骆驼蓬碱在制备防治慢性肾脏病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了骆驼蓬碱在制备防治慢性肾脏病的药物中的应用。所述的骆驼蓬碱(Harmine)的结构如式(I)所示。本发明专利技术通过体内外实验发现，Harmine可减少缺氧引起的脂滴聚集，并且改善脂肪酸代谢障碍缓解肾间质纤维化进程。Harmine可降低肾小管上皮细胞脂肪酸代谢障碍和缓解肾间质纤维化，能应用于制备防治慢性肾脏病的药物。

【技术实现步骤摘要】
骆驼蓬碱在制备防治慢性肾脏病的药物中的应用
本专利技术涉及医药
，具体涉及骆驼蓬碱在制备防治慢性肾脏病的药物中的应用。
技术介绍
慢性肾脏病(Chronickidneydisease，CKD)以其高达10.8％的发病率已经成为威胁人类公共健康的主要疾病之一。肾小管间质纤维化是各种慢性肾脏病(chronickidneydisease，CKD)进展至终末期肾脏病的共同病理表现。因此，深入研究肾小管间质纤维化的分子机制对于阻止或延缓慢性肾脏病具有重要意义。慢性缺氧导致肾小管损伤是肾间质纤维化形成的主要原因及早期事件。持续不断的慢性缺氧可导致肾小管上皮细胞发生不可逆性损伤，发生坏死、凋亡、表型转化，启动肾脏的损伤修复应答，肾间质纤维化是一个失败的损伤修复过程，以肌成纤维细胞的增殖及细胞外基质(Extracelluarmatrix，ECM)过度沉积为主要特征。我们课题组长期致力于慢性缺氧性肾损伤的研究，已证实转录因子Twist受HIF-1α直接转录激活，在缺氧导致的肾小管上皮细胞转分化(EMT)和肾脏纤维化中发挥着重要作用，采用Twist1的siRNA可以体外显著减低肾小管上皮细胞纤维化因子的表达。新近的(NatMed.2015；21(1):37-46)研究报道发现：肾小管上皮细胞主要依赖于脂肪酸的氧化供能，阻止肾小管上皮细胞的脂肪酸氧化供能将导致细胞内脂滴聚集、大量细胞凋亡、表型转化，释放炎症因子、促纤维化因子导致肾间质纤维化。我们研究发现缺氧可以诱导肾小管上皮细胞脂肪酸代谢障碍，因此，急需寻找缓解脂代谢障碍逆转纤维化的有效药物。骆驼蓬，又名苦苦菜(《陕西中草药》)，骆驼蒿、臭草、臭牡丹、沙蓬豆豆(《陕甘宁青中草药选》)，阿地热斯忙(维名)，乌姆希-乌布斯(蒙名)，臭古都、老哇瓜。该植物种子提取物Harmine的结构如下式(I)所示：
技术实现思路
本专利技术的目的是提供骆驼蓬碱或其药用盐在制备防治慢性肾脏病的药物中的应用，优选，是提供骆驼蓬碱或其药用盐在制备改善肾小管上皮细胞脂肪酸代谢障碍和减轻肾间质纤维化的药物中的应用。所述的骆驼蓬碱(Harmine)的结构式如下式(I)所示：所述的骆驼蓬碱(Harmine)购买于Sigma-Aldrich(286044-1G)(美国)。本专利技术还提供了一种防治慢性肾脏病的药物，其含有有效量的骆驼蓬碱或其药用盐为活性成分。本专利技术采用40μmol/LHarmine处理缺氧诱导的肾小管上皮细胞系(HK-2)，结果表明，Harmine可以改善慢性缺氧诱导的脂肪酸代谢障碍。进一步，采用Harmine处理HK-2，缺氧处理48h之后Westernblot检测纤维化因子的表达和脂肪酸代谢调控分子的表达，结果显示采用Twist1siRNA和Harmine处理HK-2细胞之后，均可以显著降低纤维化因子α-SMA，胶原(CollagenI，CollagenIV)，Fibronectin的表达，并且对于缺氧条件诱导的HK-2中脂肪酸相关蛋白PGC-1α和PPARα以及脂肪酸氧化关键限速酶CPT1A和ACOX1的下降有显著的缓解作用。使用C57小鼠构建经典的肾间质纤维化模型---小鼠单侧输尿管梗阻(Unilateralureteralobstruction,UUO)模型，采用H&E和Masson染色检测Harmine处理对肾脏病理改变和纤维化程度的改变，结果显示，Harmine可以显著缓解肾脏病理学改变和纤维化的程度。综上所述，本专利技术通过体内外实验发现，Harmine可减少缺氧引起的脂滴聚集，并且改善脂肪酸代谢障碍缓解肾间质纤维化进程。Harmine可降低肾小管上皮细胞脂肪酸代谢障碍和缓解肾间质纤维化，能应用于制备防治慢性肾脏病的药物。附图说明图1是采用Harmine处理缺氧诱导的肾小管上皮细胞系(HK-2)的脂肪酸代谢障碍的结果。图中，A.HK-2细胞分为三组，常氧组(Normoxia)，缺氧组(Hypoxia-Parental)，缺氧加入40μmol/LHarmine组(Hypoxia-Harmine)，培养48h后，采用ORO染色分别检测三组细胞内的脂滴聚集；B.高内涵细胞分析系统(HCSStudioCellAnalysisSoftware)分析检测每组细胞脂滴的数目；C，D采用ImageJ软件分析三组细胞内的脂滴的相对相对面积、直径大小；E.分析每组HK-2相等数目细胞内脂滴聚集和水解的百分比变化。与常氧培养组相比，*P＜0.05，与只做缺氧处理48h组相比，#P＜0.05。图2是采用Westernblot检测HK-2细胞转染Twist1siRNA处理组(siTwist1)、HK-2细胞转染对照质粒pSilencer处理组(pSilencer)、HK-2细胞加入40μmol/LHarmine处理组(Harmine)、空白对照组(Parental)这四组缺氧处理48h之后HK-2的纤维化因子的表达(Twist1、α-SMA、CollagenI，CollagenIV和Fibronectin)和脂肪酸代谢调控分子的表达(PGC-1α和PPARα)。右侧柱状图代表相对于β-actin的灰度分析值，与只做缺氧处理的空白对照组相比，*P＜0.05，与转染了对照质粒后并做缺氧处理48h组相比，#P＜0.05。图3是采用H&E和Masson染色检测Harmine处理对UUO模型小鼠肾脏病理改变和纤维化程度的改变。图中，A.采用H&E和Masson检测假手术组(Sham)，UUO造模腹腔注射PBS组和UUO每天腹腔注射20mg/kgHarmien组小鼠造模14天小鼠肾脏病理改变和纤维化程度；B.结合H&E染色的结果，评估各组TDI，结合Masson染色结果对各组的TFI进行评估，与Sham组相比，*P＜0.05。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。实施例1：Harmine改善慢性缺氧诱导的脂肪酸代谢障碍的研究采用Harmine处理缺氧诱导的HK-2，并采用油红O检测细胞内的脂滴，分析Harmine缓解慢性缺氧诱导的脂肪酸代谢障碍的作用，具体步骤为：1、HK-2细胞常规培养基组成为：DMEM/F-12培养基中加入10wt％FCS、胰岛素(5mg/mL)、转铁蛋白(5mg/mL)、硒(5ng/mL)、氢化可的松(36ng/mL)和三碘甲状腺素(4pg/mL)。在HK-2细胞常规培养基中培养HK-2细胞，在培养基中加入40μmol/LHarmine进行处理，并以培养基中不添加Harmine作为对照，将添加了Harmine处理的HK-2细胞进行缺氧培养(1％O2，5％CO2，37℃)，将没有添加Harmine处理的HK-2细胞分别做常氧培养(21％O2，5％CO2，37℃)和缺氧培养(1％O2，5％CO2，37℃)。结果显示：与只做缺氧处理的HK-2组(即没有加入Harmine处理的缺氧组H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.骆驼蓬碱或其药用盐在制备防治慢性肾脏病的药物中的应用，所述的骆驼蓬碱的结构式如下式(I)所示：/n

【技术特征摘要】
1.骆驼蓬碱或其药用盐在制备防治慢性肾脏病的药物中的应用，所述的骆驼蓬碱的结构式如下式(I)所示：





2.根据权利要求1所述的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙世仁，杨振，刘利敏，宁晓暄，魏蕾，刘宝建，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61