【技术实现步骤摘要】
一种快速检测大肠杆菌O157：H7的双抗体夹心ELISA方法
本专利技术涉及一种快速检测大肠杆菌O157：H7的双抗体夹心ELISA方法，属于免疫分析领域，具体是一种快速检测大肠杆菌O157：H7的双抗体夹心ELISA方法。
技术介绍
大肠杆菌O157：H7(EscherichiacoliO157:H7)是大肠杆菌O157:H7是肠出血性大肠杆菌中的典型代表，对人类致病而对反刍动物如牛等无致病性，因此牛和牧场都是该致病菌的天然储藏容器。该致病菌在环境中分布广泛，容易由水、土壤、动物粪便等传播到食物链，进而进入人体并导致疾病爆发，典型症状包括肠胃炎甚至出血性腹泻和溶血性尿毒症。目前，我国对于食品中大肠杆菌O157:H7限量规定为25g样品中不得检出。大肠杆菌O157:H7等食源性致病菌的标准检测方法是传统的培养法，费时费力、成本高、专业性强，检测效率难以满足需求。免疫分析和DNA聚合酶链式反应(PCR)方法是目前主要的快速检测技术。PCR方法检测大肠杆菌O157:H7需要同时扩增多种目标片段来保证准确性，要求比较专业的操作技术...
【技术保护点】
1.一种快速检测大肠杆菌O157：H7的双抗体夹心ELISA方法，其特征在于：以两株单克隆细胞株分别分泌的单克隆抗体2G12和单克隆抗体12B1作为配对抗体，分别用于特异性识别大肠杆菌O157：H7外膜蛋白OmpC膜外特异性多肽表位和大肠杆菌O157：H7脂多糖O特异性侧链，建立大肠杆菌O157：H7双抗体夹心ELISA方法，所述单克隆细胞株包括大肠杆菌O157：H7特异性细胞株SM6E8和大肠杆菌O157：H7特异性细胞株RCD，其分泌的单克隆抗体分别对应2G12和12B1。/n
【技术特征摘要】
1.一种快速检测大肠杆菌O157：H7的双抗体夹心ELISA方法，其特征在于：以两株单克隆细胞株分别分泌的单克隆抗体2G12和单克隆抗体12B1作为配对抗体，分别用于特异性识别大肠杆菌O157：H7外膜蛋白OmpC膜外特异性多肽表位和大肠杆菌O157：H7脂多糖O特异性侧链，建立大肠杆菌O157：H7双抗体夹心ELISA方法，所述单克隆细胞株包括大肠杆菌O157：H7特异性细胞株SM6E8和大肠杆菌O157：H7特异性细胞株RCD，其分泌的单克隆抗体分别对应2G12和12B1。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测大肠杆菌O157：H7的双抗体夹心ELISA方法，其特征在于：所述大肠杆菌O157：H7特异性细胞株SM6E8于2019年11月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号CGMCCNo.19164，分类命名为单克隆细胞株；所述大肠杆菌O157：H7特异性细胞株RCD于2019年11月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号CGMCCNo.19163，分类命名为单克隆细胞株。
3.根据权利要求1所述的一种快速检测大肠杆菌O157：H7的双抗体夹心ELISA方法，其特征在于：所述单克隆抗体2G12用于识别大肠杆菌O157：H7外膜蛋白OmpC膜外两条相邻loop结构，分别为OmpC蛋白第296-311个氨基酸，第256-268个氨基酸，关键识别表位为第302-307个氨基酸，用于特异性捕获大肠杆菌O157：H7细菌。
4.根据权利要求1所述的一种快速检测大肠杆菌O157：H7的双抗体夹心ELISA方法，其特征在于：包括如下步骤：
(一)制备特异性大肠杆菌O157：H7单克隆抗体：以大肠杆菌O157：H7煮沸抗原为免疫原，免疫6-8周龄的BALB/c小鼠，经免疫、融合，筛选对大肠杆菌O157：H7强阳性的细胞进行亚克隆，获取大肠杆菌O157：H7特异性单克隆抗体；
(二)筛选配对单克隆抗体：纯化步骤(1)中获取的大肠杆菌O157：H7特异性单克隆抗体，并分别标记辣根过氧化物酶HRP，鉴定标记成功后进行夹心法配对；
(三)建立大肠杆菌O157：H7特异性夹心ELISA方法：将步骤(二)中获取的配对单克隆抗体，以2G12用作包被抗体，12B1用作检测抗体，酶标板上包被单克隆抗体2G12用于特异性捕获大肠杆菌O157：H7，并以酶标板上酶标抗体12B1-HRP与捕获的大肠杆菌O15...
【专利技术属性】
技术研发人员：王文彬，胥传来，桑雨浓，盘赛昆，刘建欣，梁夏夏，郭珊珊，刘蕾，袁倩云，
申请(专利权)人：江苏海洋大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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