一种用于诺氟沙星快速检测的黑磷比色/光热双模式可视化免疫层析检测方法技术

本发明专利技术提供了一种用于诺氟沙星快速检测的黑磷比色/光热双模式可视化免疫层析检测方法，属于免疫层析试纸条检测技术领域；所述检测方法采用的试纸条包括底板和在所述底板上依次黏附的加样垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜包括检测区和质控区；所述加样垫滴加有黑磷纳米片。本发明专利技术所述加样垫滴加的BP纳米片作为比色/光热显示剂。通过对T线处的热量进行采集和分析能够获得比色/光热数据，“比色/光热双读出”的方法提高了检测的准确性。

【技术实现步骤摘要】
一种用于诺氟沙星快速检测的黑磷比色/光热双模式可视化免疫层析检测方法
本专利技术涉及免疫层析试纸条检测
，尤其涉及一种用于诺氟沙星快速检测的黑磷比色/光热双模式可视化免疫层析检测方法。
技术介绍
荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术。该技术以固定有检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(抗抗体)的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。目前的荧光免疫层析多为单一荧光读取，易受外界环境影响，检测准确度还有待提高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于诺氟沙星快速检测的黑磷比色/光热双模式可视化免疫层析检测方法，本专利技术的磁检测方法具有检测准确性好的优点。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种检测诺氟沙星的磁性上转换荧光免疫层析试纸条，包括底板和在所述底板上依次黏附的加样垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜包括检测区和质控区，所述加样垫滴加有黑磷纳米片，使用时现用现制；所述结合垫包被有磁性上转换荧光复合微球标记的诺氟沙星单克隆抗体；所述检测区包被有诺氟沙星-牛血清白蛋白；所述质控区包被有二抗。优选的，所述磁性上转换荧光复合微球为羧基修饰Fe@Fe3O4@UCP。优选的，所述黑磷纳米片的制备方法包括：将无氧N-甲基吡咯烷酮水溶液和黑磷晶体粉末混合，超声液相剥离黑磷晶体后，以3500～4500rpm第一离心，收集上清液，以15000～18000rpm对所述上清液第二离心，收集沉淀，得到黑磷纳米片。本专利技术还提供了一种诺氟沙星检测盒，包括盒体和盒盖；所述盒体内放置有上述方案所述磁性上转换荧光免疫层析试纸条1、激光发射组件2和光热信号采集组件3和充电组件4；所述盒盖上设置有用于磁性上转换荧光免疫层析试纸条固定的组件5；所述盒盖上开设有3个孔，分别为第一孔6、第二孔7和第三孔8。优选的，所述第一孔6的直径为150mm；所述第二孔7和第三孔8的直径分别为90mm。优选的，所述激光发射组件发射能够发射波长为808nm的激光。本专利技术还提供了上述方案所述磁性上转换荧光免疫层析试纸条或者所述诺氟沙星试剂盒在检测诺氟沙星中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种检测诺氟沙星的磁性上转换荧光免疫层析试纸条，包括底板和在所述底板上依次黏附的加样垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜包括检测区和质控区，所述加样垫滴加有黑磷纳米片，使用时现用现制。本专利技术所述加样垫滴加的BP纳米片作为比色/光热显示剂，由于BP不能吸附蛋白复合物，因此在形成免疫复合物的位点不会将BP固定住。同理，直接暴露的那些包被原和二抗位点会将BP固定住。BP水溶液呈现棕褐色，待侧流层析反应完成后能够通过根据T线和C线处的颜色得到定性检测结果。通过对T线处的热量进行采集和分析能够获得比色/光热数据，根据采集的1min内的T线热量变化值进行定量检测，“比色/光热双读出”的方法提高了检测的准确性。附图说明图1为本专利技术试纸检测示意图及配套设备模式图；图2为检测盒的盒体平面展开图，其中其中1为磁性上转换荧光免疫层析试纸条、2为激光发射组件、3为光热信号采集组件、4为充电组件；图3为检测盒的盒盖平面展开图，其中5为磁性上转换荧光免疫层析试纸条固定位、6为第一孔、7为第二孔、8为第三孔；图4为检测盒的外部结构图；图5为热成像仪与手机连接图；图6为热分析App主界面；图7为磁性内核Fe@Fe3O4的透射电镜图；图8为808nm激发的Fe@Fe3O4@UCP的透射电镜图；图9为808nm激发的Fe@Fe3O4@UCP的元素分析图；图10为羧基修饰前后Fe@Fe3O4@UCP的红外光谱图；图11为黑磷纳米片的透射电镜表征图；图12为黑磷纳米片的原子力显微镜表征图；图13为黑磷纳米片的光热性能表征图(第一行：FLIROne采集均相；第二行：ThermalAnalysis采集固相)；图14为BP不同加样体积的液体流动情况；图15为BP不同浓度的C线颜色及扩散情况；图16为60～120s的BP升温情况；图17为Fe@Fe3O4@UCP/BP-LFIS检测NFX的试纸直观图；图18为温度上升lg(T-T0)与NFX浓度lgC的关系曲线；图19为lg(T/C)与NFX浓度lgC的关系曲线；图20为Fe@Fe3O4@UCP/BP-LFIS检测NFX的特异性。具体实施方式本专利技术提供了一种检测诺氟沙星的磁性上转换荧光免疫层析试纸条，包括底板和在所述底板上依次黏附的加样垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜包括检测区和质控区，所述加样垫滴加有黑磷纳米片，使用时现用现制；所述结合垫包被有磁性上转换荧光复合微球标记的诺氟沙星单克隆抗体；本专利技术提供的荧光免疫层析试纸条包括黏附在所述结合垫上的硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜包括检测区和质控区；所述检测区包被有诺氟沙星-牛血清白蛋白；所述质控区包被有二抗；所述二抗优选为山羊抗鼠二抗。在本专利技术中，所述诺氟沙星-牛血清白蛋白购自于Abcam公司。在本专利技术中，所述磁性上转换荧光复合微球优选为羧基修饰Fe@Fe3O4@UCP；所述Fe@Fe3O4@UCP的制备方法优选的和CN109507419A提供的核-壳-壳结构磁性上转换复合微球的制备方法相同；磁性上转换荧光复合微球的直径优选为15～18nm，更优选为16～17nm，修饰羧基前后磁性上转换荧光复合微球的直径不变，不受修饰影响。在本专利技术中，羧基修饰无需在纳米颗粒表面硅烷化形成二氧化硅壳层，有效降低了因壳层引起的荧光发射强度降低问题。并且，修饰羧基方法简单，与氨基修饰相比，步骤更少，缩短了荧光材料的制备时间。在本专利技术中，所述磁性上转换荧光复合微球优选的分散于PBS中；所述磁性上转换荧光复合微球的浓度优选为0.3～0.8mg/ml，更优选为0.5mg/ml；所述磁性上转换荧光复合微球分散液的包被量优选为12～13μL/cm2，更优选为12.5μL/cm2。本专利技术具体实施过程中，所述黑磷纳米片无需提前包被，滴加样品反应后10min加入黑磷纳米片；所述黑磷纳米片的制备方法优选的包括：将无氧N-甲基吡咯烷酮水溶液和黑磷晶体粉末混合，超声液相剥离黑磷晶体后，以3500～4500rpm第一离心，收集上清液(除去沉淀中未剥离的BP晶体残渣)，以15000～18000rpm对所述上清液第二离心，收集沉淀，得到黑磷纳米片。在本专利技术中，所述无氧N-甲基吡咯烷酮水溶液中N-甲基吡咯烷酮的浓度优选为3～5mg/8ml，更优选为1mg/ml；所述无氧N-甲基吡咯烷酮水溶液的溶剂优选为超纯水；所述无氧N-甲基吡咯烷酮水溶液优选的通过氩气鼓吹N-甲基吡咯烷酮水溶液15min得到，以除去液体中的氧气。...

【技术保护点】
1.一种检测诺氟沙星的磁性上转换荧光免疫层析试纸条，包括底板和在所述底板上依次黏附的加样垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜包括检测区和质控区，其特征在于，所述结合垫包被有磁性上转换荧光复合微球标记的诺氟沙星单克隆抗体；所述加样垫滴加有黑磷纳米片，使用时现用现制；所述检测区包被有诺氟沙星-牛血清白蛋白；所述质控区包被有二抗。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测诺氟沙星的磁性上转换荧光免疫层析试纸条，包括底板和在所述底板上依次黏附的加样垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜包括检测区和质控区，其特征在于，所述结合垫包被有磁性上转换荧光复合微球标记的诺氟沙星单克隆抗体；所述加样垫滴加有黑磷纳米片，使用时现用现制；所述检测区包被有诺氟沙星-牛血清白蛋白；所述质控区包被有二抗。


2.根据权利要求1所述的磁性上转换荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述磁性上转换荧光复合微球为羧基修饰Fe@Fe3O4@UCP。


3.根据权利要求1所述的磁性上转换荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述黑磷纳米片的制备方法包括：
将无氧N-甲基吡咯烷酮水溶液和黑磷晶体粉末混合，超声液相剥离后，以3500～4500rpm的速度将得到的剥离体系第一离心，收集上清液，以15000～18000rpm的速度对所述上清液...

【专利技术属性】
技术研发人员：周焕英，任舒悦，高志贤，王永辉，李双，白家磊，
申请(专利权)人：军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12