一种β-咔啉生物碱在抗心肌肥大方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种β‑咔啉生物碱在抗心肌肥大方面的应用。心肌肥大是心血管发病率和死亡率高的主要危险因素之一。心脏受持续压力超负荷、机械牵拉及神经激素等各种刺激后，心肌代偿性肥大，心肌细胞增大、间质纤维化、舒张和收缩功能失调以及基因表达、能量代谢和电生理异常，逐渐由代偿性发展为病理性心肌肥大，最终导致心力衰竭。本发明专利技术实验结果说明，1‑乙酰基‑3‑甲酯基‑4‑羟基‑β‑咔啉可以有效缓解治疗心肌肥大，具有开发成抗心肌肥大的药物的前景。

【技术实现步骤摘要】
一种β-咔啉生物碱在抗心肌肥大方面的应用
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种β-咔啉生物碱在抗心肌肥大方面的应用。
技术介绍
心肌肥大是心血管发病率和死亡率高的主要危险因素之一。心脏受持续压力超负荷、机械牵拉及神经激素等各种刺激后，心肌代偿性肥大，心肌细胞增大、间质纤维化、舒张和收缩功能失调以及基因表达、能量代谢和电生理异常，逐渐由代偿性发展为病理性心肌肥大，最终导致心力衰竭，心力衰竭平均年死亡率为25％～40％。1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉是一种天然存在的β-咔啉生物碱，最早从中药金铁锁Psammosilenetunicoides分离得到(金铁锁中1个新β－咔啉生物碱，中国中药杂志，第37卷第21期，2012年11月)，其化学结构如下：1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉。目前没有1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉在抗心肌肥大方面的活性报道。
技术实现思路
本专利技术的意图在于提供一种β-咔啉生物碱在抗心肌肥大方面的应用。技术方案如下：如下结构的1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉用于制备抗心肌肥大的药物的用途。1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉技术效果：使用血管紧张素Ⅱ对H9C2细胞进行处理是经典的心肌肥大造模方法，通过观察细胞表面积的变化和心肌肥大基因ANP、BNP的表达水平变化判断药物干预是否能够缓解治疗心肌肥大。本专利技术实验结果说明，1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉可以有效缓解治疗心肌肥大，具有开发成抗心肌肥大的药物的前景。附图说明图1为1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉的化学结构式。图2为各组心肌细胞表面积/μm2；图3为各组心肌细胞中ANPmRNA、BNPmRNA相对表达水平。具体实施方式下面通过具体实施例和附图介绍本专利技术的实质性内容，但不作为本专利技术保护范围的限制。一、试验材料大鼠心肌细胞株H9C2由中国药科大学中药学院中药药理实验室馈赠。胎牛血清、L-DMEM培养液购自美国Gibco公司。血管紧张素Ⅱ、双抗购自美国Sigma公司。1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉化学结构如图1所示，纯度≥98％。二、试验方法1、细胞培养将冻存的大鼠心肌细胞株H9C2复苏后用含有10％胎牛血清和1％双抗的L-DMEM培养液于37℃、5％CO2饱和湿度培养箱中培养，取对数生长期用于试验。2、造模、分组和给药取对数生长期的H9C2细胞，用含有10％胎牛血清的L-DMEM培养液制成浓度为5×105个/mL的细胞悬液，接种于6孔板中，每孔2mL。待细胞贴壁后，更换为无血清L-DMEM培养液饥饿处理12h，随机分为对照组、模型组、低浓度组和高浓度组，按照分组更换培养基后分组培养48h，多块6孔板平行操作。其中，对照组使用含有10％胎牛血清的L-DMEM培养液培养，模型组使用含有10％胎牛血清和10-6mol/L血管紧张素Ⅱ的L-DMEM培养液培养，低浓度组和高浓度组分别使用含有10％胎牛血清和10-6mol/L血管紧张素Ⅱ、2μM或5μM1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉的L-DMEM培养液培养。3、心肌肥大指标检测3.1心肌细胞表面积测定分组培养48h后，各组用无血清L-DMEM培养液洗涤，每组随机选取5个视野，用相差显微镜拍照，每个视野选约10个细胞，用ImageProPlus6.1软件测量细胞表面积，取均值。3.2心肌细胞中肥大基因ANP、BNP表达水平的测定分组培养48h后，收集各组细胞，洗涤，用TRIzol试剂盒提取各组细胞总RNA，测定RNA浓度和纯度，反转录试剂盒合成cDNA，PCR扩增，以GAPDH为内参，按照试剂盒操作方法根据公式ANPmRNA/内参或BNPmRNA/内参计算各组ANPmRNA、BNPmRNA相对表达水平，并以对照组ANPmRNA、BNPmRNA相对表达水平计为1.00。引物如下：ANP上游引物：5'-ACGCAGCTTGGTCACATTGC-3'；ANP下游引物：5'-CCACTAGACCACTCATCTAC-3'；BNP上游引物：5'-GCATGCCCAACCCACTTTAC-3'；BNP下游引物：5'-GAGAGACAGGGCAATGTCAC-3'；GAPDH上游引物：5'-CCACTCTTCCACCTTCGATG-3'；GAPDH下游引物：5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3'。4、统计学处理实验数据均经SPSS15.0统计软件处理，结果以均值±标准偏差表示，多组比较用单因素方差分析，两组间比较采用t检验，以P<0.05为差异有显著性意义。三、试验结果1、心肌细胞表面积测定结果心肌细胞表面积测定结果如表1和图2所示，与对照组相比，模型组心肌细胞表面积显著增大，说明模型组心肌细胞出现肥大现象，造模成功；与模型组相比，低浓度组和高浓度组心肌细胞表面积显著降低，且高浓度组降低更明显，说明1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉的干预改善了血管紧张素Ⅱ引起的心肌肥大现象。表1各组心肌细胞表面积/μm2表1中，**代表与对照组相比，P<0.05；##代表与模型组相比，P<0.05。2、肥大基因ANP、BNP表达水平测定结果各组心肌细胞中ANPmRNA、BNPmRNA相对表达水平如表2和图3所示，与对照组相比，模型组心肌细胞中ANPmRNA、BNPmRNA相对表达水平显著升高，造模成功；与模型组相比，低浓度组和高浓度组心肌细胞中ANPmRNA、BNPmRNA相对表达水平显著降低，且高浓度组降低更明显，说明1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉的干预改善了血管紧张素Ⅱ引起的心肌肥大现象。表2各组心肌细胞中ANPmRNA、BNPmRNA相对表达水平表2中，**代表与对照组相比，P<0.05；##代表与模型组相比，P<0.05。使用血管紧张素Ⅱ对H9C2细胞进行处理是经典的心肌肥大造模方法，通过观察细胞表面积的变化和心肌肥大基因ANP、BNP的表达水平变化判断药物干预是否能够缓解治疗心肌肥大。上述结果说明，1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉可以有效缓解治疗心肌肥大，具有开发成抗心肌肥大的药物的前景。上述实施例和附图用于具体介绍本专利技术的实质性内容，但不作为本专利技术保护范围的限制。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.如下结构的1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉用于制备抗心肌肥大的药物的用途。/n

【技术特征摘要】
1.如下结构的1-乙酰基-3-甲酯基-4-羟基-β-咔啉用于制备抗心肌肥大的药物的...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：淮安泰凯睿医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32