基于DDX24及其上下游分子RFX8和Lamb1对肝细胞性肝癌诊断和治疗的应用制造技术

本发明专利技术属于医药产品技术领域，具体涉及基于DDX24及其上下游分子RFX8和Lamb1对肝细胞性肝癌诊断和治疗的应用。本发明专利技术研究发现与癌旁正常组织相比，原发性肝癌组织中DDX24表达水平升高，且升高水平与肿瘤大小相关。生存分析显示，RFX8可在转录水平上调DDX24表达，miR‑526a‑5p可直接结合DDX24的mRNA并对其进行降解。DDX24可通过下游LAMB1通路促进了HCC的发展，该通路的研究有望为HCC的诊疗提供理论基础及实验依据。

【技术实现步骤摘要】
基于DDX24及其上下游分子RFX8和Lamb1对肝细胞性肝癌诊断和治疗的应用
本专利技术涉及医药产品
，更具体地，涉及基于DDX24及其上下游分子RFX8和Lamb1对肝细胞性肝癌诊断和治疗的应用。
技术介绍
肝细胞性肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是恶性原发性肝癌中最常见且侵袭性极高的一类肿瘤。尽管近年来HCC的治疗取得了进展，但HCC的复发和转移仍然不可避免，且晚期HCC患者的5年生存率只有25％。因此，研究HCC的发病机制，实现HCC的精准靶向治疗，提高HCC临床预后预测的准确性，改善患者的生存质量是一个巨大的挑战。DEAD-box家族以保守的Asp-Glu-Ala-Asp(DEAD)基序为特征，是在人类中发现的最大的RNA解旋酶家族，它共包含37个成员。DEAD-box蛋白在包括RNA输出、pre-mRNA剪接、RNA凝结、核糖体生物形成、转录调控和翻译起始等RNA代谢的过程中必不可少，因此DEAD-box蛋白在胚胎形成、精子形成、细胞生长和肿瘤形成等多种生物过程中发挥基本功能。目前的研究表明DEAD-box家族蛋白在癌症中起着重要但不一致的作用。例如，DDX21、DDX31和DDX46在多个的癌症中起促癌作用，而DDX3、DDX10和DDX47则被证明有抑癌作用，这表明DEAD-box家族蛋白在肿瘤的发生发展中表现出复杂的生物学效应，通过研究RNA解旋酶在肿瘤中的作用机制，可为肿瘤的治疗提供新的分子靶点。作为DEAD-box家族中独特的成员，DDX24蛋白包含有一个氨基酸序列(257-385)，该序列在人类DEAD-box家族的其他成员中并不存在。我们之前的研究发现，DDX24的突变(271位谷氨酸突变为赖氨酸)与“多器官静脉淋巴缺损综合征”(MOVLD)有关，该疾病累及多个器官；现有技术已有披露，DDX24可能通过多种途径参与癌症的发生，在人类多种癌细胞中过表达，这提示人们DDX24可能具有促癌功能，然而现有技术对于DDX24在肿瘤发生发展中的精确作用机制还不明确，以至于缺乏与DDX24可能相关的疾病的研究治疗手段。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术没有明确DDX24在肿瘤发生发展中的精确作用机制，通过研究HCC和DDX24的关系，明确了DDX24在细胞迁徙中起到作用，且其在HCC中表达上调，推测DDX24可能在HCC进展中发挥重要作用，以期为HCC的早期检测、诊断、治疗及预后提供新方法。本专利技术的首要目的是提供DDX24基因或其表达产物在开发、筛选肝细胞癌功能产品方面的应用，所述功能产品对DDX24基因或其表达产物具有抑制作用。本专利技术的第二个目的是提供对DDX24基因或其表达产物具有抑制作用的功能产品在制备预防或/和缓解或/和治疗肝细胞癌的产品方面的应用。本专利技术的第三个目的是提供一种提高肝细胞癌患者临床预后准确率的药盒或试剂盒。本专利技术的目的通过以下技术方案实现：本专利技术首先提供DDX24基因或其表达产物在开发、筛选肝细胞癌功能产品方面的应用，所述功能产品对DDX24基因或其表达产物具有抑制作用。本专利技术还提供对DDX24基因或其表达产物具有抑制作用的功能产品在制备预防或/和缓解或/和治疗肝细胞癌的产品方面的应用。本专利技术鉴定了DDX24是一种促进HCC的发生发展的蛋白。在HCC组织中DDX24高表达与预后不良相关。在体内外抑制DDX24的表达均能抑制肝癌的生长和转移。我们还发现，DDX24蛋白与LAMB1的mRNA结合并使其稳定，LAMB1的mRNA可通过ERK/AKT和EMT信号通路促进HCC的生长和转移。另还还进一步发现DDX24是RFX8的下游靶点，RFX8与DDX24启动子结合，增强了DDX24的转录活性，导致DDX24在HCC中的表达上调。总之，我们的结果表明DDX24在HCC中是促瘤因子，是HCC潜在的预后指标和治疗靶点。优选的，所述功能产品为能够对肝细胞癌的发生、发展产生治疗、缓解、抑制、调节的有益作用的产品。更优选的，所述功能产品具有下调DDX24基因的表达、转录、或其表达产物的功能。另外，本专利技术研究还发现高表达DDX24的患者更容易合并肿瘤复发和肝硬化结节，因此，优选的，所述功能产品还能够用于降低肝细胞癌的合并疾病的发生率；所述肝细胞癌的合并疾病包括肿瘤复发和肝硬化结节。本专利技术通过研究发现：与DDX24表达相关的细胞功能改变包括细胞的生长和运动，本专利技术还运用DDX24特异性短发夹结构RNAs分别在肝癌细胞中瞬时敲除DDX24并进行了体外细胞迁移和侵袭实验，结果显示敲低DDX24可以抑制肝癌细胞的迁移和侵袭；因此，优选的，利用对DDX24基因或其表达产物具有抑制作用的功能产品，可以抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。本专利技术另外通过构建异种移植小鼠模型，观察发现，降低DDX24的表达可以显著抑制皮下肿瘤的大小和重量。因此，优选的，所述功能产品用于抑制肝细胞癌的生长和转移。更优选的，所述功能产品包括：DDX24核酸抑制剂，DDX24蛋白抑制剂，DDX24基因缺陷或沉默的免疫相关细胞、其分化细胞或者基因重组构建体中的一种或多种。本专利技术通过研究DDX24与HCC的发生发展的关系，明确了DDX24对HCC的作用机制，具体的，研究发现：DDX24蛋白与LAMB1的mRNA结合并能增加其稳定性进而影响HCC细胞的增殖、迁移和侵袭作用，即LAMB1是DDX24的下游靶点，且LAMB1的表达与DDX24正相关，功能研究发现，通过下调DDX24对HCC细胞迁移、侵袭和生长的抑制作用可部分被LAMB1过表达挽救。对DDX24上游调节机制研究发现RFX8可结合在DDX24启动子并在转录水平上调DDX24的表达，即RFX8是DDX24的下游靶点，且RFX8的表达与DDX24的启动子的活性正相关，功能研究发现，敲低RFX8抑制了HCC细胞的迁移、侵袭和增殖，另一方面，过表达DDX24在很大程度上挽救了RFX8敲低引起的细胞功能抑制。因此，通过抑制DDX24/LAMB1/RFX8，可以实现对DDX24基因或其表达产物的抑制作用。因此，更优选的，所述功能产品包括以下任一种：(i)以DDX24/LAMB1/RFX8或DDX24/LAMB1/RFX8转录本为靶序列，且能够抑制DDX24/LAMB1/RFX8基因表达产物的表达或基因转录的小干扰RNA、dsRNA、shRNA、微小RNA、反义核酸；(ii)能表达或形成(i)中所述小干扰RNA、dsRNA、shRNA、微小RNA、反义核酸构建体；(iii)含有DDX24/LAMB1/RFX8或DDX24/LAMB1/RFX8互补序列，且能够在转入体内后形成抑制DDX24/LAMB1/RFX8基因表达产物的表达或基因转录的干扰分子的构建体；(iv)抑制或敲除DDX24/LAMB1/RFX8基因序列后的免疫相关细胞、其分化细胞或构建体。另外，本专利技术还对DDX24转本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.DDX24基因或其表达产物在开发、筛选肝细胞癌功能产品方面的应用，所述功能产品对DDX24基因或其表达产物具有抑制作用；或对DDX24基因或其表达产物具有抑制作用的功能产品在制备预防或/和缓解或/和治疗肝细胞癌的产品方面的应用。/n

【技术特征摘要】
1.DDX24基因或其表达产物在开发、筛选肝细胞癌功能产品方面的应用，所述功能产品对DDX24基因或其表达产物具有抑制作用；或对DDX24基因或其表达产物具有抑制作用的功能产品在制备预防或/和缓解或/和治疗肝细胞癌的产品方面的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述功能产品具有下调DDX24基因的表达、转录、或其表达产物的功能。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述功能产品用于降低肝细胞癌的合并疾病的发生率；所述肝细胞癌的合并疾病包括肿瘤复发和肝硬化结节。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述功能产品包括：DDX24核酸抑制剂，DDX24蛋白抑制剂，DDX24基因缺陷或沉默的免疫相关细胞、其分化细胞或者基因重组构建体中的一种或多种。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述功能产品用于抑制肝细胞癌的癌细胞增殖、迁移和侵袭。


6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述功能产品用于抑制肝细胞癌的生长和转移。


7.根据权利要求5或6所述的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：单鸿，何欢欢，刘天泽，甘海润，何思蒙，
申请(专利权)人：中山大学附属第五医院，
类型：发明
国别省市：广东;44