【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合吞噬受体的表达载体、基因修饰的宿主细胞及其用途关于序列表的声明以文本文件形式提供与本申请相关的序列表以替代纸质副本，并且通过引用在此并入本说明书。包含序列表的文本文件命名为200265_406WO_SEQUENCE_LISTING.txt。该文本文件大小为539KB，于2019年3月26日创建，并通过EFS-Web以电子形式提交。
技术介绍
将靶向癌症抗原的基因工程改造的受体修饰的T细胞用于血液系统恶性肿瘤中已显示了临床成功(例如，白血病中的CD19特异性嵌合抗原受体疗法)。仅举几个例子，通过利用靶向CEA、GD2、间皮素、IL13Rα、HER2、FAP和L1CAM的工程化受体的过继细胞免疫疗法治疗实体瘤的许多临床试验正在进行中。工程化受体包括嵌合抗原受体(CAR)和亲和性增强的T细胞受体(TCR)。然而，对实体瘤的治疗存在独特的挑战，包括：向肿瘤部位运输、肿瘤微环境的物理障碍、应激的代谢情况和免疫抑制机制(例如，免疫检查点分子的表达、抑制性细胞因子的产生)。针对过继免疫治疗中增加T细胞持久性和活性的努力仍在进行着。附图说明图1A-G显示了示例性串联表达盒的载体图。该串联表达盒包含人乳头瘤病毒16(HPV16)E7蛋白特异性TCR，以诱导肿瘤(例如，宫颈)特异性细胞溶解应答，还包含磷脂酰丝氨酸特异性嵌合吞噬受体(CER)，以在细胞溶解诱导的磷脂酰丝氨酸暴露后激发肿瘤特异性吞噬活性。图1A显示了示例性串联表达盒，其包含编码嵌合吞噬受体5(CER5)构建体的多核苷酸和编码HPV16E7特异性TCR的多核苷酸...
【技术保护点】
1.一种表达盒，所述表达盒包含：/n(a)编码嵌合吞噬受体(CER)的多核苷酸，所述嵌合吞噬受体包含：/n胞外域，所述胞外域包含结合第一靶抗原的结合结构域；/n吞噬信号传导结构域；/n跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域；和/n(b)编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含：/n胞外域，所述胞外域包含结合第二靶抗原的结合结构域；/n胞内信号传导结构域；和/n跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述胞内信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述胞内信号传导结构域。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180328 US 62/649,4991.一种表达盒，所述表达盒包含：
(a)编码嵌合吞噬受体(CER)的多核苷酸，所述嵌合吞噬受体包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第一靶抗原的结合结构域；
吞噬信号传导结构域；
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域；和
(b)编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第二靶抗原的结合结构域；
胞内信号传导结构域；和
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述胞内信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述胞内信号传导结构域。
2.一种表达盒，所述表达盒包含：
(a)编码嵌合吞噬受体(CER)的多核苷酸，所述嵌合吞噬受体包含：
胞外域，所述胞外域包含结合第一靶抗原的结合结构域；
吞噬信号传导结构域；
跨膜结构域，所述跨膜结构域位于所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域之间并连接所述胞外域和所述吞噬信号传导结构域；
(b)编码重组T细胞受体(TCR)结合蛋白β链的多核苷酸，所述重组T细胞受体(TCR)结合蛋白β链包含TCRβ可变区和TCRβ恒定区；和
(c)编码重组TCRα链的多核苷酸，所述重组TCRα链包含TCRα可变区和TCRα恒定区。
3.根据权利要求1或2所述的表达盒，其中所述CER结合结构域包含scFv、受体胞外域或配体。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的表达盒，其中所述CER胞外域还包含间隔区结构域。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的表达盒，其中所述CER跨膜结构域包含Tim1、Tim4、Tim3、FcR、CD8、CD28、MERTK、Axl、Tyro3、BAI1、CD4、DAP12、MRC1、FcR、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8或TLR9跨膜结构域。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的表达盒，其中所述CER吞噬信号传导结构域包含MERTK、Tyro3、ItgB5、MRC1、BAI1、ELMO、Axl、Syk、MyD88、Zap70、FcγR1、FcγR2A、FcγR2B2、FcγR2C、FcγR3A、FcεR1、FcαR1、BAFF-R、DAP12、NFAM1、CD79b、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、Traf6、Traf2或Traf3信号传导结构域。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的表达盒，其中所述CER吞噬信号传导结构域包含主要吞噬信号传导结构域和次要吞噬信号传导结构域。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的表达盒，其中所述CER的主要吞噬信号传导结构域和次要吞噬信号传导结构域是不同的。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的表达盒，其中所述CER的主要吞噬信号传导结构域和次要吞噬信号传导结构域分别独立地选自MERTK、Tyro3、ItgB5、MRC1、BAI1、ELMO、Axl、Syk、MyD88、Zap70、FcγR1、FcγR2A、FcγR2B2、FcγR2C、FcγR3A、FcεR1、FcαR1、BAFF-R、DAP12、NFAM1、CD79b、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、Traf6、Traf2和Traf3信号传导结构域。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的表达盒，其中所述CER的所述第一靶抗原是促吞噬标志物、肿瘤抗原、病毒抗原或寄生虫抗原。
11.根据权利要求10所述的表达盒，其中所述促吞噬标志物是磷脂酰丝氨酸。
12.根据权利要求11所述的表达盒，其中所述CER结合结构域包含结合磷脂酰丝氨酸的Tim4结合结构域。
13.根据权利要求1和3-12中任一项所述的表达盒，其中所述CAR结合结构域包含scFv。
14.根据权利要求1和3-13中任一项所述的表达盒，其中所述CAR胞外域还包含间隔区结构域。
15.根据权利要求1和3-14中任一项所述的表达盒，其中所述CAR跨膜结构域包含CD28、CD2、CD4、CD8、CD3ε、CD3δ、CD3ζ、CD25、CD27、CD40、CD79A、CD79B、CD80、CD86、CD95(Fas)、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD150(SLAMF1)、CD152(CTLA4)、CD200R、CD223(LAG3)、CD270(HVEM)、CD272(BTLA)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)、CD278(ICOS)、CD279(PD-1)、CD300、CD357(GITR)、A2aR、DAP10、FcRα、FcRβ、FcRγ、Fyn、GAL9、KIR、Lck、LAT、LRP、NKG2D、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、PTCH2、ROR2、Ryk、Slp76、SIRPα、pTα、TCRα、TCRβ、TIM3、TRIM、LPA5或Zap70跨膜结构域。
16.根据权利要求1和3-15中任一项所述的表达盒，其中所述CAR胞内信号传导结构域包含含有ITAM的活化信号传导结构域，所述含有ITAM的活化信号传导结构域选自CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD278(ICOS)、DAP10、DAP12、CD79b、FcR和CD66d信号传导结构域。
17.根据权利要求1和3-16中任一项所述的表达盒，其中所述CAR胞内信号传导结构域包含第一共刺激信号传导结构域，所述第一共刺激信号传导结构域选自CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C和B7-H3信号传导结构域。
18...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·M·科瑞，I·伊巴拉，
申请(专利权)人：森罗治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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