一种间充质干细胞外泌体和在促进皮肤屏障修复中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种间充质干细胞外泌体和在促进皮肤屏障修复中的应用。皮肤屏障功能是皮肤最重要的功能之一，在保护机体免受环境伤害、防止微生物入侵、调节体温、避免体内水分流失、维持内环境相对稳定等方面发挥重要的作用。本发明专利技术实验表明，与正常人脐带间充质干细胞分泌的外泌体相比，miR

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞外泌体和在促进皮肤屏障修复中的应用


[0001]本专利技术属于干细胞领域，涉及一种间充质干细胞外泌体和在促进皮肤屏障修复中的应用。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一种具有高度自我更新、多向分化及独特免疫调节能力特性的细胞，其可以通过与先天免疫和适应性免疫系统的细胞相互作用以及分泌细胞调节性因子发挥免疫调节作用。间充质干细胞外泌体(exosomes from mesenchymal stem cells，MSCs
‑
Exo)就是MSCs发挥功能的一种分泌物质。研究表明，MSCs
‑
Exo具有多种活性，比如组织修复、免疫调节和疾病治疗，越来越被重视。
[0003]脐带间充质干细胞(umbilical cord
‑
mesenchymal stem cells，UC
‑
MSCs)具有来源充足、取材方便、培养简单等特点，也不存在伦理学问题，因而得到广泛研究。脐带间充质干细胞外泌体(UC
‑
MSCs
‑
Exo)也较其他干细胞外泌体更易被应用和推广。
[0004]皮肤屏障功能是皮肤最重要的功能之一，在保护机体免受环境伤害、防止微生物入侵、调节体温、避免体内水分流失、维持内环境相对稳定等方面发挥重要的作用。
[0005]已有技术表明，UC
‑
MSCs
‑
Exo具有促进皮肤屏障修复的活性，但是活性尚待提高，这样才能克服UC
‑
MSCs
‑
Exo量少的不足，实现少量高效，易于被应用和推广。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在克服现有技术不足，第一目的是提供一种脐带间充质干细胞外泌体，第二目的是提供该脐带间充质干细胞外泌体在促进皮肤屏障修复中的应用。
[0007]本专利技术目的通过如下技术方案实现：
[0008]一种脐带间充质干细胞外泌体，该脐带间充质干细胞外泌体为miR
‑
485
‑
5p表达上调的人脐带间充质干细胞分泌的外泌体。
[0009]上述脐带间充质干细胞外泌体在促进皮肤屏障修复中的应用。实验研究发现，与正常人脐带间充质干细胞分泌的外泌体相比，miR
‑
485
‑
5p表达上调的人脐带间充质干细胞分泌的外泌体一方面可以更有效地提高人类永生化表皮细胞HaCaT细胞的增殖活性，另一方面可以更有效地提高HaCaT细胞的迁移活性。
[0010]进一步的，所述应用为用于制备抗皮肤衰老的护肤品或药品。
[0011]更进一步的，所述护肤品为精华液、乳液、面膜或面霜。
[0012]技术效果：
[0013]表皮细胞层是皮肤屏障最重要的细胞层，表皮细胞的增殖活性和迁移活性直接关系到皮肤屏障受损后的修复能力。上调或下调改变部分基因表达水平是调节、改进细胞功能的重要研究方法。本专利技术实验表明，与正常人脐带间充质干细胞分泌的外泌体相比，miR
‑
485
‑
5p表达上调的人脐带间充质干细胞分泌的外泌体一方面可以更有效地提高人类永生化表皮细胞HaCaT细胞的增殖活性，另一方面可以更有效地提高HaCaT细胞的迁移活性，具
有开发成促进皮肤屏障修复的护肤品或药品的前景。
附图说明
[0014]图1中A为UC
‑
MSCs的倒置显微镜观察图，B为UC
‑
MSCs的流式细胞仪检测图，C为各组UC
‑
MSCs中miR
‑
485
‑
5p的含量比较，D为各组UC
‑
MSCs
‑
Exo的透射电镜观察图，E为各组UC
‑
MSCs
‑
Exo的Westernblot检测结果；
[0015]图2中A为各组HaCaT细胞的增殖活性比较，B为各组HaCaT细胞的迁移活性比较。
具体实施方式
[0016]下面结合实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本专利技术的保护范围局限于该具体实施例。
[0017]实施例1：UC
‑
MSCs
‑
Exo的制备
[0018]一、实验材料
[0019]胎牛血清、DMEM/F12培养基购自Gibco公司，双抗、PBS和胰蛋白酶购自碧云天生物。miR
‑
485
‑
5p mimic、miR
‑
485
‑
5p NC mimic由上海吉玛生物技术有限公司合成提供。FITC或PE标记的小鼠抗人CD90、CD105、CD73、CD14、CD34和CD45抗体及各相关同型对照购自美国eBioscince公司。Lipofectamine 2000购自Invitrogen。TRIzol试剂盒购自赛默飞世尔。Western blot相关试剂材料购自碧云天生物等。
[0020]二、实验方法
[0021]1、UC
‑
MSCs分离培养
[0022]按照常规方法在无菌条件下取健康足月顺产新生儿脐带组织，用含1％双抗的PBS洗涤多次以去除残血，并剔除脐动静脉，留下Wharton胶样组织，将其剪碎，形成约1mm3的小块，然后用含10％胎牛血清和1％双抗的DMEM/F12培养基于37℃、5％CO2、饱和湿度条件培养，每3～4d换液1次。在倒置显微镜下观察细胞的形态和生长情况。待细胞长至90％融合时，胰蛋白酶消化传代培养。取第3代UC
‑
MSCs用于流式检测表面标志物。流式检测方法为：取第3代UC
‑
MSCs，0.25％胰酶消化并调整细胞密度为1
×
106个/mL，每离心管中加入1mL细胞悬液，无菌PBS洗涤2次，1000
×
g离心5min，弃上清，100μL PBS重悬细胞后，向各管单细胞悬液中加入适量CD90、CD105、CD73、CD14、CD34和CD45抗体以及各同型对照，室温避光孵育30min，1000
×
g离心5min，PBS洗涤2次，加入500μL PBS重悬，制成单细胞悬液，流式细胞仪检测。
[0023]2、UC
‑
MSCs分组、转染和检测
[0024]实验分为空白对照组(Blank)、阴性对照组(Negative Control，NC)和阳性实验组(Positive group，PG)。取生长状态良好的UC
‑
MSCs，用含10％胎牛血清和1％双抗的DMEM/F12培养基于37℃、5％CO2、饱和湿度条件培养，接种于6孔板中，并分组如下：
[0025]Blank组：未转染；
[0026]NC组：转染miR...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脐带间充质干细胞外泌体，其特征在于：该脐带间充质干细胞外泌体为miR
‑
485
‑
5p表达上调的人脐带间充质干细胞分泌的外泌体。2.权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ五一IntClA六一K八九九，
申请(专利权)人：淮安泰凯睿医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：