细胞免疫疗法组合物及其用途制造技术

本公开涉及包含被嵌合吞噬受体和嵌合抗原受体/或T细胞受体结合蛋白修饰的免疫细胞或细胞子集的组合的细胞免疫疗法组合物，以及使用此类细胞免疫疗法组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞免疫疗法组合物及其用途关于序列表的声明与本申请相关的序列表以文本文件形式提供以替代纸质副本，并且通过引用在此并入本说明书。包含序列表的文本文件命名为200265_407WO_SEQUENCE_LISTING.txt。该文本文件大小为479KB，于2019年3月26日创建，并通过EFS-Web以电子形式提交。
技术介绍
用靶向癌症抗原的基因工程改造的受体修饰的免疫细胞(例如，T细胞)已证实在恶性血液病中取得了临床成功(例如，白血病中的CD19特异性嵌合抗原受体疗法)。仅举几个例子，使用靶向CEA、GD2、间皮素、IL13Rα、HER2、FAP和L1CAM的工程化受体，通过过继细胞免疫疗法治疗实体瘤的许多临床试验正在进行中。工程化受体包括嵌合抗原受体(CAR)和亲和性增强的T细胞受体(TCR)。然而，对实体瘤的治疗存在独特的挑战，包括：向肿瘤部位运输，到达肿瘤微环境的物理障碍，应激代谢环境和免疫抑制机制(例如，免疫检查点分子的表达，抑制性细胞因子的产生)。正在进行过继免疫治疗中增加免疫细胞持久性和活性的努力。附图说明图1是显示通过使用本公开的细胞免疫疗法组合物的组合而实现细胞消除的不同机制的示意图。表达嵌合吞噬受体(CER)的细胞(右)利用吞噬作用机制内化并杀死细胞隔室内的靶细胞，而表达CAR或TCR的细胞(左)则通过释放溶酶分子(如颗粒酶和穿孔素)来裂解靶细胞，或诱导死亡配体(例如，Fas配体)以“爆破”细胞。具有溶解性细胞和吞食性(phagocytic)细胞的免疫疗法组合物的组合可用于增强过继细胞疗法(ACT)。图2是显示本公开用于过继细胞免疫疗法的示例性治疗方法的示意图，所述过继细胞免疫疗法利用通过细胞溶解和吞噬消除靶细胞的修饰的免疫细胞的组合。去除白细胞后，将移植物分成确定的细胞群。使用嵌合吞噬受体(CER)转导CD4+T细胞，改受体利用吞噬机制特异性吞噬靶细胞。使用促进抗原特异性细胞溶解的嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)转导CD8+T细胞。然后将细胞离体扩增，并以确定比例将其重新引入患者体内用以靶向表达抗原的肿瘤细胞的地方。利用了细胞消除的吞食模式和细胞溶解模式的自体细胞输注可以组合工作。图3是示例性体外共培养实验的示意图。将CD8+T细胞激活并用编码人乳头瘤病毒16(HPV16)E7蛋白特异性TCR的慢病毒盒转导，而将来自同一移植物的CD4+T细胞激活并用编码CER的慢病毒转导。将这两组细胞均离体扩增，并以1:1比例组合，并与HPV16E7+头颈部鳞状细胞癌细胞(SCC152)共培养。图4是显示在共培养测定中caspase阳性SCC152靶细胞的数量的柱状图，该测定使用HPV16E7TCR转导的CD8+T细胞和使用对照或选择的CER转导的CD4+T细胞，如x轴所示。通过定量来自caspase3/7凋亡试剂的红色荧光强度来测量caspase的强度，所述caspase3/7凋亡试剂将活化的caspase3/7识别基序与裂解时发荧光的红色试剂偶联。在6小时后，将caspase3/7凋亡试剂添加到共培养测定中，并使用BZ-X710Keyence显微镜和杂交捕获软件检测荧光。类似地确定SCC152靶细胞(使用绿色荧光蛋白(GFP)转导)。Y轴表示caspase阳性靶点％(caspase事件#/GFP靶细胞#)*100。图5是显示在共培养测定中定量的SCC152靶细胞中caspase的强度的柱状图，该测定含有使用HPV16E7TCR转导的CD8+T细胞和使用对照或选择的CER转导的CD4+T细胞，如x轴所示。通过定量来自caspase3/7凋亡试剂的红色荧光强度来测量caspase的强度，所述caspase3/7凋亡试剂将活化的caspase3/7识别基序与裂解时发荧光的红色试剂偶联。在6小时后，将caspase3/7凋亡试剂添加到共培养测定中，并使用BZ-X710Keyence显微镜和杂交捕获软件检测荧光。Y轴表示以任意单位(a.u)计的caspase试剂的强度。图6是共培养测定的荧光显微照片，该测定含有1:1比例的使用HPV16E7TCR转导的CD8+T细胞以及使用对照转导的CD4+T细胞(蓝色)，以及SCC152细胞(绿色)。红色信号(代表性红色信号用白色箭头指示)是来自caspase试剂的荧光信号，在6小时后将该试剂添加到共培养测定中。图7是共培养测定的荧光显微照片，该测定含有1:1比例的使用HPV16E7TCR转导的CD8+T细胞以及使用CER5转导的CD4+T细胞(蓝色)，以及SCC152细胞(绿色)。红色信号(代表性红色信号用白色箭头指示)是来自caspase试剂的荧光信号，在6小时后将该试剂添加到共培养测定中。图8是共培养测定的荧光显微照片，该测定含有1:1比例的使用HPV16E7TCR转导的CD8+T细胞以及使用CER17转导的CD4+T细胞(蓝色)，以及SCC152细胞(绿色)。红色信号(代表性红色信号用白色箭头指示)是来自caspase试剂的荧光信号，在6小时后将该试剂添加到共培养测定中。图9是共培养测定的荧光显微照片，该测定含有1:1比例的使用HPV16E7TCR转导的CD8+T细胞以及使用CER19转导的CD4+T细胞(蓝色)，以及SCC152细胞(绿色)。红色信号(代表性红色信号用白色箭头指示)是来自caspase试剂的荧光信号，在6小时后将该试剂添加到共培养测定中。图10是共培养测定的荧光显微照片，该测定含有1:1比例的使用HPV16E7TCR转导的CD8+T细胞以及使用CER21转导的CD4+T细胞(蓝色)，以及SCC152细胞(绿色)。红色信号(代表性红色信号用白色箭头指示)是来自caspase试剂的荧光信号，在6小时后将该试剂添加到共培养测定中。图11是共培养测定的荧光显微照片，该测定含有1:1比例的使用HPV16E7TCR转导的CD8+T细胞以及使用CER23转导的CD4+T细胞(蓝色)，以及SCC152细胞(绿色)。红色信号(代表性红色信号用白色箭头指示)是来自caspase试剂的荧光信号，在6小时后将该试剂添加到共培养测定中。图12是共培养测定的荧光显微照片，该测定含有1:1比例的使用HPV16E7TCR转导的CD8+T细胞以及使用CER26转导的CD4+T细胞(蓝色)，以及SCC152细胞(绿色)。红色信号(代表性红色信号用白色箭头指示)是来自caspase试剂的荧光信号，在6小时后将该试剂添加到共培养测定中。图13是共培养测定的荧光显微照片，该测定含有1:1比例的使用HPV16E7TCR转导的CD8+T细胞以及使用CER27转导的CD4+T细胞(蓝色)，以及SCC152细胞(绿色)。红色信号(代表性红色信号用白色箭头指示)是来自caspase试剂的荧光信号，在6小时后将该试剂添加到共培养测定中。图14是共培养测定的荧光显微照片，该测定含有1:1比例的使用HPV16E7TCR转导的CD8+T细胞以及使用CER103B转导的CD4+T细胞(蓝色)，以及SCC152细胞(绿色)。红本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合细胞免疫疗法组合物，所述组合物包含：/n(a)第一组合物，所述第一组合物包含含有第一嵌合吞噬受体(CER)的CD4+T细胞，所述第一嵌合吞噬受体(CER)包含：/n胞外域，所述胞外域包含结合第一靶抗原的结合结构域，/n吞噬信号传导结构域，和/n跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域；和/n(b)第二组合物，所述第二组合物包含含有第二CER的CD8+T细胞，所述第二CER包含：/n胞外域，所述胞外域包含结合第二靶抗原的结合结构域，/n吞噬信号传导结构域，和/n跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180328 US 62/649,541;20180404 US 62/652,838;20181.一种组合细胞免疫疗法组合物，所述组合物包含：
(a)第一组合物，所述第一组合物包含含有第一嵌合吞噬受体(CER)的CD4+T细胞，所述第一嵌合吞噬受体(CER)包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第一靶抗原的结合结构域，
吞噬信号传导结构域，和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域；和
(b)第二组合物，所述第二组合物包含含有第二CER的CD8+T细胞，所述第二CER包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第二靶抗原的结合结构域，
吞噬信号传导结构域，和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域。


2.一种组合细胞免疫疗法组合物，所述组合物包含：
(a)第一组合物，所述第一组合物包含含有嵌合吞噬受体(CER)的CD4+T细胞，所述嵌合吞噬受体(CER)包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第一靶抗原的结合结构域，
吞噬信号传导结构域，和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域；和
(b)第二组合物，所述第二组合物包含含有嵌合抗原受体(CAR)的CD8+T细胞，所述嵌合抗原受体(CAR)包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第二靶抗原的结合结构域，
吞噬信号传导结构域，和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述胞内信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述胞内信号传导结构域。


3.一种组合细胞免疫疗法组合物，所述组合物包含：
(a)第一组合物，所述第一组合物包含含有第一嵌合吞噬受体(CER)的CD4+T细胞，所述第一嵌合吞噬受体(CER)包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第一靶抗原的结合结构域，
吞噬信号传导结构域，和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域；和
(b)第二组合物，所述第二组合物包含含有重组T细胞受体(TCR)的CD8+T细胞，所述重组T细胞受体(TCR)结合第二靶抗原。


4.一种组合细胞免疫疗法组合物，所述组合物包含：
(a)第一组合物，所述第一组合物包含含有第一嵌合吞噬受体(CER)的B细胞，所述第一嵌合吞噬受体(CER)包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第一靶抗原的结合结构域，
吞噬信号传导结构域，和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域；和
(b)第二组合物，所述第二组合物包含含有嵌合抗原受体(CAR)的CD4+T细胞，所述嵌合抗原受体(CAR)包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第二靶抗原的结合结构域，
胞内信号传导结构域，和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述胞内信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述胞内信号传导结构域。


5.一种组合细胞免疫疗法组合物，所述组合物包含：
(a)第一组合物，所述第一组合物包含含有第一嵌合吞噬受体(CER)的B细胞，所述第一嵌合吞噬受体(CER)包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第一靶抗原的结合结构域，
吞噬信号传导结构域，和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域；和
(b)第二组合物，所述第二组合物包含含有重组T细胞受体(TCR)的CD4+T细胞，所述重组T细胞受体(TCR)结合第二靶抗原。


6.一种组合细胞免疫疗法组合物，所述组合物包含：
(a)第一组合物，所述第一组合物包含含有第一嵌合吞噬受体(CER)的B细胞，所述第一嵌合吞噬受体(CER)包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第一靶抗原的结合结构域，
吞噬信号传导结构域，和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域；和
(b)第二组合物，所述第二组合物包含含有嵌合抗原受体(CAR)的CD8+T细胞，所述嵌合抗原受体(CAR)包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第二靶抗原的结合结构域，
胞内信号传导结构域，和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述胞内信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述胞内信号传导结构域。


7.一种组合细胞免疫疗法组合物，所述组合物包含：
(a)第一组合物，所述第一组合物包含含有第一嵌合吞噬受体(CER)的B细胞，所述第一嵌合吞噬受体(CER)包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第一靶抗原的结合结构域，
吞噬信号传导结构域，和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域；和
(b)第二组合物，所述第二组合物包含含有重组T细胞受体(TCR)的CD8+T细胞，所述重组T细胞受体(TCR)结合第二靶抗原。


8.根据权利要求2、4或6中任一项所述的组合细胞免疫疗法组合物，其中所述CAR结合结构域包含scFv。


9.根据权利要求2、4、6或8中任一项所述的组合细胞免疫疗法组合物，其中所述CAR胞外域还包含间隔区结构域。


10.根据权利要求2、4、6、8或9中任一项所述的组合细胞免疫疗法组合物，其中所述CAR跨膜结构域包含CD28、CD2、CD4、CD8、CD3ε、CD3δ、CD3ζ、CD25、CD27、CD40、CD79A、CD79B、CD80、CD86、CD95(Fas)、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD150(SLAMF1)、CD152(CTLA4)、CD200R、CD223(LAG3)、CD270(HVEM)、CD272(BTLA)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)、CD278(ICOS)、CD279(PD-1)、CD300、CD357(GITR)、A2aR、DAP10、FcRα、FcRβ、FcRγ、Fyn、GAL9、KIR、Lck、LAT、LRP、NKG2D、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、PTCH2、ROR2、Ryk、Slp76、SIRPα、pTα、TCRα、TCRβ、TIM3、TRIM、LPA5或Zap70跨膜结构域。


11.根据权利要求2、4、6和8-10中任一项所述的组合细胞免疫疗法组合物，其中所述CAR胞内信号传导结构域包含含有ITAM的活化信号传导结构域，所述含有ITAM的活化信号传导结构域选自CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD278(ICOS)、DAP10、DAP12和CD66d信号传导结构域。


12.根据权利要求2、4、6和8-11中任一项所述的组合细胞免疫疗法组合物，其中所述CAR胞内信号传导结构域包含第一共刺激信号传导结构域，所述第一共刺激信号传导结构域选自CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C和B7-H3信号传导结构域。


13.根据权利要求2、4、6和8-12中任一项所述的组合细胞免疫疗法组合物，其中所述CAR胞内信号传导结构域包含第二共刺激信号传导结构域，所述第二共刺激信号传导结构域选自CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C和B7-H3信号传导结构域。


14.根据权利要求2、4、6和8-13中任一项所述的组合细胞免疫疗法组合物，其中所述CAR是第一代CAR、第二代CAR、第三代CAR或TCR-CAR。


15.根据权利要求2、4、6和8-14中任一项所述的组合细胞免疫疗法组合物，其中所述CAR的所述第二靶抗原是肿瘤抗原、病毒抗原或寄生虫抗原。


16.根据权利要求15所述的组合细胞免疫疗法组合物，其中所述CAR的所述第二靶抗原是肿瘤抗原，所述肿瘤抗原选自CD138、CD38、CD33、CD123、CD72、CD79a、CD79b、间皮素、PSMA、BCMA、ROR1、MUC-16、L1CAM、C...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·M·科瑞，
申请(专利权)人：森罗治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US