检测塞内卡病毒抗体的多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了检测塞内卡病毒抗体的多肽及其应用。该多肽由eVP1‑1和eVP2‑1组成；所述eVP1‑1是P11或P12的多肽：P11、氨基酸序列为SEQ ID No.1的多肽，P12、氨基酸序列为SEQ ID No.1的第2‑16位的多肽；所述eVP2‑1是P21或P22的多肽：P21、氨基酸序列为SEQ ID No.2的多肽，P22、氨基酸序列为SEQ ID No.2的第2‑15位的多肽。以上述多肽制备的抗体检测试剂盒敏感性高，准确性高，操作简单、快速，适用于基层各级兽医部门和出入境检验检疫局对塞内卡病毒感染血清抗体的快速大量筛选检测。

【技术实现步骤摘要】
检测塞内卡病毒抗体的多肽及其应用本申请是申请号为201910548717.2、申请日为2019年06月24日、专利技术创造名称为“检测塞内卡病毒抗体的试剂及其所用多肽”的分案申请。
本专利技术涉及检测塞内卡病毒抗体的多肽及其应用。
技术介绍
塞内卡病毒病是由小核糖核酸病毒科塞内卡病毒属的A型塞内卡病毒引起的，主要感染猪的病毒性传染病，对不同年龄阶段的猪都易感。成年猪感染初期出现厌食、嗜睡和发热等症状，随后鼻镜部、口腔上皮、舌和蹄冠等部位的皮肤、黏膜产生水疱，继而发生继发性溃疡和破溃现象，严重时蹄冠部的溃疡可以蔓延至蹄底部，造成蹄壳松动甚至脱落，病猪出现跛行、站立困难以及多数传染病常见的体温升高、厌食和精神萎靡等症状。新生仔猪(7日龄以内)死亡率显著增加(高达30％～70％)，偶尔伴有腹泻症状。该病主要通过接触传播，可以引起猪的鼻吻、蹄部冠状带水泡病变，根据临床症状与口蹄疫、猪水疱病和水泡性口炎等疾病在临床上难以区分。塞内卡病毒的结构蛋白由VP0、VP2、VP3和VP1，4种蛋白组成，尤其是VP1与VP2蛋白其抗原性较强、相对保守，可刺激动物机体产生特异性免疫反应，成为塞内卡病毒病的诊断靶抗原。
技术实现思路
本专利技术所要解决的一个技术问题是如何提高塞内卡病毒抗体检测的特异性，从而更准确地诊断塞内卡病毒病。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了用于制备塞内卡病毒抗体检测试剂的成套多肽或用于制备塞内卡病毒病诊断试剂的成套多肽。本专利技术所提供的用于制备塞内卡病毒抗体检测试剂的成套多肽或用于制备塞内卡病毒病诊断试剂的成套多肽均由eVP1-1和eVP2-1组成；所述eVP1-1是P11、P12或P13的多肽：P11、氨基酸序列为SEQIDNo.1的多肽，P12、氨基酸序列为SEQIDNo.1的第2-16位的多肽，P13、在P12的多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基以与载体蛋白偶联得到的多肽；所述eVP1-2是P21、P22或P23的多肽：P21、氨基酸序列为SEQIDNo.2的多肽，P22、氨基酸序列为SEQIDNo.2的第2-15位的多肽，P23、在P22的多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基以与载体蛋白偶联得到的多肽。其中，SEQIDNo.1由16个氨基酸残基组成，第1位的半胱氨酸残基是为了与载体蛋白连接添加的连接臂，其它氨基酸残基来源于塞内卡病毒VP1蛋白；SEQIDNo.2由15个氨基酸残基组成，第1位的半胱氨酸残基是为了与载体蛋白连接添加的连接臂，其它氨基酸残基来源于塞内卡病毒VP2蛋白。上述成套多肽中，所述eVP1-1和所述eVP2-1的质量比本领域技术人员可根据对塞内卡病毒抗体检测效果确定，如可为4:6。上述成套多肽在制备检测塞内卡病毒抗体的试剂中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述成套多肽在制备塞内卡病毒病诊断抗原中的应用也属于本专利技术的保护范围。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了检测塞内卡病毒抗体的试剂或诊断塞内卡病毒病的试剂。本专利技术所提供的检测塞内卡病毒抗体的试剂或诊断塞内卡病毒病的试剂均由eVP1-1偶联物和eVP2-1偶联物组成；所述eVP1-1偶联物是上述eVP1-1和载体蛋白偶联得到的完全抗原；所述eVP2-1偶联物是由上述eVP2-1和载体蛋白偶联得到的完全抗原。上述试剂中，所述eVP1-1偶联物和所述eVP2-1偶联物的质量比本领域技术人员可根据对塞内卡病毒抗体检测效果确定，如可为4:6。上述试剂中，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、血蓝蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白、鼠血清白蛋白、甲状腺球蛋白或兔血清白蛋白。上述eVP1-1或上述eVP2-1也属于本专利技术的保护范围。上述eVP1-1或上述eVP2-1在制备检测塞内卡病毒抗体的试剂中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述eVP1-1或上述eVP2-1在制备塞内卡病毒病诊断抗原中的应用也属于本专利技术的保护范围。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了完全抗原。本专利技术所提供的完全抗原是上述eVP1-1偶联物或上述eVP2-1偶联物。上述完全抗原在制备检测塞内卡病毒抗体的试剂中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述应用中，所述检测塞内卡病毒抗体的试剂和所述塞内卡病毒病诊断抗原均可由所述eVP1-1偶联物和/或所述eVP2-1偶联物组成。实验证明，用塞内卡病毒的全长VP1重组蛋白或塞内卡病毒的全长VP2重组蛋白作为半抗原与载体蛋白偶联得到的偶联物作为包被原，不能有效地区分塞内卡病毒抗体与口蹄疫病毒抗体、猪水疱病病毒抗体和猪水泡性口炎病毒抗体。为了提高塞内卡病毒抗体检测的特异性，本专利技术从塞内卡病毒的全长VP1和塞内卡病毒的全长VP2分别选择优势抗原表位eVP1-1和eVP2-1，分别与载体蛋白偶联得到的偶联物(BSA-eVP1-1和/或BSA-eVP2-1)作为包被原，可以有效地区分塞内卡病毒抗体与口蹄疫病毒抗体、猪水疱病病毒抗体和猪水泡性口炎病毒抗体，提高了塞内卡病毒抗体检测的特异性。分别用BSA-eVP1-1和/或BSA-eVP2-1作为包被抗原制备的检测血清中的塞内卡病毒抗体的试剂盒可以将猪塞内卡病毒抗体阳性血清与猪口蹄疫病毒抗体阳性血清、猪水疱病病毒抗体阳性血清和猪水泡性口炎病毒抗体阳性血清进行准确区分。利用包被抗原为BSA-eVP1-1+BSA-eVP2-1的本专利技术TRFIA方法1与猪塞内卡病毒血清中和试验方法的总符合率为96.67％(阳性符合率为97.78％，阴性符合率为5.56％)；利用包被抗原为BSA-eVP1-1的本专利技术TRFIA方法2与猪塞内卡病毒血清中和试验方法的总符合率为91.11％(阳性符合率为85.56％，阴性符合率为96.67％)；利用包被抗原为BSA-eVP2-1的本专利技术TRFIA方法3与猪塞内卡病毒血清中和试验方法的总符合率为92.78％(阳性符合率为90％，阴性符合率为95.56％)。美国Biostone猪塞内卡病毒抗体检测试剂盒检测结果与猪塞内卡病毒血清中和试验方法的总符合率为75％(阳性符合率为97.78％，阴性符合率为52.22％)。本专利技术以BSA-eVP1-1和/或BSA-eVP2-1作为包被原制备的抗体检测试剂盒特异性强、敏感性高，准确性高，操作简单、快速，适用于基层各级兽医部门和出入境检验检疫局对塞内卡病毒感染血清抗体的快速大量筛选检测。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的pET32a(+)为Novagen公司产品。铕标记元素(Eu3+)为广州达瑞生物技术股份有限公司产品。兔抗山羊二抗为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.成套多肽，其特征在于：所述成套多肽由eVP1-1和eVP2-1组成；所述eVP1-1是P11或P12的多肽：/nP11、氨基酸序列为SEQ ID No.1的多肽，/nP12、氨基酸序列为SEQ ID No.1的第2-16位的多肽；/n所述eVP2-1是P21或P22的多肽：/nP21、氨基酸序列为SEQ ID No.2的多肽，/nP22、氨基酸序列为SEQ ID No.2的第2-15位的多肽。/n

【技术特征摘要】
1.成套多肽，其特征在于：所述成套多肽由eVP1-1和eVP2-1组成；所述eVP1-1是P11或P12的多肽：
P11、氨基酸序列为SEQIDNo.1的多肽，
P12、氨基酸序列为SEQIDNo.1的第2-16位的多肽；
所述eVP2-1是P21或P22的多肽：
P21、氨基酸序列为SEQIDNo.2的多肽，
P22、氨基酸序列为SEQIDNo.2的第2-15位的多肽。

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【专利技术属性】
技术研发人员：孙雨，李晓霞，王传彬，赵晓春，王睿男，杨林，肖颖，宋晓晖，王美君，蒋菲，李硕，白崇生，央珍，刘林青，邹联斌，肖开提·阿不都克里木，王文，孙航，毕一鸣，马英，扎西卓玛，林汉亮，亢文华，曾邦权，刘健鹏，徐琦，苏晓慧，刘玉良，李舵，任娟，马晓燕，薛文，秦菊，杨天意，
申请(专利权)人：中国动物疫病预防控制中心农业农村部屠宰技术中心，
类型：发明
国别省市：北京;11