一种基于荧光免疫层析技术的瘦肉精检测试纸和方法技术

本发明专利技术公布了一种基于荧光免疫层析技术的瘦肉精检测试纸及检测方法；包括试纸的制备与组装，用免疫层析试纸对瘦肉精进行定量检测；检测试纸包括撑底板及粘贴在撑底板上表面的样品垫、标记物垫、捕获膜、吸水垫，所述捕获膜上含有C线和T线；所述标记物垫含有荧光微球标记的瘦肉精检测抗体或者含有荧光微球标记的对照蛋白或抗体；所述捕获膜上的T线含有瘦肉精抗原；所述C线含有能结合瘦肉精检测抗体的二抗或者含有可做阳性对照的蛋白或抗体。本发明专利技术使用荧光微球与瘦肉精抗体耦联，获得荧光微球标记的瘦肉精抗体，使得制备的试纸在检测过程中具备更高的灵敏度，同时荧光免疫层析定量检测瘦肉精成分的方法的可靠性也得到了保证。

【技术实现步骤摘要】
一种基于荧光免疫层析技术的瘦肉精检测试纸和方法
本专利技术涉及生物免疫检测领域，涵盖了纳米材料技术、免疫学技术及侧流层析技术，更具体的说，本专利技术涉及一种基于荧光免疫层析技术的瘦肉精检测试纸和方法。
技术介绍
瘦肉精是一种促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的激素类药物。这类药物的基本化学结构为β-苯乙胺，因此，也称为β-受体激动剂(β-agonist)，按其取代基类型可分为苯胺型、苯酚型、苯二酚型三大类。代表药物分别为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺。早期人们发现将瘦肉精添加到动物饲料中，可以促进动物体内蛋白质合成，抑制脂肪的合成和积累，提高瘦肉率，故将其广泛应用于养殖业。但由于瘦肉精被大量的不规范使用，且其在体内吸收快消化慢，导致瘦肉精在动物体内有残留。人们食用了这些含有瘦肉精的畜禽肉、奶、蛋、鱼等食品，可使人体产生明显的中毒症状，甚至会危害生命。因此，有必要对饲料、奶、肉的原料和加工产品都进行瘦肉精的检测。对于动物组织样品中瘦肉精的检测，目前检测方法主要是仪器检测方法和免疫学分析方法两大类。仪器检测法包括气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)等，这些检测方法是利用色谱分离原理，把瘦肉精从复杂的样品基质中分离出来，通过质谱检测器对其进行结构信息确证而达到检测目的。这种检测方法的优点是定性、定量准确，检测结果可靠，缺点是需要购买昂贵的设备，需要专业技术人员在实验室中操作，而且对样品的前处理过程较为繁琐，溶剂消耗量较大，耗时较长，难以及时应对突发性食物中毒的快速分析。免疫学分析方法主要包括酶联免疫法(ELISA)和胶体金免疫层析试纸条法(GLFIS)。ELISA具有操作简单，检测成本比较低，灵敏度比较高等优点，但是需要多步骤的洗涤，反应时间较长，且其主要检测样本是尿液和血浆，对于动物组织样本的检测容易出现假阳性结果。GLFIS具有操作简单、快速、成本低等优点，但该方法的灵敏度比较低，而且不能定量检测。因此，开发一种快速从动物组织中提取瘦肉精的方法，对动物组织样本的检测具有重要意义。同时基于免疫层析技术的优势，构建一种新型的免疫层析的方法，对实现瘦肉精快速、简单、高灵敏的检测具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术目的是针对现有技术存在的缺陷提供一种方便、快速、能高灵敏检测动物组织样品中瘦肉精的试纸及检测方法。本专利技术为实现上述目的，采用如下技术方案：一种基于荧光免疫层析技术的瘦肉精检测试纸，包括撑底板及粘贴在撑底板上表面的样品垫、标记物垫、捕获膜、吸水垫，相邻的每一部分均在边接处交叠边接，所述捕获膜上含有C线和T线；所述标记物垫含有荧光微球标记的瘦肉精检测抗体或者含有荧光微球标记的对照蛋白或抗体；所述捕获膜上的T线含有瘦肉精抗原；所述C线含有能结合瘦肉精检测抗体的二抗或者含有可做阳性对照的蛋白或抗体。优选的，所述样品垫为玻璃纤维、滤纸或滤血膜中的一种；所述标记物垫为玻璃纤维、滤纸或聚酯膜中的一种；其中，样品垫和标记物垫材质相同时可整合在一起。根据本专利技术的另一方面，还公开了一种瘦肉精检测试纸的制备方法，包括如下步骤：S1：准备荧光微球与瘦肉精抗原抗体；S2：荧光微球与瘦肉精抗体耦联，获得荧光微球标记的瘦肉精抗体；S3：荧光微球标记的瘦肉精抗体处理标记物垫，瘦肉精抗原以及阳性对照抗体处理捕获膜；将处理好的标记物垫和捕获膜置于37℃恒温箱中干燥1-2h；S4：试纸条大卡的组装与切割，捕获膜首先粘贴在支撑底板上，在靠T线一侧先后粘贴标记物垫以及样品垫；在靠C线一侧粘贴吸水垫，然后用切割机切割成4—5mm宽的试纸，于铝箔袋中封闭保存备用。优选的，所述荧光微球包括但不限于球体中包埋了荧光分子的二氧化硅微球、聚苯乙烯微球；所述微球直径在10nm-10μm之间，其表面带有羧基、氨基或酮基的修饰官能团。优选的，所述瘦肉精抗原为瘦肉精与蛋白或核酸片段的耦合物；所述蛋白包括但不限于BSA、卵清蛋白；所述核酸片段包含10-1000个核苷酸的片段。本专利技术还公开了一种瘦肉精检测方法，包括如下步骤：S1：将含有不同浓密度的瘦肉精对照溶液分别滴加到检测试纸上反应后用荧光检测仪检测荧光信号；S2：绘制标准曲线；S3：将动物组织样品用0.5％-10％NaCL处理1min-20min，获得样品溶液；S4：将获得的样品溶液用稀释液稀释2-10倍，取样滴加到检测试纸的样品垫上，反应后检测荧光信号；S5：将荧光强度结合标准曲线计算瘦肉精含量浓度。优选的，步骤S1中，瘦肉精对照溶液的浓度分别为0μg/L，0.5μg/L，1μg/L，2μg/L，10μg/L，20μg/L，50μg/L，100μg/L。优选的，所述试纸检测的瘦肉精成分包括但不限于盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇。本专利技术的有益效果：1.本专利技术的检测试纸，在标记物垫上滴加有荧光微球标记的瘦肉精检测抗体或者荧光微球标记的对照蛋白或抗体，在T线处滴加瘦肉精抗原，在C线处滴加能结合瘦肉精检测抗体的二抗或者可做阳性对照的蛋白或抗体，使得试纸具备更灵活、灵敏的检测性；当样品垫和标记物垫材质相同时可整合在一起，这样可减少裁剪、处理和粘贴的生产工序，节约了人力、时间成本。2.本专利技术的检测试纸制备工艺简单，使用荧光微球与瘦肉精抗体耦联，获得荧光微球标记的瘦肉精抗体，使得制备的试纸在检测过程中具备更高的灵敏度，同时荧光免疫层析定量检测瘦肉精成分的方法的可靠性也得到了保证。3.本专利技术对样品进行检测时，将动物组织样品只需用0.5％-10％NaCL前期处理1min-20min，即可获得样品溶液，相比现有技术，此法对样品的前期处理过程简单快速，溶剂消耗量少，处理时间短，可以及时应对突发性食物中毒的快速分析；本方法既可以定量检测，又具备超高的检测准确度和灵敏度，不容易出现出现假阳性结果。附图说明图1是本专利技术中免疫层析检测瘦肉精的试纸示意图。图2是本专利技术实施例3中免疫层析技术所得荧光强度与瘦肉精(盐酸克伦特罗)浓度的关系曲线图；图3是本专利技术实施例4中免疫层析技术所得荧光强度与瘦肉精(莱克多巴胺)浓度的关系曲线图；图4是本专利技术实施例5中免疫层析技术所得荧光强度与瘦肉精(沙丁胺醇)浓度的关系曲线图。图中，1-样品垫；2-标记物垫；3-捕获膜；4-吸水垫；5-支撑底板；6-C线；7-T线。具体实施方式下面将结合附图与实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。下述实施例中所述试验方法或测试方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均从常规商业途径获得，或以常规方法制备。实施例1如图1所示，本专利技术基于荧光免疫层析技术的瘦肉精检测试纸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于荧光免疫层析技术的瘦肉精检测试纸，包括撑底板(5)及粘贴在撑底板(5)上表面的样品垫(1)、标记物垫(2)、捕获膜(3)、吸水垫(4)，相邻的每一部分均在边接处交叠边接，其特征在于：所述捕获膜(3)上含有C线(6)和T线(7)；所述标记物垫(2)含有荧光微球标记的瘦肉精检测抗体或者含有荧光微球标记的对照蛋白或抗体；所述捕获膜(3)上的T线(7)含有瘦肉精抗原；所述C线(6)含有能结合瘦肉精检测抗体的二抗或者含有可做阳性对照的蛋白或抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光免疫层析技术的瘦肉精检测试纸，包括撑底板(5)及粘贴在撑底板(5)上表面的样品垫(1)、标记物垫(2)、捕获膜(3)、吸水垫(4)，相邻的每一部分均在边接处交叠边接，其特征在于：所述捕获膜(3)上含有C线(6)和T线(7)；所述标记物垫(2)含有荧光微球标记的瘦肉精检测抗体或者含有荧光微球标记的对照蛋白或抗体；所述捕获膜(3)上的T线(7)含有瘦肉精抗原；所述C线(6)含有能结合瘦肉精检测抗体的二抗或者含有可做阳性对照的蛋白或抗体。


2.如权利要求1所述的基于荧光免疫层析技术的瘦肉精检测试纸，其特征在于：所述样品垫(1)为玻璃纤维、滤纸或滤血膜中的一种；所述标记物垫(2)为玻璃纤维、滤纸或聚酯膜中的一种；其中，样品垫(1)和标记物垫(2)材质相同时可整合在一起。


3.一种如权利要求1-2任一项所述的瘦肉精检测试纸的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1：准备荧光微球与瘦肉精抗原抗体；
S2：荧光微球与瘦肉精抗体耦联，获得荧光微球标记的瘦肉精抗体；
S3：荧光微球标记的瘦肉精抗体处理标记物垫(2)，瘦肉精抗原以及阳性对照抗体处理捕获膜(3)；将处理好的标记物垫(2)和捕获膜(3)置于37℃恒温箱中干燥1-2h；
S4：试纸条大卡的组装与切割，捕获膜(3)首先粘贴在支撑底板(5)上，在靠T线(7)一侧先后粘贴标记物垫(2)以及样品垫(1)；在靠C线(6)一侧粘贴吸水垫(4)，然后用切割机切割成4-5mm宽的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨挥，
申请(专利权)人：嘉兴朝云帆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33