NETs的生物标志物在制备视网膜静脉阻塞早期诊断产品中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医学技术领域，尤其涉及NETs的生物标志物在制备视网膜静脉阻塞早期诊断产品中的应用。本发明专利技术的标本易于获得，可在患者未出现明显的眼部症状时辅助诊断该疾病，并对其进行积极治疗，便于改善患者预后，减轻患者的经济压力，具有重要的临床指导意义。具有重要的临床指导意义。具有重要的临床指导意义。

【技术实现步骤摘要】
NETs的生物标志物在制备视网膜静脉阻塞早期诊断产品中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医学
，尤其涉及NETs的生物标志物在制备视网膜静脉阻塞早期诊断产品中的应用。

技术介绍

[0002]视网膜静脉阻塞是常见眼底血管疾病，也是世界范围内常见的致盲原因之一。根据阻塞的部位不同，视网膜静脉阻塞可分为视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞及半侧视网膜静脉阻塞。视网膜静脉阻塞的常见病因为血栓形成、炎症、高血压等；黄斑水肿、新生血管及新生血管性青光眼为其常见的并发症，且预后不良。由于预后与病程有关，病程短的预后相对病程长的好，因此早期诊断和治疗对于视网膜静脉阻塞尤为关键。尽管不断有人对视网膜静脉阻塞疾病进行研究，但是在其临床诊断方面仍有不足。目前视网膜静脉阻塞的诊断依据是临床医师裂隙灯检查、眼底照相及机眼底荧光血管造影及RVO PPP。患者在就诊时已经出现眼部症状或其并发症症状，在眼科检查图像上已有特征性改变，治疗效果不理想。因此，我们需要研究探索一种诊断方法，可以在患者未出现明显的眼部症状时诊断出该疾病，并对其进行积极治疗，改善患者预后，减轻患者的经济压力。
[0003]NETs(neutrophil extracellular traps)是由中性粒细胞释放的一种具有多种生物学活性的网状结构，有研究认为NETs作为宿主抗微生物的介质，但是其也有促炎症及血栓形成的作用。目前有研究表明NET与中风、心血管疾病、肿瘤以及全身系统性疾病有关，并未有研究表明NETs与视网膜静脉阻塞的关系。

技术实现思路
<br/>[0004]本专利技术提供了NETs的生物标志物在制备视网膜静脉阻塞早期诊断产品中的应用，标本易于获得，可以在患者未出现明显的眼部症状时辅助诊断该疾病，并对其进行积极治疗，便于改善患者预后，减轻患者的经济压力，具有重要的临床指导意义，解决了现有技术中存在的问题。
[0005]本专利技术所采用的技术方案是：
[0006]NETs的生物标志物在制备视网膜静脉阻塞诊断产品中的应用。
[0007]进一步地，所述NETs的生物标志物为NETs中的cfDNA、和/或MPO-DNA、和/或H3Cit。
[0008]进一步地，所述NETs的生物标志物为NETs中的cfDNA、MPO-DNA和H3Cit三种。
[0009]进一步地，所述诊断产品为早期诊断产品。
[0010]进一步地，所述诊断产品为辅助诊断产品。
[0011]进一步地，具体应用时，检测受检者血液、视网膜组织或玻璃体液中cfDNA/NETs、和/或MPO-DNA、和/或H3Cit的含量，并与正常人群进行对比，对比结果作为诊断依据之一；cfDNA/NETs、和/或MPO-DNA、和/或H3Cit在视网膜静脉阻塞患者中高表达。
[0012]进一步地，具体应用时，检测受检者静脉血中cfDNA/NETs、MPO-DNA、和H3Cit的含
量，并与正常人群进行对比，对比结果作为诊断依据之一；cfDNA/NETs、MPO-DNA和H3Cit在视网膜静脉阻塞患者中高表达。
[0013]进一步地，所述诊断产品所针对的样品为血液、视网膜组织或玻璃体液，优选静脉血液。
[0014]一种视网膜静脉阻塞诊断产品，包括检测cfDNA/NETs含量的试剂，检测MPO-DNA含量的试剂，检测H3Cit含量的试剂。
[0015]本专利技术的有益效果：
[0016]本专利技术所用检测标本为诊断对象的静脉血，易于获得，对诊断对象无创伤，具有可行性。通过检测诊断对象静脉血的NETs相关生物标志物，得出结论NETs的生物标志物与炎症和血栓形成有关，而视网膜静脉阻塞的病因与炎症和血栓形成有关，因此，通过检测NETs的生物标志物来进行视网膜静脉阻塞的早期诊断，可以在患者未出现明显的眼部症状时辅助诊断该疾病，并对其进行积极治疗，便于改善患者预后，减轻患者的经济压力。本专利技术的NETs相关生物标志物取材方便，作为视网膜静脉阻塞疾病的早期预警指标，检测灵敏，具有重要的临床指导意义，利于进一步研究NETs靶向治疗视网膜静脉阻塞。
附图说明
[0017]图1为视网膜静脉阻塞及对照组中性粒细胞计数、cfDNA,MPO-DNA和H3Cit的差异变化；
[0018]图2为视网膜静脉阻塞及对照组中性粒细胞计数、cfDNA,MPO-DNA和H3Cit的敏感性分析，其曲线下面积分别为0.859,0.871及0.928。
具体实施方式
[0019]为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，结合附图，对本专利技术进行详细阐述。
[0020]本专利技术采用病例-对照研究，按照RVO PPP诊断标准，将77位视网膜静脉阻塞患者，及无既往系统或者循环炎症及血栓性疾病、无既往黄斑水肿或接受抗-VEGF治疗、无血液系统肿瘤病史以及能够配合研究操作的48位对照组志愿者纳入本研究，记录每位患者及志愿者的年龄、性别、BMI、吸烟、饮酒史、糖尿病、高血压史等。
[0021]采集两组人员的血液，取3支血样(1管不加抗凝剂，2管加抗凝剂)，其中2支在室温下1900g离心15min，提取血清和血浆。循环样品(血清和血浆)保存在-80℃中，用于实验室检测。采集样本4小时后，全血将用于中性粒细胞计数。cfDNA定量使用PicoGreen dsDNA定量分析试剂盒(Invitrogen公司，美国)，根据说明书对血浆中游离DNA进行定量。MPO-DNA的定量使用固定相修饰的靶向MPO和dsDNA的特异性抗体。H3Cit的定量使用细胞死亡检测ELISA试剂盒(瑞士罗氏诊断公司)的抗组蛋白抗体，根据说明书对血浆样品中的H3Cit进行定量。各组连续数据以均数
±
标准差表示，两组间差异采用非配对t检验。分类变量以计数和比例表示，组间差异采用卡方分析。通过ROC方法，研究NETs相关生物标志物对RVO的潜在诊断效果。采用Pearson方法对NETs相关参数与炎症、血栓性指标之间的相关性进行分析，并对其线性相关性进行线性回归模拟。使用Graphpad Prism 8.3(Graphpad Software Inc)进行统计分析。p&lt;0.05被认为有统计学意义。
[0022]检测所有标本中中性粒细胞计数、NETs的生物标志物cf-DNA、MPO、H3Cit的含量及炎症因子CRP、VEGF、IL1、IL6和血栓形成标志物PT、APTT、TT、FIB的含量。进行统计学分析，RVO组与对照组在年龄、性别、BMI、吸烟、饮酒史、高血压史没有统计学差异。与对照组相比，RVO组中FBG、HbAlc增高、中性粒细胞计数、NETs的生物标志物cf-DNA、MPO、H3Cit、炎症因子及血栓形成标志物增多，如图1和表1所示。
[0023]如图1所示,与对照组相比，cfDNA含量(21.0
±
29.8vs7.9
±
0.6ng/ml，P＝0.004)，MPO-DNA含量(310.6
±...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.NETs的生物标志物在制备视网膜静脉阻塞诊断产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述NETs的生物标志物为NETs中的cfDNA、和/或MPO-DNA、和/或H3Cit。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述诊断产品为早期诊断产品。4.根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于，具体应用时，检测受检者血液、视网膜组织或玻璃体液中cfDNA/NETs、和/或MPO-DNA、和/或H3Cit的含量，并与正常人群进行对比，对比结果作为诊断依据之一；cfDNA/NETs、和/或MPO-DNA、和/或H3Cit在视网膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱玮，吴岩，
申请(专利权)人：常熟市第二人民医院，
类型：发明
国别省市：