一种用于检测牛结节性皮肤病病毒抗体的多肽制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测牛结节性皮肤病病毒抗体的多肽。本发明专利技术提供的用于检测牛结节性皮肤病病毒抗体的多肽为eA33

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测牛结节性皮肤病病毒抗体的多肽


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种用于检测牛结节性皮肤病病毒抗体的多肽。

技术介绍

[0002]牛结节性皮肤病(lumpy skin disease,LSD)主要传播方式为节肢动物媒介的机械性传播。牛结节性皮肤病病毒(LSDV)与山羊痘病毒(Goatpox virus，GPV)、绵羊痘病毒(Sheeppox virus，SPV)一样，同属于痘病毒科(Poxviridae)、山羊痘病毒属(Capripoxvirus，CaPV)。该病毒只有1个血清型，代表毒株为南非Neethling株。该病毒可在羔羊、犊牛肾或辜丸细胞、绵羊胚胎肾和肺细胞、鸡胚成纤维细胞等原代细胞，以及牛肾细胞、非洲绿猴肾等传代细胞中增殖并产生细胞病变。该病毒具有细胞结合特性，采用超声波破坏细胞，能够使病毒释放到细胞外。
[0003]LSDV的自然宿主主要是牛，各品种牛均易感，无明显的品种特异性。家兔、绵羊、山羊、长颈鹿和黑羚羊等也可能被感染，但没有证据表明LSDV能感染人。临床和亚临床病牛是主要的传播来源，其中活牛移动是其广泛传播的重要原因。LSDV广泛存在于皮肤、真皮损伤部位、结痴、唾液、鼻汁、牛乳、精液、肌肉、脾脏、淋巴结等处。眼、鼻、口、直肠、乳腺和生殖器等形成溃疡时，其结节迅速溃烂，其分泌物中都含有病毒粒子，如暴露到发病动物产生的气溶胶，即可被感染。该病自然感染的潜伏期2～5周。病牛体温升高，可达41℃以上，呈持续稽留热型。初期表现为鼻炎、结膜炎、角膜炎。试验性感染后第4～12天体表皮肤出现硬实、圆形、隆起、直径1～5cm的结节，触摸有痛感，尤其是头部、颈部、胸部、会阴、乳房和四肢。皮肤结节位于表皮和真皮，可集聚成不规则的肿块，最后坏死。病牛体表淋巴结肿大，以肩前、腹股沟外、股前、后肢和耳下淋巴结最为突出。眼、鼻、口腔、直肠、乳房和外生殖器等处黏膜也可形成结节和溃疡。泌乳牛可发生乳房炎，泌乳量下降，孕牛发生流产，公牛病后不育，肉牛生产性能下降，坏死性结节易受苍蝇叮咬，脱落后在皮肤上留下深洞，皮张无法利用。解剖皮下组织可见灰红色浆液浸润。切开结节，腔内含有干酪样灰白色的坏死组织，有的有脓血，结节深达皮下组织或至肋骨组织。体表、咽、气管、肺、瘤胃、皱胃、肾脏表面都可能有类似的结节。在病初，受损细胞内可见嗜酸性包涵体。根据这些临床症状和病理变化特征可进行初步诊断，但是确诊需要进一步进行实验室病原学和血清学检测。
[0004]LSD的主要鉴别诊断为牛疱疹病毒2型(BoHV
‑
2)引起的假性LSD。这通常是一种较温和的临床症状，以浅层结节为特征，仅类似于LSD的早期阶段。核内包涵体和病毒合胞体是LSD中未见过的BoHV
‑
2感染的组织病理学特征。其他鉴别诊断(针对皮肤病变)包括：皮肤病、皮肤癣菌病、牛皮藓、光敏症、放线杆菌病、荨麻疹、昆虫叮咬、贝氏丝虫病、诺卡氏菌病、蠕形螨病、盘尾丝虫病、假牛痘和牛痘。黏膜病变的鉴别诊断包括：口蹄疫、蓝舌病、牛病毒性腹泻、恶性卡他热、牛传染性鼻气管炎和牛流行性口炎。
[0005]目前尚缺乏一种特异性足够高的牛结节性皮肤病病毒抗体检测方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种用于检测牛结节性皮肤病病毒抗体的多肽。
[0007]第一方面，本专利技术要求保护一种多肽。
[0008]本专利技术所要求保护的多肽为eA33
‑
1多肽。
[0009]所述eA33
‑
1多肽为如下任一所示：
[0010](A1)氨基酸序列为SEQ ID No.5的多肽；
[0011](A2)氨基酸序列为SEQ ID No.5的第2
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33位的多肽；
[0012](A3)在(A2)所示多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基后得到的能够与载体蛋白偶联的多肽。
[0013]其中，SEQ ID No.5由33个氨基酸残基组成，第1位的半胱氨酸残基是为了与载体蛋白连接添加的连接臂，其它氨基酸残基来源于牛结节性皮肤病病毒A33蛋白。
[0014]第二方面，本专利技术要求保护一种偶联物。
[0015]本专利技术所要求保护的偶联物为eA33
‑
1偶联物。
[0016]所述eA33
‑
1偶联物为由前文第一方面中所述eA33
‑
1多肽和载体蛋白偶联得到的完全抗原。
[0017]其中，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、血蓝蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白、鼠血清白蛋白、甲状腺球蛋白或兔血清白蛋白等。
[0018]在本专利技术的一个具体实施方式中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白(BSA)。
[0019]第三方面，本专利技术要求保护如下任一生物材料：
[0020](B1)核酸分子，为能够编码前文第一方面所述多肽的核酸分子；
[0021](B2)表达盒，为含有(B1)中所述核酸分子的表达盒；
[0022](B3)重组载体，为含有(B1)中所述核酸分子的重组载体；
[0023](B4)重组菌，为含有(B1)中所述核酸分子的重组菌；
[0024](B5)转基因细胞系，为含有(B1)中所述核酸分子的转基因细胞系。
[0025]第四方面，本专利技术要求保护前文第一方面所述的多肽或前文第二方面所述的偶联物在如下任一中的应用：
[0026](C1)制备检测牛结节性皮肤病病毒抗体的试剂或试剂盒；
[0027](C2)制备牛结节性皮肤病病毒诊断抗原。
[0028]第五方面，本专利技术要求保护含有前文第一方面所述的多肽或前文第二方面所述的偶联物的试剂盒。
[0029]进一步地，所述试剂盒用于检测牛结节性皮肤病病毒抗体；在所述试剂盒中，前文第一方面所述的多肽或前文第二方面所述的偶联物作为包被抗原。
[0030]更进一步地，所述试剂盒可为化学发光免疫分析试剂盒；所述试剂盒中还可含有辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗、包被缓冲液、洗涤液、二抗稀释液和/或校准品；所述二抗为能够抗所述牛结节性皮肤病病毒抗体的抗体。
[0031]第六方面，本专利技术要求保护前文第三方面所述生物材料在制备前文第一方面所述的多肽或前文第二方面所述的偶联物或前文第五方面所述的试剂盒中的应用。
[0032]第七方面，本专利技术要求保护前文第三方面所述生物材料在如下任一中的应用：
[0033](C1)制备检测牛结节性皮肤病病毒抗体的试剂或试剂盒；
CO2温箱中培养1至2日，直到有70％至80％的细胞形成单层。将50μl已经稀释好的待检血清与含100TCID50/50μl的牛结节性皮肤病新疆分离株LSDV/Xinjiang/2019株(记载于“我国首个LSDV分离株P32、GPCR和RPO30基因克隆及其遗传演化关系与蛋白结构分析，兰州大学，学位论文，DOI：10.27204/d.cnki.glzhu.2020.001024”一文，公众可从申请人处获得，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽，为如下任一所示：(A1)氨基酸序列为SEQ ID No.5的多肽；(A2)氨基酸序列为SEQ ID No.5的第2
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33位的多肽；(A3)在(A2)所示多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基后得到的能够与载体蛋白偶联的多肽。2.一种偶联物，为由权利要求1中所述多肽和载体蛋白偶联得到的完全抗原。3.如下任一生物材料：(B1)核酸分子，为能够编码权利要求1中所述多肽的核酸分子；(B2)表达盒，为含有(B1)中所述核酸分子的表达盒；(B3)重组载体，为含有(B1)中所述核酸分子的重组载体；(B4)重组菌，为含有(B1)中所述核酸分子的重组菌；(B5)转基因细胞系，为含有(B1)中所述核酸分子的转基因细胞系。4.权利要求1所述的多肽或权利要求2所述的偶联物在如下任一中的应用：(C1)制备检测牛结节性皮肤病病毒抗体的试剂或试剂盒；(C2)制备牛结节性皮肤病病毒诊断抗原。5.含有权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙雨，郭宇，王传彬，王建龙，包和平，萨茹拉，王旭红，高登军，赵晓春，杨林，顾小雪，魏巍，王美君，葛忠源，杨琪，云涛，苏胜杰，戴晓光，张伶俐，赵俭波，张存瑞，孙航，冯冰，陈玲，
申请(专利权)人：中国动物疫病预防控制中心农业农村部屠宰技术中心，
类型：发明
国别省市：