本发明专利技术公开了一种MRKH综合征诊断标记物及其应用，该MRKH综合征诊断标记物为cDNA序列中存在突变位点c.839+5G>A的TBX6基因片段。专利权人通过对442名MRKH受试患者进行外显子组测序，首次在TBX6基因上发现了该突变位点，经验证，该突变位点所在的六号内含子产生了新的剪接位点，导致TBX6基因上六号内含子前96bp碱基滞留在mRNA中，进而导致基因产物失去功能而引发MRKH。因此，通过采集受检者外周血，提取基因组DNA，而后采用MRKH综合征诊断试剂盒检测TBX6基因上是否存在该突变位点，即可辅助MRKH综合征的快速诊断。综合征的快速诊断。综合征的快速诊断。
【技术实现步骤摘要】
MRKH综合征诊断标记物及其应用
[0001]本专利技术属于医学检测
，特别涉及一种MRKH综合征诊断标记物及其应用。
技术介绍
[0002]女性胚胎期苗勒管发育异常，导致先天性无阴道合并无子宫或仅有始基子宫，即MRKH综合征(Mayer-Rokitansky-K
ü
ster-Hauser syndrome)，发病率为1/5000-1/4000。主要临床特征包括：无子宫或实性始基子宫结节，极少部分患者虽有功能性子宫内膜但子宫发育不良；阴道完全缺失，或阴道上2/3缺失、下1/3呈穴状，其顶端为盲端；输卵管、卵巢发育正常，第二性征为正常女性，染色体核型为女性核型46，XX。MRKH综合征主要分为两种类型，其中Ⅰ型(单纯型)表现为单纯子宫、阴道发育异常，而泌尿系统、骨骼系统发育正常，此型最为常见；Ⅱ型(复杂型)表现为除子宫、阴道发育异常外，还伴有泌尿、骨骼系统或其他系统发育异常。
[0003]MRKH综合征的患者女性第二性征发育正常，多因青春期原发性闭经就诊发现，少数患者以婚后性生活困难或周期性下腹痛为主诉症状。因患者青春期后无月经来潮、无法正常性生活、不具生育能力，仅可成年后通过人工阴道成型术解决性生活的困难，对患者身心影响巨大。
[0004]应用微阵列、比较基因组杂交(array-CGH)、DNA测序等技术已检测出某些染色体畸变(chromosomal aberration)、基因突变等可能是MRKH综合征的致病因素。研究者通过检测染色体畸变位点来筛选相关的基因，并判别相关基因在MRKH综合征中的致病性。既往文献报道，染色体16p11.2区域的片段缺失在约2％的MRKH综合征患者中发现，是MRKH综合征最常见的染色体畸变之一，而定位于该区域的TBX6基因被认为是可能性较大的可疑致病基因。Sandakan等在MRKH综合征患者中发现TBX6基因的剪切位点突变(622-2A>T)，该突变位于五号外显子的剪接受体位点，因此该突变很可能降低了五号外显子的正确剪接；Tewes等人在167名MRKH患者中发现5例携带TBX6基因的错义突变；Tbx6基因敲除的雌性小鼠中也表现出泌尿生殖系统畸形。
[0005]因此研究人员猜想TBX6基因突变可能是MRKH综合征的致病原因之一，在早期对基因突变位点进行检测能够实现尽早、尽快确诊。
技术实现思路
[0006]本专利技术的专利技术目的是提供一种MRKH综合征诊断标记物及其应用。
[0007]为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
[0008]MRKH综合征诊断标记物，该MRKH综合征诊断标记物为cDNA序列中存在突变位点c.839+5G>A的TBX6基因片段。
[0009]本专利技术通过对442名MRKH受试患者进行外显子组测序，首次在TBX6基因上发现了该突变位点c.839+5G>A，该突变位点经Sanger测序确认为真性突变；经验证，该突变位点c.839+5G>A所在的六号内含子产生了新的剪接位点，导致TBX6基因上六号内含子前96bp碱
基滞留在mRNA中，进而导致TBX6基因产物失去功能而引发MRKH。
[0010]基于此，本专利技术提供了上述的MRKH综合征诊断标记物在制备MRKH综合征诊断试剂盒中的应用。
[0011]同时，本专利技术还提供了一种MRKH综合征诊断试剂盒，该MRKH综合征诊断试剂盒中至少包含用于扩增上述的MRKH综合征诊断标记物的PCR扩增引物。
[0012]通过采集受检者外周血，提取基因组DNA，而后采用上述的MRKH综合征诊断试剂盒检测基因组DNA的TBX6基因上是否存在该突变位点c.839+5G>A，即可辅助MRKH综合征的快速诊断。
[0013]本实施例的试剂盒对MRKH综合征诊断标记物的长度没有特殊要求，只要作为MRKH综合征诊断标记物的TBX6基因片段上包含上述突变位点即可。不过，为了PCR扩增引物特异、灵敏地对上述MRKH综合征诊断标记物进行检测，作为优选，所述的TBX6基因片段的长度为突变位点c.839+5G>A前后150-250bp。
[0014]在上述的MRKH综合征诊断试剂盒中，所述的PCR扩增引物包括：
[0015]上游引物：5
’-
TCACTTACCACTGCATTTCTGA-3
’
；
[0016]下游引物：5
’-
CTTCCCCGAGACCACATTCA-3
’
。
[0017]作为优选，上述的MRKH综合征诊断试剂盒中还包含有：高保真PCR酶、缓冲液、脱氧核苷三磷酸和PCR增强剂。
[0018]为了实现MRKH综合征的早期诊断，本专利技术还提供了上述MRKH综合征诊断标记物在制备胎儿MRKH综合征产前筛查试剂盒中的应用。通过在妊娠期进行MRKH综合征产前筛查，能够尽早了解胎儿是否患有MRKH综合征，从源头上降低出生缺陷婴儿的降生率。
[0019]进一步地，本专利技术还提供了一种胎儿MRKH综合征产前筛查试剂盒，该胎儿MRKH综合征产前筛查试剂盒中至少包含用于扩增上述MRKH综合征诊断标记物的PCR扩增引物。
[0020]由于带有该突变位点c.839+5G>A的患者患有MRKH综合征，但其母亲却仍能生育，表明该突变位点有可能是自体突变，也可能是遗传自父亲。若该突变位点是遗传自父亲，虽然父亲本身不致病，但却会导致其女性后代患MRKH综合征的可能性大大提高。因此，本专利技术还提供了上述MRKH综合征诊断标记物在制备男性孕前遗传病筛查试剂盒中的应用。
[0021]进一步地，本专利技术还提供了一种男性孕前遗传病筛查试剂盒，该试剂盒中至少包含用于扩增上述MRKH综合征诊断标记物的特异性扩增引物。
[0022]通过在孕前或婚前对男性TBX6基因上是否携带突变位点c.839+5G>A进行筛查，可以及早地避免MRKH综合征患儿的降生。
[0023]本专利技术中，该胎儿MRKH综合征产前筛查试剂盒、男性孕前遗传病筛查试剂盒中所包含的内容物可以是与上述MRKH综合征诊断试剂盒相同的，仅使用场合和检测对象不同。
[0024]与现有技术相比，本专利技术的有益效果体现在：
[0025](1)本专利技术通过对442名MRKH受试患者进行外显子组测序，首次在TBX6基因上发现了该突变位点c.839+5G>A，该突变位点经Sanger测序确认为真性突变；经验证，该突变位点c.839+5G>A所在的六号内含子产生了新的剪接位点，导致TBX6基因上六号内含子前96bp碱基滞留在mRNA中，进而导致TBX6基因产物失去功能而引发MRKH；基于此，本专利技术还提供了一种MRKH综合征诊断试剂盒，通过采集受检者外周血，提取基因组DNA，而后采用上述的MRKH综合征诊断试剂盒检测基因组DNA的TBX6基因上是否存在该突变位点c.839本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.MRKH综合征诊断标记物，其特征在于，为cDNA序列中存在突变位点c.839+5G>A的TBX6基因片段。2.如权利要求1所述的MRKH综合征诊断标记物，其特征在于，所述的TBX6基因片段的长度为突变位点c.839+5G>A前后150-250bp。3.如权利要求1或2所述的MRKH综合征诊断标记物在制备MRKH综合征诊断试剂盒中的应用。4.一种MRKH综合征诊断试剂盒，其特征在于，至少包含用于扩增如权利要求1或2所述的MRKH综合征诊断标记物的PCR扩增引物。5.如权利要求4所述的MRKH综合征诊断试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增引物包括：上游引物：5
’-
TCACTTACCACTGCATTTCTGA-3
’
；下游引物：5
’-
CTTCCCCGAGACCACATTCA-3
’
【专利技术属性】
技术研发人员：朱兰，马聪聪，陈娜，吴南，赵森，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：
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