一种检测红色毛癣菌的试纸条、试剂盒及试纸条的制备方法技术

本申请公开了一种检测红色毛癣菌的试纸条、试剂盒及试纸条的制备方法，属于微生物领域。所述试纸条包括底板以及在底板上依次搭接的样品垫、标记物垫、反应垫和吸水垫，所述标记物垫包被有采用不同颜色乳胶颗粒标记的抗生物素抗体和针对红色毛癣菌菌体细胞壁上几丁质的特异性抗体二；所述反应垫上形成检测区和质控区，所述检测区包被有针对红色毛癣菌菌体细胞壁上几丁质的特异性抗体一，所述质控区包被有生物素牛血清白蛋白。本申请还提供了一种包含上述试纸条的试剂盒以及试纸条的制备方法，采用本申请制备方法制备的试纸条特异性强、操作简便，短时间内便可获得检测结果且排除了检验人员主观性因素的影响，可实现现场标本的快速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种检测红色毛癣菌的试纸条、试剂盒及试纸条的制备方法
本申请属于微生物领域，特别涉及一种检测红色毛癣菌的试纸条、试剂盒及试纸条的制备方法。
技术介绍
皮肤癣菌病(Dermatophytosis)是人群中发病率最高的感染性皮肤病，在健康人和免疫功能不全的患者身上都可能发生，且复发率极高。由于皮肤癣菌病的临床表现与其他皮肤疾病如脂溢性皮炎、银屑病、念珠菌性间擦疹、红癣、湿疹等的临床表现有时相似，特别是对于免疫功能不全的患者其临床诊断会更加困难。皮肤癣菌(Dermatophytes)是皮肤癣菌病的主要病原体，是一组丝状寄生性真菌，主要侵犯人或动物的皮肤、毛发和指(趾)甲，寄生或腐生于表皮角质、毛发和甲板的角蛋白组织，引起头癣、体股癣、手足癣和甲癣。皮肤癣菌属于半知菌亚门丝孢纲丝孢目的丛梗孢科。根据大分生孢子的特征可将皮肤癣菌分为3个属，毛癣菌属(Trichophyton)：棒形大分生孢子；小孢子菌属(Microsporum)：梭形大分生孢子；表皮癣菌属(Epidermophyton)：杵状大分生孢子。目前已报告的皮肤癣菌约有45种，其中一部分仅感染动物，对人类有致病作用的约有20余种。流行病学调查结果显示我国乃至全世界最多见的皮肤癣菌都是红色毛癣菌(Trichophytonrubrum)。红色毛癣菌为亲人性皮肤癣菌，可引起体癣、股癣、手足癣、甲癣及脓癣，也可导致深部感染，引起皮肤癣菌肉芽肿。目前，主要是通过形态学方法鉴定皮肤癣菌，即显微镜下直接观察和真菌培养。但传统形态鉴定方法耗时长、结果判断易受外界培养条件及观察者主观因素影响，易导致对于非典型菌的鉴定不准确。
技术实现思路
针对真菌形态学的鉴定方法耗时长且鉴定不准确的问题，本申请提供了一种检测红色毛癣菌的试纸条、试剂盒及试纸条的制备方法。第一方面，本申请提供一种检测红色毛癣菌的试纸条，采用如下的技术方案：一种检测红色毛癣菌的试纸条，包括底板以及在底板上依次搭接的样品垫、标记物垫、反应垫和吸水垫，所述标记物垫包被有采用不同颜色乳胶颗粒标记的抗生物素抗体和针对红色毛癣菌的特异性抗体二；所述反应垫上形成检测区和质控区，所述检测区包被有针对红色毛癣菌的特异性抗体一，所述质控区包被有生物素牛血清白蛋白。通过采用上述技术方案，本申请应用双抗体夹心法的原理检测样品中的红色毛癣菌，减少了交叉反应的发生，特异性强，操作简便，短时间内便可获得检测结果，排除了检验人员的主观性因素，可实现现场标本快速检测。具体而言，本申请的试纸条在反应垫的检测区内包被有一种针对红色毛癣菌的特异性抗体，其作为检测抗体，同时在标记物垫上结合有另一种针对红色毛癣菌的特异性抗体且其被某一种颜色的乳胶颗粒标记，两种抗体形成了一套能够显色的检测系统。优选的，本申请的针对红色毛癣菌的特异性抗体二和针对红色毛癣菌的特异性抗体一均是针对红色毛癣菌菌体细胞壁上几丁质的特异性抗体。另外，在本申请试纸条反应垫的质控区形成了一套与待测红色毛癣菌菌体无关的且能呈现另一种颜色的检测系统。以上两个系统单独运行，互不干扰，避免捕获能力更强的质控区捕获更多抗原而导致检测样本假阴性的出现，且双色反应可以造成视觉差，更有利于检测结果的判读。因此，本申请试纸条可用于人体标本的检测，即检测受试者是否感染红色毛癣菌，能够避免检测人员因主观因素而导致的检测结果不准的现象的发生，还能够有效区分与皮肤癣菌病有类似临床表现的其他皮肤疾病，如脂溢性皮炎、银屑病、念珠菌性间擦疹、红癣、湿疹等，操作简便、快速、客观、检测准确率高。优选的，所述抗生物素抗体选用蓝色乳胶颗粒标记；所述针对红色毛癣菌的特异性抗体二选用红色乳胶颗粒标记。通过采用上述技术方案，本申请采用蓝色乳胶颗粒标记的抗生物素抗体能够与质控区包被的生物素牛血清白蛋白结合而呈现蓝色，采用红色乳胶颗粒标记的针对红色毛癣菌的特异性抗体二能够与试样中可能存在的红色毛癣菌结合而呈现红色。所以当检测样品中存在红色毛癣菌时，试纸条显示出蓝色和红色；当检测样品中不存在红色毛癣菌时，试纸条只显示出蓝色，红蓝双色反应，造成视觉差，更有利于检测结果的判读。优选的，所述乳胶颗粒的直径为200-500nm。更优选的，所述乳胶颗粒为直径为200、250、300、350、400、450或500nm。最优选的，所述乳胶颗粒为直径为300mm。优选的，所述乳胶颗粒选用聚苯乙烯乳胶颗粒。通过采用上述技术方案，本申请采用上述纳米直径的聚苯乙烯乳胶颗粒，能够对抗体进行有效标记，从而通过复合反应呈现不同的颜色，便于肉眼直接观察测试结果。另外，本申请的乳胶颗粒可选用商品化试剂，颗粒大小可控，避免了实验烧制的繁琐和颗粒大小不一导致的批间差问题，而且还能缩短试纸条的制备周期，降低生产成本。优选的，所述样品垫选用玻璃纤维材料制成。通过采用上述技术方案，本申请的样品垫由玻璃纤维制成，玻璃纤维能够降低滴在样品垫上的待测样品的损失率，提高检测结果的准确性。而且，玻璃纤维还具有强度较高、轻质、耐腐蚀性较强、尤其是耐化学腐蚀性较强等优点，具有较长的使用寿命。优选的，所述标记物垫选用聚酯膜材料制成。通过采用上述技术方案，本申请的标记物垫由聚酯膜制成，聚酯膜（即PET聚酯膜）具有较低的吸水率，便于检测样本复溶乳胶抗体结合物并进一步层析到硝酸纤维素膜上发生复合反应。另外，聚酯膜还具有良好的机械强度、刚度、硬度，具有良好的耐候性和抗化学药品稳定性，如耐弱酸和有机溶剂性。优选的，所述反应垫选用硝酸纤维素膜材料制成。通过采用上述技术方案，本申请的反应垫由硝酸纤维素膜制成，硝酸纤维素膜具有良好的层析性能，且具有较强的蛋白吸附能力，能够在不影响蛋白吸附能力的前提下被水润湿。优选的，所述吸水垫选用吸水纸制成。通过采用上述技术方案，本申请的吸水垫选用吸水纸，吸水纸具有良好的吸水性能，促使检测样本在毛细作用下从样品垫层析至反应垫发生反应。优选的，所述底板选用聚苯乙烯材料制成。通过采用上述技术方案，本申请的底板由聚苯乙烯制成，聚苯乙烯材料具有较好的黏附性，易于将底板与其上的衬垫材料粘附结合。第二方面，本申请提供一种检测红色毛癣菌的试剂盒，采用如下的技术方案：一种检测红色毛癣菌的试剂盒，包括上述检测红色毛癣菌的试纸条。通过采用上述技术方案，本申请试剂盒灵敏度高、检测速度快、操作简便、客观性强，可以有效排除检验者的业务水平等主观因素，适合在现场快速检测大量样品中是否存在红色毛癣菌。第三方面，本申请提供一种检测红色毛癣菌的试纸条的制备方法，采用如下的技术方案：一种上述检测红色毛癣菌的试纸条的制备方法，包括以下步骤：a.采用不同颜色的乳胶颗粒标记抗体：S1:用PBS溶液将两种颜色的乳胶颗粒分别稀释，两种乳胶颗粒稀释后的终浓度均控制在0.5-5体积%；S2:向稀释后的乳胶颗粒中分别加入抗生物素抗体和针对红色毛癣菌的特异性抗体二，两种抗体的终浓度均控制在0.1-0.5mg/mL，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测红色毛癣菌的试纸条，包括底板（5）以及在底板（5）上依次搭接的样品垫（1）、标记物垫（2）、反应垫（3）和吸水垫（4），其特征在于：所述标记物垫（2）包被有采用不同颜色乳胶颗粒标记的抗生物素抗体和针对红色毛癣菌的特异性抗体二；所述反应垫（3）上形成检测区（6）和质控区（7），所述检测区（6）包被有针对红色毛癣菌的特异性抗体一，所述质控区（7）包被有生物素牛血清白蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测红色毛癣菌的试纸条，包括底板（5）以及在底板（5）上依次搭接的样品垫（1）、标记物垫（2）、反应垫（3）和吸水垫（4），其特征在于：所述标记物垫（2）包被有采用不同颜色乳胶颗粒标记的抗生物素抗体和针对红色毛癣菌的特异性抗体二；所述反应垫（3）上形成检测区（6）和质控区（7），所述检测区（6）包被有针对红色毛癣菌的特异性抗体一，所述质控区（7）包被有生物素牛血清白蛋白。


2.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条，其特征在于：所述抗生物素抗体选用蓝色乳胶颗粒标记；所述针对红色毛癣菌的特异性抗体二选用红色乳胶颗粒标记。


3.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条，其特征在于：所述乳胶颗粒的直径为200-500nm。


4.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条，其特征在于：所述样品垫（1）选用玻璃纤维材料制成。


5.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条，其特征在于：所述标记物垫（2）选用聚酯膜材料制成。


6.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条，其特征在于：所述反应垫（3）选用硝酸纤维素膜材料制成。


7.根据权利要求1所述的一种检测红色毛癣菌的试纸条，其特征在于：所述底板（5）选用聚苯乙烯材料制成。


8.一种检测红色毛癣菌的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-7任一所述的检测红色毛癣菌的试纸条。


9.一种权利要求1-7任一所述的检测红色毛癣菌的试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
a.采用不同颜色的乳胶颗粒标记抗体：
S1:用PBS...

【专利技术属性】
技术研发人员：张树文，刘光明，黄翔，孙娈燕，
申请(专利权)人：南京黎明生物制品有限公司，中国医学科学院皮肤病医院中国医学科学院皮肤病研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32