一种柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒、其制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒、其制备方法及应用，属于基因工程和生物医药技术领域。所述柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒，是由表达柯萨奇病毒B5型的P1衣壳蛋白基因和3CD蛋白酶基因的重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞，培养至90％以上数量的所述Sf9昆虫细胞感染病变后所得。本发明专利技术还公开了上述柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒的制备方法及应用。本发明专利技术的柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒与野生病毒颗粒具有相似的外观结构及大小，免疫原性达到甚至超过了野生灭活病毒所具有的程度，可以用于制备柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒疫苗。

【技术实现步骤摘要】
一种柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒、其制备方法及应用
本专利技术涉及一种柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒、其制备方法及应用，属于基因工程和生物医药

技术介绍
柯萨奇病毒B5型(CoxsackiecirusB5，简称CB5)属于小核糖核酸病毒科肠道病毒属，是肠道病毒B组的重要成员。CB5是一个二十面体球形颗粒，直径为24-30nm，由一个非折叠衣壳和一个约7400个核苷酸的单链核糖核酸组成，且含有一个开放阅读框，其两侧分别是5′非翻译区和带有多聚A尾的3′非翻译区。它编码大约2100个氨基酸的多蛋白，该蛋白将被进一步切割形成三种前体蛋白，称为P1、P2和P3。P1裂解成4个结构病毒蛋白，分别为VP1、VP2、VP3和VP4。而P2和P3切割形成7种非结构蛋白，即由P2裂解成的2A、2B和2C，以及由P3裂解成的3A、3B、3C和3D。肠道病毒的病毒衣壳由60个单元的病毒结构蛋白组成；每个单元由VP1、VP2、VP3和VP4组成。外衣壳表面由VP1、VP2和VP3形成，而VP4位于衣壳内部。VP1包含能中和病毒的重要表位，具有抗原性，在病毒功能中起本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒，其特征在于，是由表达柯萨奇病毒B5型的P1衣壳蛋白基因和3CD蛋白酶基因的重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞，培养至90％以上数量的所述Sf9昆虫细胞感染病变后所得。/n

【技术特征摘要】
20200714 CN 20201067552311.一种柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒，其特征在于，是由表达柯萨奇病毒B5型的P1衣壳蛋白基因和3CD蛋白酶基因的重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞，培养至90％以上数量的所述Sf9昆虫细胞感染病变后所得。


2.根据权利要求1所述的柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒，其特征在于，所述表达柯萨奇病毒B5型的P1衣壳蛋白基因和3CD蛋白酶基因的重组杆状病毒的制备方法是：
将经过密码子优化的柯萨奇病毒B5型的衣壳蛋白P1基因和经过密码子优化的3CD蛋白酶基因，与昆虫杆状病毒表达系统的穿梭载体pOET5连接，得到pOET5-CB5-P1-3CD重组质粒；
然后将上述pOET5-CB5-P1-3CD重组质粒与昆虫杆状病毒基因组flashBACDNA共同转染Sf9昆虫细胞，培养至90％以上数量的所述Sf9昆虫细胞感染病变后，获得表达柯萨奇病毒B5型的P1衣壳蛋白基因和3CD蛋白酶基因的重组杆状病毒；
其中，所述经过密码子优化的衣壳蛋白P1基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述经过密码子优化的3CD蛋白酶基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.一种柯萨奇病毒B5型病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：制备pOET5-CB5-P1-3CD重组质粒
分别合成经过密码子优化的柯萨奇病毒B5型的衣壳蛋白P1基因和经过密码子优化的3CD蛋白酶基因，然后分别连接到昆虫杆状病毒的穿梭载体pOET5的P10启动子之后的EcoRⅠ/NotⅠ酶切位点以及Ph启动子之后的BamHⅠ/HindⅢ酶切位点，得到pOET5-CB5-P1-3CD重组质粒；
其中，所述经过密码子优化的衣壳蛋白P1基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述经过密码子优化的3CD蛋白酶基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；
步骤2：制备重组昆虫杆状病毒
取步骤1得到的pOET5-CB5-P1-3CD重组质粒，与昆虫杆状病毒基因组flashBACDNA共同转染Sf9昆虫细胞，培养至90％以上数量的所述Sf9昆虫细胞感染病变后，收集上清液；再感染对数生长期的Sf9昆虫细胞，培养至90％以上数量的所述Sf9昆虫细胞感染病变后，得到重组昆虫...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘启亮，刘洪波，章宁，漆琪，
申请(专利权)人：桂林医学院，
类型：发明
国别省市：广西;45