一种奥曲肽的合成方法技术

本发明专利技术公开了一种奥曲肽的合成方法，包括以下步骤：1)选择2‑CTC树脂为合成起点，制备Fmoc‑Thr(tBu)‑OL‑2CTC树脂；2)按照Fmoc/tBu策略依次偶联正交保护的胱氨酸、Fmoc‑Thr(tBu)‑OH、Fmoc‑Lys(Boc)‑OH、Fmoc‑D‑Trp(Boc)‑OH和Fmoc‑Phe‑OH，然后用pd(pph3)4和苯硅烷脱去胱氨酸正交保护的Alloc保护基后偶联Boc‑D‑Phe‑OH，然后进行分子内酰胺反应成环；3)裂解液切落肽片段，获得奥曲肽粗肽。本发明专利技术提供了一条避免氧化反应成环的固相合成方法，从而避免了现有方法带来的诸多问题，且本发明专利技术方法具有操作简单、工艺简化、环境友好等诸多优点。

【技术实现步骤摘要】
一种奥曲肽的合成方法
本专利技术属于制药领域，具体涉及一种奥曲肽的合成方法。
技术介绍
醋酸奥曲肽(OctreotideAcetate)是一种人生长抑素的类似物，分子量1019.3(按游离碱计)，CAS号79517-01-4，是一个环状九肽药物，其肽序如式I所示，原研厂家是诺华制药(Novartis)，在中国、美国和欧洲，上市产品是醋酸奥曲肽注射液和醋酸奥曲肽微球；同时在欧洲部分国家有混悬液上市。Coy和Sarantakis等人于1973年同时用固相方法化学合成了生长抑素十四肽。Meinhofer实验室则采用改造的N-芴甲氧羰基(Fmoc)氨基酸，按逐个延伸的方法固相合成了还原型生长抑素。1982年Bauer等人合成了一种生长抑素的类似物，命名为奥曲肽(Octreotide)。奥曲肽的肽链短，跟生长抑素相比除去了SS中的6个氨基酸，8位为氨基L-苏氨醇，不易为蛋白酶迅速水解，容易人工合成。其在体内的半衰期长达2h，其抑制激素分泌的作用比生长抑素更强，因此奥曲肽是一种长效生长抑素的类似物，又叫生长抑素释放抑制素(SRIF或SS)，奥曲肽广泛用于肢端肥大症、消化道内分泌肿瘤、消化道非分泌性肿瘤、上消化道出血、急性胰腺炎、系统性硬化症、肠易激综合症、癌瘤恶病质、倾倒综合症、银屑病、体位性低血压、手术中低血压等疾病的治疗。一般地说，环肽的代谢稳定性和生物利用度远远高于直链肽。鉴于环肽的诸多优点，近年来对多肽研究的热点已转移到环肽的合成和生物评价上。到目前为止，在合成方面，主要有固相合成法(如专利CN103351426和CN1923849)和液相合成法(CN1355173)合成奥曲肽。合成奥曲肽工艺思路由两部分组成：1)线性八肽的合成，主要采用固相依次接入氨基酸或片段拼合，2)对线性八肽进行环化，以精肽自然氧化，或使用氧化试剂氧化，或者在固相合成后期采用氧化试剂直接氧化。现有的专利保护或正使用于合成奥曲肽工艺，在环化阶段工艺并不太理想，主要是使用氧化试剂大多带有一定化学毒性或使用时较危险，且不环保；空气自然氧化则不能很好地控制氧化位点，易产生多聚体。本专利技术的目的是提供另外一种制备奥曲肽的合成方法。该方法避免使用氧化反应成环，且新颖、合成条件温和、工艺简单且工艺稳定。
技术实现思路
为了解决上述
技术介绍
中所提出的问题，本专利技术的目的在于提供一种奥曲肽的合成方法。为了达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案为：一种奥曲肽的合成方法，包括以下步骤：1)选择2-CTC树脂为合成起点，制备Fmoc-Thr(tBu)-OL-2CTC树脂；2)按照Fmoc/tBu策略依次偶联正交保护的胱氨酸、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH和Fmoc-Phe-OH，然后用pd(pph3)4和苯硅烷脱去胱氨酸正交保护的Alloc保护基后偶联Boc-D-Phe-OH，然后进行分子内酰胺反应成环；3)裂解液切落肽片段，获得奥曲肽粗肽。进一步地，Fmoc-Thr(tBu)-OL-2CTC树脂的制备方法为将2-CTC树脂放入反应容器中，将Fmoc-Thr(tBu)-OL用溶剂溶解后加入固相合成载体中，缓慢滴加DIPEA，搅拌反应一段时间即可得到Fmoc-Thr(tBu)-OL-2CTC树脂。进一步地，溶解Fmoc-Thr(tBu)-OL的溶剂为能溶解本原料，且可用于固相合成反应的有机溶剂均可，比如二氯甲烷，DMF、NMP、DMSO、THF等，优选为二氯甲烷。进一步地，2-CTC树脂优选为树脂替代度大于1.0mmol/g的2-CTC树脂。进一步地，正交保护的胱氨酸保护结构如下：进一步地，步骤2)具体包括：脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的正交保护的胱氨酸和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Thr(tBu)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Lys(Boc)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-D-Trp(Boc)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Phe-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；用pd(pph3)4和苯硅烷脱去胱氨酸正交保护的Alloc保护基后，将合适量的Boc-D-Phe-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将HBTU和DIPEA在溶剂中溶解后投入固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止。进一步地，步骤2)中溶解物质的溶剂采用一般固相合成使用的溶剂均可，如DMF、NMP、DMSO等。进一步地，脱除Fmoc所用的试剂为20％的哌啶/DMF溶液(DBLK)，即哌啶：DMF(体积比)为1:4的混合溶液。进一步地，偶联剂为DIC+A或者DIPEA+A+B，其中A为HOBt或HOAt，B为PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU、TBTU其中之一；优选为HBTU和化合物A及DIPEA的组合物。进一步地，偶联剂中各成分与Fmoc-aa-OH的摩尔比为DIC：A：Fmoc-aa-OH＝1.2：1.1：1或者DIPEA：A：B：Fmoc-aa-OH＝2.0：1.1：1：0.9，其中Fmoc-aa-OH为Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Phe-OH。进一步地，步骤2)的反应先将树脂在偶联之前进行溶胀，所述洗涤和溶胀的步骤采用的试剂为DMF、NMP或二氯甲烷，优选为DMF。进一步地，检测方法为选用Kaiser试剂来判定反应终点，若树脂显色则说明多肽中有游离的胺，即胺上无保护基。进一步地，步骤3)所述的裂解液为TFA、H2O、吲哚的混合物，优选为TFA：H2O：吲哚＝90：5：5。现有用于合成奥曲肽的工艺，在环化阶段工艺并不太理想，主要是使用氧化试剂大多带有一定化学毒性或使用时较危险，且不环保；空气自然氧化则不能很好地控制氧化位点，易产生多聚体。而使用液相合成则工艺操作繁琐，且获得粗肽纯度不高。本专利技术提供了一条避免氧化反应成环的固相合成方法，从而避免了现有方法带来的诸多问题，且本专利技术方法具有操作简单、工艺简化、环境友好等诸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种奥曲肽的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)选择2-CTC树脂为合成起点，制备Fmoc-Thr(tBu)-OL-2CTC树脂；/n2)按照Fmoc/tBu策略依次偶联正交保护的胱氨酸、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH和Fmoc-Phe-OH，然后用pd(pph3)4和苯硅烷脱去胱氨酸正交保护的Alloc保护基后偶联Boc-D-Phe-OH，然后进行分子内酰胺反应成环；/n3)裂解液切落肽片段，获得奥曲肽粗肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种奥曲肽的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)选择2-CTC树脂为合成起点，制备Fmoc-Thr(tBu)-OL-2CTC树脂；
2)按照Fmoc/tBu策略依次偶联正交保护的胱氨酸、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH和Fmoc-Phe-OH，然后用pd(pph3)4和苯硅烷脱去胱氨酸正交保护的Alloc保护基后偶联Boc-D-Phe-OH，然后进行分子内酰胺反应成环；
3)裂解液切落肽片段，获得奥曲肽粗肽。


2.根据权利要求1所述的奥曲肽的合成方法，其特征在于，所述Fmoc-Thr(tBu)-OL-2CTC树脂的制备方法为将2-CTC树脂放入反应容器中，将Fmoc-Thr(tBu)-OL用溶剂溶解后加入固相合成载体中，缓慢滴加DIPEA，搅拌反应一段时间即可得到Fmoc-Thr(tBu)-OL-2CTC树脂。


3.根据权利要求1或2所述的奥曲肽的合成方法，其特征在于，所述2-CTC树脂为树脂替代度大于1.0mmol/g的2-CTC树脂。


4.根据权利要求1所述的奥曲肽的合成方法，其特征在于，所述正交保护的胱氨酸保护结构如下：





5.根据权利要求1所述的奥曲肽的合成方法，其特征在于，所述步骤2)具体包括：脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的正交保护的胱氨酸和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Thr(tBu)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将合适量的Fmoc-Lys(Boc)-OH和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止；
脱除Fmoc，洗涤树脂，直至完全脱除Fmoc为止；将...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗日朗，尹传龙，陶安进，余品香，
申请(专利权)人：翰宇药业武汉有限公司，深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42