FURIN基因DNA甲基化标志物及其检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种FURIN基因DNA甲基化标志物及其检测试剂盒，属于生物医药技术领域。本发明专利技术提供的DNA甲基化标志物为FURIN基因启动子区的DNA甲基化位点Chr15:91416118，DNA甲基化标志物的甲基化程度指示受试者高血压发病风险。本发明专利技术提供的FURIN基因DNA甲基化标志物可用于预测高血压发病风险，为高血压高危人群的筛查提供依据，也可以作为预防和控制高血压的干预靶点。本发明专利技术不仅有助于阐释FURIN缺乏作用于高血压的分子机制，也将为FURIN基因甲基化作为预防和控制高血压的药物靶点提供重要的流行病学证据。重要的流行病学证据。重要的流行病学证据。

【技术实现步骤摘要】
FURIN基因DNA甲基化标志物及其检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种FURIN基因DNA甲基化标志物及其检测试剂盒，属于生物医药


技术介绍

[0002]高血压既是一种心血管疾病，也是其它多种心脑血管疾病的重要危险因素。全球有67％的心脏病，54％的脑卒中由高血压引起，13.5％的死亡归因于高血压。全球成人高血压的患病率约为30％，目前我国高血压患者约有3.3亿，约占全球高血压患者的1/3。因此，高血压已是我国重要的公共卫生问题，严重威胁人类健康，如何有效地预防和控制高血压是目前我国面临的重大公共卫生挑战，寻找并发现更多高血压的潜在危险因素和干预靶点迫在眉睫。
[0003]利钠肽轴是机体应对外界环境刺激的重要的心脏内分泌调节系统，在维持机体水钠平衡、血压稳定和能量代谢平衡方面发挥着重要作用。利钠肽轴主要由心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠尿肽(brain natriuretic peptide,BNP)、C型钠尿肽(C-type natriuretic peptide,CNP)以及他们的受体构成。当血容量增加时，心肌细胞就会分泌并释放大量的无生物活性的心房钠尿肽前体(pro-atrial natriuretic peptide,pro-ANP)和脑钠尿肽前体(pro-brain natriuretic peptide,pro-BNP)，pro-ANP、pro-NNP进一步活化为有活性的ANP和BNP，并与其受体结合激活利钠肽轴，进而促进水钠代谢、降低血容量、扩张血管、促进能量代谢，从而维持心血管稳态。已有大量流行病学证据表明，利钠肽轴，尤其是ANP和BNP在高血压及其危险因素(肥胖、高血糖、动脉粥样硬化等)的发生发展过程中扮演重要角色。
[0004]将无活性的pro-ANP和pro-BNP转化为有活性的ANP和BNP的蛋白酶就是调控利钠肽轴功能的关键所在。Furin蛋白酶就是一种转化酶，可以将pro-BNP转化为BNP，通过利尿、尿钠排泄及血管舒张等机制参与血管的调节作用。基础研究和人群研究结果均提示，furin蛋白酶可能是预防和控制高血压的潜在干预靶点。作为连接基因与环境的媒介，DNA甲基化调控着基因的表达和功能，可以作为潜在的、可干预的药物靶点，因此，作为furin蛋白酶的编码基因，FURIN基因启动子区DNA甲基化可能抑制furin蛋白酶的表达，引起furin缺乏，从而参与高血压的发病过程。但是目前还没有报道一种合适的位点可作为预防和控制高血压的干预靶点。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，提供预测高血压发病风险的FURIN基因DNA甲基化标志物及其在预测高血压发病风险中的应用。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一种用于预测高血压发病风险的DNA甲基化标志物，所述DNA甲基化标志物为FURIN基因启动子区的DNA甲基化位点Chr15:91416118，所述的DNA甲基化标志物的甲基化程度指示受试者高血压发病风险。
[0007]进一步地，所述的DNA甲基化位点Chr15:91416118甲基化水平增加5％，高血压的发病风险增加32％。
[0008]本专利技术的第二个目的是提供一种用于检测所述的DNA甲基化标志物的引物对，所述的引物对为扩增DNA甲基化位点Chr15:91416118的上游引物和下游引物。
[0009]进一步地，所述的上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0010]进一步地，所述的下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示。
[0011]本专利技术的第三个目的是提供所述的DNA甲基化标志物或所述的引物对在制备用于预测高血压发病风险的试剂盒中的用途。
[0012]本专利技术的第四个目的是提供一种用于预测高血压发病风险的试剂盒，所述的试剂盒用于检测所述的FURIN基因DNA甲基化标志物。
[0013]进一步地，所述的试剂盒包括扩增DNA甲基化位点Chr15:91416118的上游引物和下游引物。
[0014]进一步地，所述的上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0015]进一步地，所述的下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示。
[0016]本专利技术的第五个目的是提供一种所述的DNA甲基化标志物的检测方法，包括如下步骤：
[0017]S1、提取DNA样本，并对所述的DNA样本进行亚硫酸盐处理；
[0018]S2、用引物对扩增亚硫酸盐处理后的样品，扩增产物；
[0019]S3、对扩增产物进行转录和酶切，得到转录和酶切产物；
[0020]S4、采用飞行质谱方法对转录和酶切产物进行检测，获取样品序列中的甲基化程度。
[0021]本专利技术的有益效果是：
[0022]本专利技术提供的FURIN基因DNA甲基化标志物可用于预测高血压发病风险，为高血压高危人群的筛查提供依据，也可以作为预防和控制高血压的干预靶点。本专利技术不仅有助于阐释FURIN缺乏作用于高血压的分子机制，也将为FURIN基因甲基化作为预防和控制高血压的药物靶点提供重要的流行病学证据。
附图说明
[0023]图1为FURIN基因启动子区域1个CpG位点发生甲基化的示意图。
具体实施方式
[0024]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0025]实施例1：
[0026]人群研究(包括2312例无心血管疾病的居民)发现低水平furin的人群收缩压、舒张压和平均动脉压水平都高于高水平furin的人群；并且在没有高血压的人群中，低水平furin(最低四分位水平组)的居民发生高血压的风险是高水平组(最高四分位水平组)1.46倍(P＝0.003)。该研究结果提示，FURIN蛋白缺乏可能是高血压的病因，然而，FURIN缺乏与高血压相关联的分子机制尚不清楚，但是，对FURIN参与高血压发病过程这一分子机制的研
究将有助于发现针对FURIN缺乏的药物靶点，从而促进高血压的预防和控制。作为连接基因与环境的媒介，DNA甲基化调控着基因的表达和功能，可以作为潜在的、可干预的药物靶点。因此，本专利技术对FURIN基因DNA甲基化在高血压发病中的作用开展了进一步研究。
[0027]我们在该研究队列中，纳入了1043例基线无高血压的居民，研究FURIN基因DNA甲基化与高血压发生风险的关联性。提取了每一位研究对象的全血DNA标本，运用目标区域测序技术检测了FURIN基因启动子区域各CpG位点甲基化水平，即利用ENSEMBL数据库查询人类FURIN基因(基因编号：ENSG00000140564)的启动子区域，该区域为Chromosome 15:91415936-91416189(GRCh37.P13，距TSS:+914bp to+1168bp)，在NCBI上截取该区域的核酸序列，将核酸序列导入EMBOSS Cpgpl本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于预测高血压发病风险的DNA甲基化标志物，其特征在于，所述DNA甲基化标志物为FURIN基因启动子区的DNA甲基化位点Chr15:91416118，所述的DNA甲基化标志物的甲基化程度指示受试者高血压发病风险。2.根据权利要求1所述的DNA甲基化标志物，其特征在于，所述的DNA甲基化位点Chr15:91416118甲基化水平增加5％，高血压的发病风险增加32％。3.一种用于检测权利要求1所述的DNA甲基化标志物的引物对，其特征在于，所述的引物对为扩增DNA甲基化位点Chr15:91416118的上游引物和下游引物。4.根据权利要求3所述的引物对，其特征在于，所述的上游引物的序列如SEQ ID NO.1所示；所述的下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示。5.权利要求1所述的DNA甲基化标志物或权利要求3所述的引物对在制备用于预测高血...

【专利技术属性】
技术研发人员：张明芝，何艳，彭浩，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：