本发明专利技术的目的是研究毛囊干细胞促进毛发再生的相关机制，探索利用异体毛囊干细胞作为治疗病理性脱发的药物。一种促进毛发毛发再生的外用药物，包含毛囊干细胞培养基上清液和胸腺肽联用。有益效果：本发明专利技术所述的外用药物组合物主要适用于雄激素性等脱发症状，通过毛囊干细胞培养基上清液和胸腺肽联用，能够有效激发毛囊，促进脱发者的毛发再生。具有方便、安全、低成本、效果显著、治疗过程简单、病人接受度高的优势。度高的优势。度高的优势。
【技术实现步骤摘要】
一种促进毛发再生的外用药物及其制备方法
[0001]本专利技术涉及基因工程技术及生物药物领域，尤其涉及一种促进毛发毛发再生的外用药物及其制备方法。
技术介绍
[0002]脱发是皮肤科的一种常见疾病，分为非瘢痕性脱发和瘢痕性脱发。雄激素性脱发、斑秃、拔毛癖等属于前者，毛发扁平苔藓、毛囊炎性脱发、盘状红斑狼疮性脱发等属于后者。雄激素性脱发最为常见，表现为头发密度进行性减少，为雄激素依赖的常染色体显性遗传性多变性疾病。
[0003]目前针对脱发患者有几种治疗选择，如使用口服或者外用药物，或者进行手术治疗。然而，这些治疗方式具有局限性，药物治疗只能短暂的缓解症状，当病人停止用药后头发又会开始脱落。比如口服非那雄胺有性副作用并且会至畸，停止用药后，头发会加速脱落。采用自体的单个毛囊和毛囊单位移植是一种可靠的手术治疗方法，但是毛囊供体的数量是有限的。因此，脱发急需一些新的治疗手段。
[0004]毛囊干细胞(hair follicle stem cells，HFSCs)是存在于毛囊外根鞘隆突部中的一群能自我更新和增殖的多潜能干细胞，能分化成毛囊、皮脂腺、表皮，对毛发的再生起着重要的作用。研究表明，人毛囊干细胞表达多种细胞表面分子标记物如CD200、角蛋白15(keratin 15，K15)、角蛋白19(keratin 19，K19)、整合素α6、整合素β1、Nestin等，而不表达内皮细胞标志分子CD31；此外，也不表达小鼠毛囊干细胞的标记分子CD34。利用这些阳性和阴性标记分子，研究者们可以更好的分离纯化毛囊干细胞，这加快了毛囊干细胞的研究进程。与胚胎干细胞及其它成体干细胞相比，毛囊干细胞具有来源丰富、取材方便、对机体无损害、无伦理问题等优点。文献报道过，通过移植毛囊干细胞使裸鼠长出毛发，证明移植健康毛囊干细胞具有修复受损毛囊的潜力。倘若能够应用异体来源的毛囊干细胞作为供体，这必将大大扩大毛囊干细胞的应用范围。鉴于此，本专利技术研究毛囊干细胞促进毛发再生的相关机制，探索利用异体毛囊干细胞作为治疗病理性脱发的药物。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是研究毛囊干细胞促进毛发再生的相关机制，探索利用异体毛囊干细胞作为治疗病理性脱发的药物。
[0006]一种促进毛发再生的外用药物，包含毛囊干细胞培养基上清液和胸腺肽联用。
[0007]进一步，所述胸腺肽的质量分数为0.01-0.1％。
[0008]进一步，将毛囊干细胞培养基上清液分装后置于4℃保存，与质量分数0.01-0.1％胸腺肽混合后得到药物组合物。
[0009]一种促进毛发毛发再生的外用药物的制备方法，：将毛囊干细胞培养基上清液分装后置于4℃保存，胸腺肽为静脉注射或腹腔给药，
[0010]所述毛囊干细胞培养基上清液的培养方法包括以下步骤：
[0011](1)取健康毛囊以青-链霉素的PBS液反复冲洗；
[0012](2)在解剖显微镜下采用显微手术剪剪下毛囊外根鞘隆突部，放到培养皿中；加入毛囊干细胞培养基，37℃、5％CO2孵箱培养；
[0013](3)次日补加等量培养基1.5mL，在倒置显微镜下观察毛囊外根鞘隆突部有无梭形生长的细胞爬出，待细胞融合达80％后传代培养；
[0014](4)将上述毛囊干细胞消化，用毛囊干细胞培养液制成1.0
×
105个/mL的毛囊干细胞悬液，计数。
[0015](5)按1:1混合1.2％的琼脂糖和DMEM/F12培养基后，取2ml混合液注入35cm2培养皿中，待冷却凝固后，置入培养箱中备用。
[0016](6)按1:1比例将0.7％琼脂糖和毛囊干细胞培养基在无菌试管中混合后，在向管中加入1/10体积的毛囊干细胞悬液，充分混匀，注入培养基I的培养皿中，加入量等于培养基I。
[0017](7)2天一次更换培养基，总共培养10天，得到毛囊干细胞培养基上清液。
[0018]进一步，所述毛囊干细胞培养液含10％FBS、100U/mL青链霉素双抗、2ng/ml bFGF的DMEM/F12。
[0019]进一步，所述培养基I，按1:1混合1.2％的琼脂糖和DMEM/F12培养基后，取2ml混合液注入35cm2培养皿中，待冷却凝固后，置入培养箱中备用。
[0020]进一步，所述毛囊干细胞消化的消化液包含质量百分含量为0.1％的胰酶和0.008％的EDTA的磷酸缓冲液。
[0021]进一步，所述健康毛囊取自脑后枕部。
[0022]进一步，所述消化条件为37℃消化3-5分钟。
[0023]有益效果：本专利技术所述的外用药物组合物主要适用于雄激素性等脱发症状，通过毛囊干细胞培养基上清液和胸腺肽联用，能够有效激发毛囊，促进脱发者的毛发再生。具有方便、安全、低成本、效果显著、治疗过程简单、病人接受度高的优势。
附图说明
[0024]图1注射5w后各组裸鼠皮肤HE；
[0025]图2皮下注射HFSC后毛发生长状态。
具体实施方式
[0026]为了阐述本专利技术的技术方案和技术目的，下面具体实施方式对本专利技术做进一步介绍。
[0027]一、药物筛选
[0028]1.样本收集与分组：招募健康志愿者和病理性脱发志愿者各20名，从每名志愿者优势供区(脑后枕部)及前额区分别提取30个完整毛囊。将所采集的毛囊样本按来源分为：健康优势供区组、健康前额组、脱发优势供区组、脱发区组，用于后续的实验研究。
[0029]2.免疫荧光双染鉴定毛囊样本内毛囊干细胞数量：每组每人分别取5个毛囊样本，制成5μm厚的冰冻切片，以4％多聚甲醛固定10min。PBS清洗3次，用含0.25％Triton-100的10％山羊血清封闭液处理20min，分别加入适当稀释的一抗(K19、整合素β1)4℃孵育过夜；
次日，PBS清洗3次后，加入与一抗对应种属的荧光二抗37℃反应30min；PBS清洗并经DAPI复染后封片，于荧光显微镜下观察并拍照。统计并比较各组毛囊中毛囊干细胞的数量有无差异。
[0030]3.基因芯片分析各组毛囊样本的基因表达谱：每组每人分别取15个毛囊样本，利用Affymetrix Human Gene 2.0STArray基因芯片分析获取毛囊样本的基因表达谱数据。
[0031]4.生物信息学方法分析基因表达谱数据：将步骤4中获得的基因表达谱数据导入NGF模型，获得基因表达谱数据中基因重要性分值(important score，IS)及排名；将NGF打分排名前3000的基因及各自的IS得分(作为初始热度)数据输入HotNet2模型，利用HotNet2方法鉴定关键调控子网络。每组每人分别取10个毛囊样本，提取mRNA，采用实时荧光定量PCR法验证这些关键基因在各组毛囊样本中的表达水平；
[0032]5.系统药理学方法筛选候选药物：将HotNet2鉴定出的子网络基因及这些基因的表达水平作为标签信息输入连通图谱(Connectivity Map，cMap)数据库进行查询(网本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种促进毛发再生的外用药物，其特征在于：包含毛囊干细胞培养基上清液和胸腺肽联用。2.根据权利要求1所述的一种促进毛发再生的外用药物，其特征在于：所述胸腺肽的质量分数为0.01-0.1％。3.根据权利要求1所述的一种促进毛发再生的外用药物，其特征在于：将毛囊干细胞培养基上清液分装后置于4℃保存，胸腺肽为静脉注射或腹腔给药。4.一种促进毛发再生的外用药物的制备方法，其特征在于：将毛囊干细胞培养基上清液分装后置于4℃保存，与质量分数0.01-0.1％胸腺肽混合，所述毛囊干细胞培养基上清液的培养方法包括以下步骤：(1)取健康毛囊以青-链霉素的PBS液反复冲洗；(2)在解剖显微镜下采用显微手术剪剪下毛囊外根鞘隆突部，放到培养皿中；加入毛囊干细胞培养基，37℃、5％CO2孵箱培养；(3)次日补加等量培养基1.5mL，在倒置显微镜下观察毛囊外根鞘隆突部有无梭形生长的细胞爬出，待细胞融合达80％后传代培养；(4)将上述毛囊干细胞消化，用毛囊干细胞培养液制成1.0
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105个/mL的毛囊干细胞悬液，计数；(5)按质量比1:1混合1.2％的琼脂糖和DMEM/F12培养基后，取2ml混合液注入35cm2培养皿中，待冷却凝固后，置入培...
【专利技术属性】
技术研发人员：周翔，李胜华，
申请(专利权)人：华科同济干细胞基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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