一种抗过敏性纳米抗体组合物、抗体测定方法及喷雾剂技术

本申请公开了一种抗过敏性纳米抗体组合物、基于纳米磁化学发光法测定血清抗体性能的方法血清测定方法和一种抗过敏性鼻炎喷雾剂，本发明专利技术的检测抗过敏性纳米抗体组合物及方法，该纳米抗体组合物通过生物大分子蛋白酶等进行标记跟踪，对过敏性抗原进行追踪反应报告，结果而进行基于纳米抗体的抗过敏性验证药物制备推导。本纳米抗体组合物中各试剂组分稳定性良好，检测灵敏度高、特异性能好，得到完善统一工艺，并严格按照标准生产操作规程和质量控制规程进行生产。可以用于较大范围的炎症试用，比如鼻炎等，费用成本低二适用于国内广大患者。基于本发明专利技术提出的抗过敏性鼻炎喷雾剂可以有效用于鼻炎。

【技术实现步骤摘要】
一种抗过敏性纳米抗体组合物、抗体测定方法及喷雾剂
本申请涉及医疗抗过敏抗体研发
，具体而言，涉及一种抗过敏性纳米抗体组合物、抗体测定方法及喷雾剂。
技术介绍
纳米抗体是目前已知的可结合目标抗原的最小单位。VHH晶体大小2.5nm×4nm，分子量只有12KD-15KD，其分子结构比较稳定，能够耐高温并在极端苛刻的环境中保持活性。VHH在45℃放置1周仍能保持80％的生物活性，表明纳米抗体在室温下保存相当稳定，这使其比常规抗体更易于储藏和运输。纳米抗体具有强而快的组织穿透能力，利于它们进入致密组织如实体瘤中发挥作用，而且能够有效的穿透血脑屏障，为脑部给药提供了新方法。同时，纳米抗体具有可逆的重折叠能力即易复性，试验表明，纳米抗体在90℃高温处理后，仍然保持了较高的活性，能重新获得抗原结合能力。而所有常规抗体在90℃处理后都丧失了活性，发生了不可逆的聚合。在恶劣条件，如在离液剂、存在蛋白酶和极度pH值变性的条件下，正常抗体会失效或分解，而纳米抗体仍具有高度的稳定性。要采取措施延长其在抗体纳米抗体组合物及人体里的半衰期，通过纳米抗体与白蛋白融合、Fc融合、PEG化等改造措施，纳米抗体存在于抗体纳米抗体组合物及人体内的半衰期将大大延长。随着生物工程技术的不断发展，大量纳米抗体药物将不断涌现。目前其临床试验的主要剂型为注射剂和口服剂。由于纳米抗体药物分子量小，体内稳定性差，且口服时易受胃肠道酶降解和肝脏酶系统的首过效应影响，要达到有效的药物治疗浓度，病人需要长期多次重复注射或口服给药。>IgG抗体介导的I型过敏反应性疾病相当普遍，抗过敏性疾病是患者吸入、摄食入或者注入含有致敏成分的物质后触发机体的B细胞产生特异性免疫球蛋白G，从而引发过敏反应的疾病及相关症状。而目前，对于炎症比如鼻炎抗过敏处理上，并未有成效的纳米抗体抗过敏反应试剂进行临床试验论证。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题是提供一种抗过敏性纳米抗体组合物、抗体测定方法及喷雾剂，该纳米抗体组合物通过生物大分子蛋白酶等进行标记跟踪，对过敏性抗原进行追踪反应报告，记载化学试验结果而进行基于纳米抗体的抗过敏性验证药物制备推导。为解决上述技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是：一种抗过敏性纳米抗体组合物，包括纳米抗体以及带荧光素标签的IgG3抗体溶液、具备生物标记蛋白分子的过敏原溶液、多肽包覆性纳米磁浮液、具有生物活性的特异性纳米抗体，以及维护增加纳米抗体稳定性和组织穿透性的抗体纳米抗体组合物、免疫抑制剂、非应变性过敏抗原；所述纳米抗体包括：活性纳米抗体、纳米抗体片段、多靶向纳米抗体聚合链接体、纳米抗体与蛋白的偶联体或纳米抗体与药物的偶联体中的一种或多种。纳米抗体只包含一个重链可变区VHH和两个常规的CH2与CH3区，是已知的可结合目标抗原的最小单位。作为本专利技术的一个较佳实施例，作为本次炎症试剂用抗体，采用纳米抗体与蛋白的偶联体可以使得靶向蛋白抗体明确结合，可以广泛用于开发治疗性抗体药物、诊断试剂抗体结合。多肽包覆性纳米磁浮液可以用于抗体药物靶向追踪。多肽包覆性纳米磁常用语现代生物，免疫分析是现代生物分析技术中重要的一种方法，利用它可对蛋白质、抗原、抗体及细胞进行定量分析。将结合有载体DNA的磁性纳米粒子在外界磁场影响下转染到细胞内的方法。磁性纳米粒子表面连接的具有生物活性的吸附剂或其他配体等活性物质可与特定生物分子或细胞特异性结合，在外加磁场作用下分离。磁性分离方法基本只包括2个步骤：1.用磁性纳米粒子标记目标分子或细胞；2.通过磁分离装置分离出目标分子或细胞。利用磁性纳米粒子分离的例子之一是把特异性抗体与磁性纳米粒子结合，可将磁性纳米粒子连接在特定细胞上，外加磁场即可快速将结合磁性纳米粒子的细胞分离或进行免疫分析。这样的方法特异性高、分离迅速、重现性好。除此之外，本纳米抗体组合物在是需要经过预设时间后进行抗体抗原结合产生的性能进行标定测试，化学结果需要进行缓冲测试，在本实施例，采用对过敏原反应蛋白具有抗性的化学试剂进行标定测试。本处配置两者不同标准含量的试剂：第一化学试剂标定试剂和第二化学试剂标定试剂。第一化学试剂标定试剂和第二化学试剂标定试剂来对过敏反应蛋白反应溶液进行标定数据测试。在本专利技术一个较佳实施例中，所述具备生物标记蛋白分子的过敏原溶液的浓度为0.35～1.188ug/ml；所述链霉亲和素标记的多肽包覆性纳米磁浮液的浓度为0.35～1.188mg/ml；所述带荧光素标签的IgG3抗体溶液的浓度为0.25～3.75ug/ml。在本专利技术一个较佳实施例中，所述标记的带荧光素标签的IgG3抗体为能与人体内IgG蛋白特异结合的抗体，所述带荧光素标签的IgG3抗体溶液的制备过程为：将浓度为1.75-6.25mg/mL的碱性磷酸酶溶液与带荧光素标签的IgG3抗体按摩尔比为1-4：1进行混合后并纯化，得到IgG3抗体，所述纯化是用pH为8-9的碳酸氢盐缓冲液平衡并洗脱，再紫外检测和记录纯化图谱，再用0.05M、pH值为3.75的MES缓冲液对IgG抗体稀释。在本专利技术一个较佳实施例中，所述免疫抑制剂包括环磷酰氨、霉酚酸酯、环孢素a、他克莫司、甲氨蝶呤、硫唑嘌呤、来氟米特、羟氯喹皮质类固醇、腺苷受体激动剂、磷酸二酯酶4抑制剂、HDAC抑制剂或蛋白酶体抑制剂的一种或多种。在本专利技术一个较佳实施例中，所述非应变性过敏抗原包含医疗用生物蛋白酶，所述医疗用生物蛋白酶是治疗性蛋白质或治疗性多核苷酸，包括替莫瑞林、奥瑞珠单抗、贝利木单抗、聚乙二醇化重组尿酸酶、他利苷酶α、阿加糖酶α或葡糖脑苷脂酶α的一种或多种。在本专利技术一个较佳实施例中，所述多肽包覆性纳米磁浮液的制备过程为：将链霉亲和素标记的纳米磁微粒用磁分离器沉淀，再用0.01M、pH值为7.8的磷酸盐缓冲液重悬，混匀磁分离沉淀，并重复清洗；清洗后的纳米磁微粒分散于0.01M、pH值为7.8的磷酸盐缓冲液。为了检测人体在吸入本技术提出的一种抗过敏性纳米抗体组合物后，血清中的抗体和抗原性能参数，便于后续药物跟踪分析。本专利技术采用的另一个技术方案是：一种基于纳米磁化学发光法测定血清抗体性能的方法，血清中摄入有所述的抗过敏性纳米抗体组合物，包括步骤为：(1)将多肽包覆性纳米磁浮液、具备生物标记蛋白分子的过敏原和待检样本混匀并反应，反应后置于磁场中静置并去上清，得到第一溶液；(2)向所述第一溶液中加入IgG3抗体混匀并反应，反应后置于磁场中静置并去上清，得到第二溶液；(3)向所述第二溶液中加入发光底物并反应，测发光强度；(4)利用已知浓度的第一化学试剂标定试剂绘制发光强度标准曲线，根据步骤(3)得到的发光强度对照所述标准曲线，计算得出待测血清样本中炎症特异性IgG的含量。在本专利技术一个较佳实施例中，步骤(1)中所述反应的条件为45℃下反应5分钟，所述静置的时间为3分钟；步骤(1)中还包括对本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗过敏性纳米抗体组合物，其特征在于，包括纳米抗体以及带荧光素标签的IgG3抗体溶液、具备生物标记蛋白分子的过敏原溶液、多肽包覆性纳米磁浮液、具有生物活性的特异性纳米抗体，以及维护增加纳米抗体稳定性和组织穿透性的抗体纳米抗体组合物、免疫抑制剂、非应变性过敏抗原；/n所述纳米抗体包括：活性纳米抗体、纳米抗体片段、多靶向纳米抗体聚合链接体、纳米抗体与蛋白的偶联体或纳米抗体与药物的偶联体中的一种或多种。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗过敏性纳米抗体组合物，其特征在于，包括纳米抗体以及带荧光素标签的IgG3抗体溶液、具备生物标记蛋白分子的过敏原溶液、多肽包覆性纳米磁浮液、具有生物活性的特异性纳米抗体，以及维护增加纳米抗体稳定性和组织穿透性的抗体纳米抗体组合物、免疫抑制剂、非应变性过敏抗原；
所述纳米抗体包括：活性纳米抗体、纳米抗体片段、多靶向纳米抗体聚合链接体、纳米抗体与蛋白的偶联体或纳米抗体与药物的偶联体中的一种或多种。


2.根据权利要求1所述的一种抗过敏性纳米抗体组合物，其特征在于，所述具备生物标记蛋白分子的过敏原溶液的浓度为0.35～1.188ug/ml；
所述多肽包覆性纳米磁浮液的浓度为0.35～1.188mg/ml；所述带荧光素标签的IgG3抗体溶液的浓度为0.25～3.75ug/ml。


3.根据权利要求1所述的一种抗过敏性纳米抗体组合物，其特征在于，所述免疫抑制剂包括环磷酰氨、霉酚酸酯、环孢素a、他克莫司、甲氨蝶呤、硫唑嘌呤、来氟米特、羟氯喹皮质类固醇、腺苷受体激动剂、磷酸二酯酶4抑制剂、HDAC抑制剂或蛋白酶体抑制剂的一种或多种。


4.根据权利要求1所述的一种抗过敏性纳米抗体组合物，其特征在于，所述非应变性过敏抗原包含医疗用生物蛋白酶，所述医疗用生物蛋白酶是治疗性蛋白质或治疗性多核苷酸，包括替莫瑞林、奥瑞珠单抗、贝利木单抗、聚乙二醇化重组尿酸酶、他利苷酶α、阿加糖酶α或葡糖脑苷脂酶α的一种或多种。


5.根据权利要求1所述的一种抗过敏性纳米抗体组合物，其特征在于，所述标记的带荧光素标签的IgG3抗体为能与人体内IgG蛋白特异结合的抗体，所述带荧光素标签的IgG3抗体溶液的制备过程为：将浓度为1.75-6.25mg/mL的碱性磷酸酶溶液与带荧光素标签的IgG3抗体按摩尔比为1-4：1进行混合后并纯化，得到IgG3抗体，所述纯化是用pH为8-9的碳酸氢盐缓冲液平衡并洗脱，再紫外检测和记录纯化图谱，再用0.05M、pH值为3.75的MES缓冲液对IgG抗体稀释。


6.根据权利要求1所述的一种抗过敏性纳米抗体组合物，其特征在于，所述多肽包覆性纳米磁浮液的制备过程为：
将链霉亲和素标记的纳米磁微粒用磁分离器沉淀；
再用0.01M...

【专利技术属性】
技术研发人员：刁波琼，周翔，李胜华，
申请(专利权)人：华科同济干细胞基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42