一种食管癌早期筛查试纸条制造技术

本发明专利技术属于医药生物技术领域，公开了一种用于早期食管癌筛查的标志物，所述标志物为PDE1A蛋白或PDE1A蛋白与KPNA6蛋白的组合或PDE1A蛋白与CASK蛋白的组合。本发明专利技术进一步公开了上述标志物在制备用于早期食管癌筛查产品中的应用，所述用于早期食管癌筛查的产品为试纸条。本发明专利技术首次将PDE1A蛋白或PDE1A蛋白与KPNA6蛋白的组合或PDE1A蛋白与CASK蛋白的组合作为早期食管癌筛查的标志物，用于检测人血清中KPNA6自身抗体、PDE1A自身抗体、CASK自身抗体的表达水平，可以有效检测食管癌，尤其是早期食管癌。

【技术实现步骤摘要】
一种食管癌早期筛查试纸条本申请是申请号为CN202010367608.3，申请日为2020-04-30，名称为“一种早期食管癌联合筛查试纸条”的专利技术专利的分案申请。
本专利技术属于医药生物
，具体涉及一种早期食管癌联合筛查试纸条。
技术介绍
食管癌是人类最常见的消化系统恶性肿瘤之一，在全球范围内食管癌发病率位于所有恶性肿瘤的第8位，病死率位于因癌症而死亡的第6位。我国是世界食管癌高发国家，组织类型主要为鳞状细胞癌(本专利技术中食管癌均指食管鳞状细胞癌，即食管鳞癌)。2018年出版的《中国肿瘤登记年报》最新数据显示，我国食管癌居恶性肿瘤发病第六位，死亡第四位，对人民生活质量和家庭幸福构成了严重威胁。食管癌早期起病非常隐匿，大多数早期食管癌患者症状不典型或没有症状，当患者出现进行性吞咽困难等典型症状而去就诊时，往往已经到了中晚期，错失了最佳的治疗时机，导致生活质量较差、预后差，五年生存率仅约20％左右，远远低于早期食管癌患者的五年生存率(约90％以上)。由此可见，造成食管癌患者总体预后差的一个主要原因就是缺乏有效的早期筛查和诊断方法与手段。目前食管癌的早期发现和诊断主要依赖内镜检查和黏膜病理活检，但这种办法具有诊断周期长、有创、接受度差、成本高等特点，并且效率偏低。常规的，对高发区、40岁以上、男性、吸烟、饮酒、家族史阳性的无症状人群，即食管癌无症状高危人群进行内镜筛查时，早期癌的发现率仅2％左右，约90％以上的无症状高危人群均为“陪伴检查”。这些均限制了内镜筛查在无症状人群中的推广应用。因此，为进一步降低食管癌的死亡率、改善患者的预后，提高食管癌的早发现、早诊断和早治疗仍是关键，而寻求一种新的可用于人群筛查的非侵入性诊断方法显得尤要。外周血中肿瘤标志物的检测，具有快速、创伤小、易于接受等优势，适合大规模人群筛查，并且便于进行长期动态监测，为食管癌的早期发现提供了一种简单方便的无创诊断方法。尽管目前临床常用的一些肿瘤标志物，如CA125(癌抗原125)、CA199(癌抗原199)、CEA(癌胚抗原)和SCCA(鳞状细胞癌抗原)等可用于食管癌的诊断，但其敏感性和特异性均不高，尤其是对早期食管鳞癌患者的诊断价值不够高。在肿瘤发生发展的过程中，肿瘤患者血液中存在多种与肿瘤发生有关的抗原(肿瘤相关抗原(tumorassociatedantigens，TAAs))及自身抗体(TAAbs)。近十余年来，肿瘤相关抗原自身抗体在多种肿瘤类型中作为早期生物标志物得到广泛研究，如肝癌、肺癌、乳腺癌等。自身抗体具有以下优势：1.肿瘤相关抗原自身抗体能够在血清中持续稳定的存在，且在正常个体血液中的浓度极低；2.肿瘤相关抗原自身抗体可以在肿瘤患者出现主要临床症状之前的数月甚至数年即被检测到；3.用于检测自身抗体的方法成熟，相关试剂已商品化。这些优势使得肿瘤相关抗原自身抗体可能成为非常有潜力的肿瘤诊断标志物。食管癌发生亦是一个非常复杂的过程，不仅涉及环境-遗传-基因互作等多因素的影响，而且还涉及影响细胞生长、多组学(基因、RNA、蛋白质和代谢产物等)关键分子改变，即肿瘤发生的多因素和多阶段的复杂过程。已有研究发现，食管癌患者的血清中也存在肿瘤相关抗原的自身抗体。研究表明，单一一种肿瘤相关抗原自身抗体在肿瘤患者血清中出现的频率非常低，一般为10％-30％左右，难以达到食管癌早期诊断的目的，因此通过联合检测食管癌患者血清中存在的多种抗肿瘤相关抗原抗体对食管癌的早期诊断、高危人群筛查具有一定的可能性和可行性。数年来，本研究团队一直致力于食管癌发生发展的机制研究，对食管癌的自身抗体谱也进行了大量的研究。以食管鱗癌患者血清为研究对象，利用本研究团队建立的食管癌基因组学数据库联合自身抗体芯片技术，筛选出3种肿瘤相关抗原(KPNA6、PDE1A和CASK)，其对应的肿瘤自身抗体在食管鱗癌患者血清中表达水平与正常对照组具有显著差异，且在食管癌早期阶段甚至是癌前病变的血液样品中都能检测到，3种肿瘤相关抗原自身抗体的组合对食管癌的早期诊断具有较高的敏感性和特异性。以往大部分相关研究中所应用到的TAAs均是通过其它类型肿瘤而并非从食管癌中鉴定出来的，其在食管癌检测中的敏感性和特异性尚需进行充分的评价；有的研究虽然使用蛋白质组学技术鉴定了食管癌相关肿瘤抗原，但较少对其诱发的自身抗体作为食管癌早期免疫诊断标志物进行全面和深入的评价。因此，本研究团队筛选出使用食管鳞癌患者血清筛选出来的TAAs，及肿瘤相关抗原自身抗体对食管鳞癌的早期诊断更具有可靠性。KPNA6(核转运蛋白α6，又称输入蛋白α7)，是核转运蛋白Imp家族的一种，广泛存在于真核细胞，可实现大分子蛋白质的穿越核膜的转运，其配体中有许多重要的信号分子，如细胞周期蛋白、组蛋白、癌蛋白等，使其与细胞的信号转导、细胞分裂及生长发育、细胞调亡等重要生命活动密切相关。PDE1A(磷酸二酯酶1A)，主要通过水解细胞内的cAMP和cGMP，在参与细胞增殖的信号传导途径中起着关键作用。降低PDE1A的活性或表达量可以显著促进细胞凋亡，同时显著上调抑癌基因，此作用在黑色素瘤细胞系和急性淋巴细胞白血病细胞系上均有报道。CASK(钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶)，是膜结合的鸟苷酸激酶(MAGUK)家族的成员，定位于细胞粘附位点，结合多种靶蛋白形成多蛋白复合物，参与细胞增殖分化、基因转录、细胞膜骨架构建、细胞连接及传递细胞内外信息等过程。因此，结合本实验室研究发现，KPNA6、PDE1A和CASK对应的3种肿瘤相关抗原自身抗体的组合，对早期食管鳞癌患者的检测具有较高的灵敏度和特异性，特别适用于对食管癌高发区无症状人群进行食管癌早期筛查(无创、简便、经济)，以期提高食管癌早期检出率，改善患者生存质量，减轻家庭和社会负担。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题和不足，本专利技术的目的之一旨在提供一种用于早期食管癌筛查的标志物，本专利技术的目的之二旨在提供一种用于早期食管癌筛查的标志物的应用，本专利技术的目的之三旨在提供一种早期食管癌联合筛查试纸条。为实现专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术首先提供了一种用于早期食管癌筛查的标志物，所述标志物为KPNA6蛋白、PDE1A蛋白和CASK蛋白中的任意一种或任意两种的组合或三种的组合。本专利技术还提供了一种上述用于早期食管癌筛查的标志物在制备用于早期食管癌筛查产品中的应用。根据上述的应用，优选地，所述产品通过酶联免疫法检测样本中所述标志物的抗体，确定标志物对应的抗体的表达水平。更加优选地，所述抗体为标志物对应的自身抗体。根据上述的应用，优选地，所述样本为血清。根据上述的应用，优选地，所述产品为试纸条或试剂盒。本专利技术还提供了一种早期食管癌联合筛查试纸条，所述试纸条包括结合垫和层析垫，所述结合垫上包被有鼠抗人IgG单克隆抗体和兔IgG单克隆抗体，鼠抗人IgG单克隆抗体和兔IgG单克隆抗体上均带有可检测的标记物；所述层析垫上设有三条检测线和一条质控线，检测线上包被有检测抗原，三条检测线包被的检测抗原分别为KPN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于早期食管癌筛查的标志物，其特征在于，所述标志物为PDE1A蛋白或PDE1A蛋白与KPNA6蛋白的组合或PDE1A蛋白与CASK蛋白的组合。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于早期食管癌筛查的标志物，其特征在于，所述标志物为PDE1A蛋白或PDE1A蛋白与KPNA6蛋白的组合或PDE1A蛋白与CASK蛋白的组合。


2.权利要求1所述标志物在制备用于早期食管癌筛查产品中的应用。


3...

【专利技术属性】
技术研发人员：王立东，王盼盼，宋昕，赵学科，杨苗苗，程锟，徐瑞华，靳艳，韩文莉，蔺红丽，李留玉，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：河南;41