R848在制备抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物制剂领域，公开了R848在制备抑制新型冠状病毒SARS‑CoV‑2药物中的应用，申请人通过体外细胞试验和小鼠实验，发现R848对Caco‑2细胞的毒性作用小，在体外细胞水平能够显著抑制SARS‑CoV‑2对Caco‑2细胞的感染，抑制其在细胞中的增殖，具备安全高效的特点；同时通过构建小鼠SARS‑CoV‑2感染模型，发现R848可以显著降低小鼠体重下降程度，降低小鼠肺组织中的病毒含量，提高小鼠的存活率，这使得R848具有非常大的临床治疗潜力。

Application of R848 in novel coronavirus SARS-CoV-2 inhibitors

【技术实现步骤摘要】
R848在制备抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2药物中的应用
本专利技术属于生物制剂领域，具体涉及R848在制备抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2药物中的应用。
技术介绍
由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2,SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(coronavirusdisease19,COVID-19)于2019年底出现并呈现全球爆发，严重危害人类健康和公共卫生安全，给世界社会和经济带来巨大负担，已引发全球范围内的高度关注。截止到2020年8月底，全球累计新冠肺炎确诊病例超过2450万例，死亡人数超过83万。许多国内外学者推测新冠病毒或将类似于流感病毒，与人类长期共存。而且现有的研究报道和数据表明SARS-CoV-2的致死率远高于流感，然而到目前为止还没有专门针对新型冠状病毒治疗和预防的药物或商品化疫苗可以使用。因此，研究并开发新型抗SARS-CoV-2的药物具有重要意义。R848(瑞喹莫德，Resiquimod)是一种免疫反应调节剂，用作有效的TLR7/8激动剂，诱导细胞因子TNF-α、IL-6和IFN-α的上调。R848能够激活免疫细胞，并通过Toll样受体7(TLR7)-MyD88-依赖性信号通路诱导野生型脾细胞的增殖。R848也会调节树突细胞以增加巨细胞病毒和HIV-1特异性T细胞应答。R848诱导髓源性抑制细胞分化为巨噬细胞和树突细胞，并且可以通过减少免疫抑制的MDSCs提高癌症免疫治疗效果。在野生型小鼠中，R848诱导IFN-α，TNF-α和IL-12的血清浓度增加，而TLR7缺失或MyD88缺失的小鼠不会增加其细胞因子。在过敏性哮喘小鼠模型中，R848通过减少Nrf2信号从而减少过敏原诱导的气道反应和炎症。作为免疫佐剂，在体外R848能显著增强IL-12的分泌；在体内，与其他TLR配体佐剂相比，R848更有效地促进DC和NK细胞向小鼠淋巴结中聚集并诱导CD4+和CD8+效应T细胞生成，与其他免疫佐剂相比，R848更具增强Th1细胞免疫作用。R848可以抑制寨卡病毒、乙肝病毒、艾滋病毒等在细胞上的复制，除此之外，R848还可以作为某些病毒疫苗的佐剂。但目前，尚未发现任何关于R848抗SARS-CoV-2病毒的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于弥补现有技术的不足，提供了一种小分子化合物R848(瑞喹莫德，Resiquimod)在制备治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2感染药物中的应用，从而为临床上SARS-CoV-2的治疗提供一种有效的小分子化合物。R848分子式为C17H22N4O2，分子量为314.38，具有结构式Ⅰ所示的结构：为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术措施：R848在制备治疗或预防SARS-CoV-2感染药物中的应用，本专利技术对R848的药效用下述方法进行评价：1.在体外细胞水平评价R848细胞毒性及R848抗SARS-CoV-2病毒活性，其步骤如下1)将已长成单层的96孔板中Caco-2细胞用PBS洗一遍，R848用2％血清的DMEM(维持液)倍比稀释成不同浓度，加入96孔板中，每个稀释度平行做3孔，并设置正常细胞对照。2)37℃、5％CO2培养箱中培养24h，48h后，用CCK8法测定细胞活性，计算出不同浓度的R848的细胞毒性。3)将已长成单层的12孔板中Caco-2细胞用PBS洗一遍，用维持液将R848稀释合适浓度后孵育细胞。4)37℃、5％CO2培养箱中孵育24h后，细胞用PBS洗一遍，以MOI为0.1的SARS-CoV-2孵育细胞1小时后，换含有不同浓度的R848维持液继续培养。5)细胞感染病毒后培养48h，72h，取上清，用VERO细胞测定上清中的病毒滴度。评价R848在细胞水平对病毒增殖的影响。2.在SARS-CoV-2感染小鼠模型中评价R848在动物活体内的抗病毒效果，其步骤如下：1)运用小鼠适应毒株WBP-1(CCTCCNO：V202031)，建立SARS-CoV-2感染小鼠模型2)小鼠腹腔注射R848(1.5mg/kg)，同时设置DMSO对照，药物注射2个小时后滴鼻感染小鼠5LD50病毒。3)小鼠每天腹腔注射一次药物，连续注射5天。4)每天观察小鼠状态，称量体重，记录死亡情况，并绘制体重变化曲线和小鼠存活率曲线。5)比较用药组与未用药组肺脏病理变化。6)以感染后小鼠体重变化、存活率、肺脏病毒载量来评价R848效果。本专利技术的保护范围包括：R848在制备抑制SARS-CoV-2药物中的应用；R848在制备治疗或预防SARS-CoV-2感染的药物中的应用；R848在制备缓解SARS-CoV-2感染后体重降低的药物中的应用；R848在制备提升SARS-CoV-2感染后机体存活率的药物中的应用；R848在制备降低SARS-CoV-2感染后机体肺部病毒含量的药物中的应用。R848在制备治疗或预防小鼠SARS-CoV-2感染的药物中的应用；R848在制备提高治疗小鼠SARS-CoV-2感染存活率的药物中的应用；R848在制备缓解小鼠SARS-CoV-2感染后体重降低的药物中的应用；R848在制备降低小鼠SARS-CoV-2感染后机体肺部病毒含量的药物中的应用。以上所述的应用中，优选的，所述的小鼠SARS-CoV-2感染中的SARS-CoV-2为新型冠状病毒SARS-CoV-2/WBP-1，保藏编号为CCTCCNO：V202031。与现有技术相比，本专利技术优点如下：1.R848是小分子化合物，对Caco-2细胞的毒性作用小，在体外细胞水平能够显著抑制SARS-CoV-2对Caco-2细胞的感染，抑制其在细胞中的增殖，说明其具有安全高效的特点。2.R848在小鼠SARS-CoV-2感染模型中有效果，可以显著降低小鼠体重下降程度，降低小鼠肺组织中的病毒含量，提高小鼠的存活率，这使得R848具有非常大的临床治疗潜力。附图说明图1R848对Caco-2细胞的细胞毒性示意图。图2R848细胞水平抗SARS-CoV-2的效果示意图。图3R848对SARS-CoV-2病毒感染小鼠体重的影响示意图。图4R848对SARS-CoV-2病毒感染小鼠存活率的影响示意图。图5R848对SARS-CoV-2病毒感染小鼠肺脏组织病毒载量的影响示意图。具体实施方式为了更好地理解本专利技术的内容，下面结合具体实施方法对本
技术实现思路
作进一步说明，但本专利技术的保护内容不局限于以下实施例。本专利技术实施例中的试验方法和条件如无特殊说明，均为常规方法。本专利技术所述的技术方案，如无特殊说明，均为领域的常规方案；所述试剂或材料如无特殊说明，均来源于商业渠道。本专利技术中所有与严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV-2)活病毒相关本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.R848在制备治疗或预防SARS-CoV-2感染的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.R848在制备治疗或预防SARS-CoV-2感染的药物中的应用。


2.R848在制备抑制SARS-CoV-2药物中的应用。


3.R848在制备缓解SARS-CoV-2感染后体重降低的药物中的应用。


4.R848在制备降低SARS-CoV-2感染后机体肺部病毒含量的药物中的应用。


5.R848在制备提升SARS-CoV-2感染后机体存活率的药物中的应用。


6.R848在制备治疗或预防小鼠SARS-CoV-2感染的药...

【专利技术属性】
技术研发人员：金梅林，黄坤，张宇飞，杨丽，邹忠，回显锋，赵亚，孙小美，张强，陈西，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42