鸡白痢沙门菌脂多糖的提取及其应用制造技术

本发明专利技术公开了鸡白痢沙门菌脂多糖的提取及其应用。本发明专利技术提供了鸡白痢沙门菌脂多糖在如下中的应用：1)制备检测鸡白痢沙门菌产品；2)制备检测鸡白痢沙门菌抗体产品。本发明专利技术提取了鸡白痢沙门菌脂多糖，以鸡白痢沙门菌脂多糖作为抗原检测抗体会提高体系的敏感性和特异性，将假阳性、假阴性的检测情况大大降低。建立并优化了鸡白痢沙门菌抗体的间接ELISA方法、荧光微球定量层析法、化学发光法，可为临床检测鸡白痢沙门菌感染鸡和种鸡群净化工作奠定基础。基础。

【技术实现步骤摘要】
鸡白痢沙门菌脂多糖的提取及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及鸡白痢沙门菌脂多糖的提取及其应用。

技术介绍

[0002]鸡白痢是由鸡白痢沙门菌引起的一种鸡的常见细菌性传染病，主要引起鸡的败血症和雏鸡白痢。雏鸡感染呈急性败血症，发病率和死亡率都较高；成年鸡感染多表现为慢性或隐性感染，死亡率不高，但成为带菌者，导致产量率下降，孵化率降低，可对养禽业造成严重的经济损失。随着家禽产业的飞速发展，沙门菌病已经成为最重要的蛋媒细菌病之一，北美和欧盟的诸多国家都开展了禽群沙门菌病的净化工作，且成功控制了鸡白痢和禽伤寒沙门菌感染。美国1935年起实施国家家禽改良计划，到1967年即基本根除了种禽鸡白痢，1978年至今种禽和商品禽群中几乎未检出鸡白痢沙门菌，到1985年有30个州扑灭了鸡和火鸡的白痢和伤寒。世界动物卫生组织WAHIS系统显示，截止2015年，鸡白痢仍在中国、韩国、印度、巴西、阿根廷、英国、美国等亚洲、非洲、南美洲、欧洲、北美洲的19个国家中存在和流行，禽伤寒仍在亚洲、非洲、南美洲、东欧的28个发展中国家中存在和流行。
[0003]鸡白痢沙门菌目前尚无获得批准的有效疫苗可用于预防，禽场普遍采用药物控制该病，但常年大量使用抗菌药物造成多重耐药现象明显，无法获得满意的疗效。而经卵垂直传播又是沙门菌在禽群中的重要传播方式，因此对种鸡群实施沙门菌感染净化是当前最为有效的防控方法，《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》要求到2020年全国所有种鸡场沙门菌病达到净化标准。监测种鸡场的沙门菌感染情况是净化工作的基础，需要敏感性、特异性好的检测方法鉴定沙门菌阳性种鸡，进而采取淘汰措施。目前国内使用的检测方法是OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》推荐的鸡白痢沙门菌抗体检测方法:平板凝集试验，但该方法敏感性、特异性有限，容易出现假阴性、假阳性结果，且国产检测试剂批次间差异较大，导致在实际应用中严重影响淘汰阳性鸡的鉴定和净化效果的评估。因此国内迫切需要一种敏感性、特异性较好的鸡白痢沙门菌抗体检测方法。
[0004]根据沙门菌O抗原谱的不同，沙门菌被分为多个血清群，鸡白痢沙门菌O抗原的抗原式为O1、O9和O12，属于D血清群，D群沙门菌中还有临床上常见的另一种沙门菌-肠炎沙门菌。O抗原为菌体细胞壁的耐热多糖抗原，其主要成分是含有脂质A、O－多糖侧链和核心寡糖的脂多糖(LPS)，具有种、型、特异性，相较于全菌抗原来说，抗原种类单一，抗原纯净度高。

技术实现思路

[0005]本专利技术的一个目的是提供鸡白痢沙门菌脂多糖的用途。
[0006]本专利技术提供鸡白痢沙门菌脂多糖在如下1)-7)中至少一种中的应用：
[0007]1)制备检测鸡白痢沙门菌产品；
[0008]2)制备检测鸡白痢沙门菌抗体产品；
[0009]3)制备检测待测样品中是否感染或含有鸡白痢沙门菌的产品；
[0010]4)制备检测待测样品中是否感染或含有鸡白痢沙门菌抗体的产品；
[0011]5)检测鸡白痢沙门菌；
[0012]6)检测鸡白痢沙门菌抗体；
[0013]7)作为检测鸡白痢沙门菌或其抗体的抗原中的应用。
[0014]上述应用中，所述鸡白痢沙门菌脂多糖中蛋白含量大于等于200μg/mL。
[0015]上述应用中，所述鸡白痢沙门菌脂多糖中多糖含量大于等于500μg/mL。
[0016]上述应用中，所述鸡白痢沙门菌脂多糖源自鸡白痢沙门菌标准株和鸡白痢沙门菌变异株。
[0017]上述应用中，所述鸡白痢沙门菌标准株为CVCC526；所述鸡白痢沙门菌变异株为CVCC530。
[0018]上述应用中，所述鸡白痢沙门菌脂多糖按照如下方法制备：用热酚水法提取鸡白痢沙门菌标准株和鸡白痢沙门菌变异株混合后菌体，得到脂多糖；
[0019]具体步骤如下：
[0020]1)培养鸡白痢沙门菌标准株CVCC526和鸡白痢沙门菌变异株CVCC530，混合两种菌培养液后，收集菌体；
[0021]2)将所述菌体用苯酚抽提，收集酚相；
[0022]3)再用含有饱和醋酸钠的甲醇溶液沉淀酚相，收集沉淀，得到脂多糖粗提液；
[0023]4)再将所述脂多糖粗提液依次用三氯乙酸沉淀蛋白杂质、超速离心去除蛋白质、透析袋透析，得到脂多糖。
[0024]上述应用中，所述产品为间接ELISA检测试剂盒、化学发光法检测试剂盒或荧光微球定量层析检测试剂盒。
[0025]本专利技术另一个目的是提供如下试剂盒：
[0026]本专利技术提供了一种检测鸡白痢沙门菌或其抗体的间接ELISA检测试剂盒，其抗原为上述鸡白痢沙门菌脂多糖。
[0027]本专利技术还提供了一种检测鸡白痢沙门菌或其抗体的化学发光法检测试剂盒，其抗原为上述鸡白痢沙门菌脂多糖。
[0028]本专利技术还提供了一种检测鸡白痢沙门菌或其抗体的荧光微球定量层析检测试剂盒，其检测线由上述鸡白痢沙门菌脂多糖形成。
[0029]本专利技术还有一个目的是提供一种制备脂多糖的方法。
[0030]本专利技术提供的方法，用热酚水法提取鸡白痢沙门菌标准株和鸡白痢沙门菌变异株混合后菌体，得到脂多糖。
[0031]所述用热酚水法提取鸡白痢沙门菌标准株CVCC526和鸡白痢沙门菌变异株CVCC530混合后菌体，得到脂多糖的方法包括如下步骤：
[0032]具体步骤如下：
[0033]1)培养鸡白痢沙门菌标准株CVCC526和鸡白痢沙门菌变异株CVCC530，混合两种菌培养液后，收集菌体；
[0034]2)将所述菌体用苯酚抽提，收集酚相；
[0035]3)再用含有饱和醋酸钠的甲醇溶液沉淀酚相，收集沉淀，得到脂多糖粗提液；
[0036]4)再将所述脂多糖粗提液依次用三氯乙酸沉淀蛋白杂质、超速离心去除蛋白质、
透析袋透析，得到脂多糖。
[0037]上述4)具体为：向3)得到的粗提液中加入终浓度为5％(体积百分含量)的三氯乙酸，室温搅拌15min后，10000g离心15min，弃去沉淀，上清液用蒸馏水透析(透析袋截留分子量为3500道尔顿)过夜，换液2次(每一次至少4000mL)，收集透析袋内容物，此即纯化的LPS(热酚水法)。
[0038]本专利技术提取了鸡白痢沙门菌脂多糖，以鸡白痢沙门菌脂多糖作为抗原检测抗体会提高体系的敏感性和特异性，将假阳性、假阴性的检测情况大大降低。国内外开展了检测沙门菌抗体ELISA方法的研制工作，但主要针对肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌。本专利技术首次采用世界动物卫生组织《陆生动物诊断试验和疫苗手册》推荐的热酚水法提取了鸡白痢沙门菌脂多糖作为抗原，建立并优化了鸡白痢沙门菌抗体的间接ELISA方法、荧光微球定量层析法、化学发光法，可为临床检测鸡白痢沙门菌感染鸡和种鸡群净化工作奠定基础。
附图说明
[0039]图1为鸡白痢沙门菌脂多糖染图。
具体实施方式
[0040]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鸡白痢沙门菌脂多糖在如下1)-7)中至少一种中的应用：1)制备检测鸡白痢沙门菌产品；2)制备检测鸡白痢沙门菌抗体产品；3)制备检测待测样品中是否感染或含有鸡白痢沙门菌的产品；4)制备检测待测样品中是否感染或含有鸡白痢沙门菌抗体的产品；5)检测鸡白痢沙门菌；6)检测鸡白痢沙门菌抗体；7)作为检测鸡白痢沙门菌或其抗体的抗原中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述鸡白痢沙门菌脂多糖中蛋白含量大于等于200μg/mL。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述鸡白痢沙门菌脂多糖中多糖含量大于等于500μg/mL。4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：所述鸡白痢沙门菌脂多糖源自鸡白痢沙门菌标准株和鸡白痢沙门菌变异株。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述鸡白痢沙门菌标准株为CVCC526；所述鸡白痢沙门菌变异株为CVCC5...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾小雪，李丹，刘洋，朱国强，王传彬，刘颖昳，徐琦，刘玉良，宋晓晖，
申请(专利权)人：中国动物疫病预防控制中心农业农村部屠宰技术中心，
类型：发明
国别省市：