一种快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条及其制备和检测方法技术

本发明专利技术提供一种快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条及其制备和检测方法，包括半抗原的制备：通过琥珀酸酐法对与硫丹具有相似结构的硫丹醇进行衍生化，引入羧基，制备得到硫丹半抗原；完全抗原的制备：将所述硫丹半抗原通过活化酯法偶联蛋白质分别制备免疫原和包被原；单克隆抗体的制备：用所述免疫原免疫小鼠制备硫丹单克隆抗体；胶体金免疫层析试纸的制备：将所述二抗涂在硝酸纤维素膜上作为质控线，将所述包被原喷涂在硝酸纤维素膜作为检测线。本发明专利技术适宜现场大量样本快速筛选，灵敏度高、检测速度快、成本低和无需仪器辅助，可实现对硫丹的现场检测，该方法适用于食品安全检测领域。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条及其制备和检测方法
本专利技术属于食品安全检测
，尤其涉及一种快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条及其制备和检测方法。
技术介绍
硫丹又称赛丹、硕丹和安杀丹，其化学名称是1,2,3,4,7,7-六氯双环(2,2,1)-庚烯-(2)双羟甲基-5,6-亚硫酸酯，分子式为C9H6Cl6O3S，主要由两种同分异构体(α-硫丹和β-硫丹)的混合物的形式存在。硫丹是于1945年研发合成的一种环戊二基类的机氯农药，由于其杀虫效果好且持效性强而广泛应用于水果、蔬菜和茶叶等农作物的害虫防治，通过与氯离子通道结合，阻碍氯离子的内流而导致神经毒性作用使虫体死亡。硫丹是一种典型的持久性有机污染物(POPs)，国家癌症机构通过动物实验证实了POPs是诱发癌症的重要原因之一。另外，硫丹在环境中具有高生物毒性、持久性和远距离迁移等特点，可以在水源、食物链和人体组织中长期地累积，其潜在的致癌性能够对人体造成持续性的危害，因此引起了国内外广泛的关注。2011年，硫丹被列入《斯德哥尔摩公约》中的禁用物质列表当中，2019年3月26本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n半抗原的制备：通过琥珀酸酐法对与硫丹具有相似结构的硫丹醇进行衍生化，引入羧基，制备得到硫丹半抗原；/n完全抗原的制备：将所述硫丹半抗原通过活化酯法偶联蛋白质分别制备免疫原和包被原；/n单克隆抗体的制备：用所述免疫原免疫小鼠，通过ic-ELISA法检测筛选，进行细胞融合，得到硫丹单克隆抗体；/n胶体金免疫层析试纸的制备：将所述二抗涂在硝酸纤维素膜上作为质控线，将所述包被原喷涂在硝酸纤维素膜作为检测线，再按照试纸条的结构进行组装。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
半抗原的制备：通过琥珀酸酐法对与硫丹具有相似结构的硫丹醇进行衍生化，引入羧基，制备得到硫丹半抗原；
完全抗原的制备：将所述硫丹半抗原通过活化酯法偶联蛋白质分别制备免疫原和包被原；
单克隆抗体的制备：用所述免疫原免疫小鼠，通过ic-ELISA法检测筛选，进行细胞融合，得到硫丹单克隆抗体；
胶体金免疫层析试纸的制备：将所述二抗涂在硝酸纤维素膜上作为质控线，将所述包被原喷涂在硝酸纤维素膜作为检测线，再按照试纸条的结构进行组装。


2.根据权利要求1所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述半抗原的制备方法具体为：
将硫丹醇充分溶解于吡啶，加入丁二酸酐和4-二甲氨基吡啶，旋转蒸发，加入纯水溶解沉淀物，加入NaOH溶液将pH调至9～10，用正己烷萃取，收集所有的水相，用HCl溶液将水相溶液pH调至3～4，有固体析出，过滤和烘干后得到的产物即为硫丹半抗原。


3.根据权利要求2所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述HCl溶液和NaOH溶液的浓度为1M。


4.根据权利要求2所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述硫丹醇、吡啶、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶的用量比为20～50mg：1～3mL：8～20mg：1～3mg。


5.根据权利要求1所述的快速检测硫丹的胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述完全抗原的制备是将所述半抗原通过活化酯法偶联牛血清白蛋白制备免疫原，将半抗原通过活化酯法偶联鸡卵白蛋白制备包被原，具体为：
将硫丹半抗原溶解于二甲基甲酰胺中，加入N-羟基琥珀酰亚胺NHS和1-乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：周兴华，张彩芹，赵延胜，肖香，王云，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32