加的第一细胞层。


4.根据权利要求1所述的多层细胞膜片的制备方法，其特征在于，
(e)步骤及(d)步骤依次执行，在(e)步骤与(d)步骤之间，还包括：(e')使露出的所述第二细胞层与在追加的第二基材上配备的追加的第二细胞层接触后，使所述追加的第二基材接触于包含酶的溶液而选择性地去除所述追加的第二基材的步骤。


5.根据权利要求4所述的多层细胞膜片的制备方法，其特征在于，
反复执行(e')步骤2次以上而在所述第二细胞层上形成多个追加的第二细胞层。


6.根据权利要求1所述的多层细胞膜片的制备方法，其特征在于，
(d)步骤使所述第一基材接触于具有所述第一基材的熔点以下温度或所述第一基材变换成亲水性的温度的溶液，或者将周边温度降低至所述第一基材的熔点以下温度或所述第一基...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳石焕，金载润，
申请(专利权)人：罗基医疗保健公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR