【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】二价金属用于增强荧光信号的应用背景部分
本专利技术一般地涉及具有间隔基团的二聚体和聚合物荧光或着色染料，及其与二价或三价金属盐组合在各种分析方法中应用的方法。有关技术的描述荧光和/或着色染料已知特别适于希望高度敏感的检测试剂的应用。能够在生物学样品中优先标记特定成分或组分的染料使得研究者可以确定所述特定成分或组分的存在、量和/或位置。此外，能够监测特定体系在不同环境中的空间和时间分布。荧光和比色方法在化学和生物学中是极度广泛的。这些方法提供关于生物分子存在，结构，距离，取向，复合和/或位置的有用信息。此外，时间分辨方法越来越多地用于动态学和动力学的测量中。作为结果，已开发出用于荧光或颜色标记生物分子比如核酸和蛋白质的许多策略。由于生物分子的分析一般在含水环境中进行，关注的焦点一直是开发和使用水可溶的染料。高度荧光的或着色的染料是希望的，原因是使用这种染料提高信噪比且提供其它有关益处。相应地，已尝试增加来自已知荧光和/或着色部分的信号。例如，已制备包含两个或更多个荧光和/或着色部分的二聚体和聚合物化合物，预期这种化合物会引起更高亮的染料。然而，作为分子内荧光猝灭的结果，已知的二聚体和聚合物染料并未实现所希望的亮度提高。从而，本领域需要使用具有增加的摩尔亮度的水可溶染料的方法。理想地，使用所述染料和生物标记的方法应是强着色的或荧光的并且应以各种颜色和荧光波长可获得。本专利技术实现该需要和提供其它有关优势。专利技术概要简言之，本专利技术的实施方式一般涉及荧光和/或着色染料...
【技术保护点】
1.用于形成聚合物染料和靶向部分的共价缀合物的方法，所述方法包括制备包含聚合物染料、靶向部分和二价或三价金属盐的混合物，并且让混合物陈化，其持续的时间和所处的温度足以形成共价缀合物，其中：/na)聚合物染料包含：/ni)两个或更多个荧光或着色部分；/nii)至少一个带负电基团；和/niii)反应性基团Q，其能够与靶向部分上的互补反应性基团Q′形成共价键；和/nb)靶向部分具有对靶标分析物的亲和力且包含互补反应性基团Q′。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180319 US 62/645,1211.用于形成聚合物染料和靶向部分的共价缀合物的方法，所述方法包括制备包含聚合物染料、靶向部分和二价或三价金属盐的混合物，并且让混合物陈化，其持续的时间和所处的温度足以形成共价缀合物，其中：
a)聚合物染料包含：
i)两个或更多个荧光或着色部分；
ii)至少一个带负电基团；和
iii)反应性基团Q，其能够与靶向部分上的互补反应性基团Q′形成共价键；和
b)靶向部分具有对靶标分析物的亲和力且包含互补反应性基团Q′。
2.检测靶标分析物的方法，所述方法包括：
a)在二价或三价金属盐存在下使共价缀合物与靶标分析物结合以形成分析物-靶向部分复合物，所述共价缀合物包含：
i)靶向部分，其具有对靶标分析物的亲和力且包含与聚合物染料的共价键；
ii)聚合物染料，其包含：
A)两个或更多个荧光或着色部分；
B)至少一个带负电基团；和
C)与靶向部分的共价键；
b)检测来自分析物-靶向部分复合物的荧光或着色信号。
3.权利要求2的方法，还包括用包含二价或三价金属盐的洗涤溶液处理分析物-靶向部分复合物。
4.检测靶标分析物的方法，所述方法包括：
a)使共价缀合物与靶标分析物结合以形成分析物-靶向部分复合物，所述共价缀合物包含：
i)靶向部分，其具有对靶标分析物的亲和力且包含与聚合物染料的共价键；和
ii)聚合物染料，其包含：
A)两个或更多个荧光或着色部分；
B)至少一个带负电基团；和
C)与靶向部分的共价键；
b)下述处理：
i)在使共价缀合物与靶标分析物结合期间用二价或三价金属盐处理共价缀合物和靶标分析物；和/或
ii)在使共价缀合物与靶标分析物结合之后用包含二价或三价金属盐的洗涤溶液处理分析物-靶向部分复合物；和
c)检测来自分析物-靶向部分复合物的荧光或着色信号。
5.权利要求4的方法，其中使共价缀合物与靶标分析物结合在二价或三价金属盐存在下进行。
6.权利要求2-5中任一项的方法，还包括在检测荧光或着色信号之前从分析物-靶向部分复合物实质上除去全部二价或三价盐。
7.权利要求6的方法，其中二价或三价金属盐是从包含分析物-靶向部分复合物的缓冲液除去的。
8.权利要求2-7中任一项的方法，还包括形成共价缀合物。
9.权利要求3-8中任一项的方法，其中在形成共价缀合物之前聚合物染料和二价或三价盐已混合形成包含聚合物染料和二价或三价盐的组合物。
10.权利要求9的方法，还包括在形成共价缀合物之前陈化包含聚合物染料和二价或三价盐的组合物。
11.权利要求8或9的方法，其中在形成共价缀合物时二价或三价盐实质上不存在。
12.包含共价缀合物和二价或三价盐的组合物，所述共价缀合物包含：
i)靶向部分，其包含与聚合物染料的共价键；
ii)聚合物染料，其包含：
a)两个或更多个荧光或着色部分；
b)至少一个带负电基团；和
c)与靶向部分的共价键。
13.权利要求12的组合物，其中靶向部分具有对靶标分析物的亲和力。
14.权利要求13的组合物，其中靶向部分包含抗体。
15.权利要求1-14中任一项的方法或组合物，其中二价或三价盐是二价盐。
16.权利要求15的方法或组合物，其中二价盐是镁盐。
17.权利要求16的方法或组合物，其中镁盐是氯化镁。
18.权利要求1-17中任一项的方法或组合物，其中荧光或着色部分是荧光部分。
19.权利要求1-18中任一项的方法或组合物，其中荧光或着色部分的各具体值独立地选自芘，苝，苝一酰亚胺和6-FAM部分。
20.权利要求1-19中任一项的方法或组合物，其中荧光或着色部分的各具体值独立地具有下述结构之一：
21.权利要求1-20中任一项的方法或组合物，其中聚合物染料包含多个带负电基团。
22.权利要求1-21中任一项的方法或组合物，其中聚合物染料包含两个或更多个荧光或着色部分，所述两个或更多个荧光或着色部分各自经由包含至少一个带负电基团的连接体联接至相邻的荧光或着色部分。
23.权利要求22的方法或组合物，其中连接体还包含一个或多个亚烷基或氧化烯烃部分。
24.权利要求23的方法或组合物，其中氧化烯烃部分包含聚氧化乙烯部分。
25.权利要求1-24中任一项的方法或组合物，其中带负电基团是磷酸盐/酯。
26.权利要求1-25中任一项的方法或组合物，其中聚合物染料包含2至100个荧光或着色部分，所述荧光或着色部分经由包含至少一个带负电基团的连接体联接至相邻的荧光或着色部分。
27.权利要求26的方法或组合物，其中聚合物染料包含2至10个荧光或着色部分，所述荧光或着色部分经由包含至少一个带负电基团的连接体联接至相邻的荧光或着色部分。
28.权利要求1-27中任一项的方法或组合物，还包括纯化共价缀合物。
29.权利要求28的方法或组合物，其中纯化包含从共价缀合物实质上除去全部二价或三价盐。
30.权利要求1-29中任一项的方法或组合物，其中共价缀合物具有在二价或三价盐不存在的情况下制备的相应缀合物的至少1.1倍的荧光消光系数。
31.权利要求1-30中任一项的方法或组合物，其中共价缀合物具有在二价或三价盐不存在的情况下制备的相应缀合物的至少1.2倍的荧光消光系数。
32.权利要求1-31中任一项的方法或组合物，其中靶向部分是抗体。
33.权利要求1-32中任一项的方法或组合物，其中聚合物染料具有下述结构(I)：
或其立体异构体、盐或互变异构体，其中：
M的各具体值独立地是包含荧光或着色部分的部分；
L1的各具体值独立地是：i)任选的亚烷基，亚烯基，亚炔基，杂亚烷基，杂亚烯基，杂亚炔基或杂原子连接体；或ii)连接体，其包含通过两个互补反应性基团的反应能够形成的官能团；
L2和L3的各具体值独立地是任选的亚烷基，亚烯基，亚炔基，杂亚烷基，杂亚烯基，杂亚炔基或杂原子连接体；
L4的各具体值独立地是亚烷基或氧化烯烃连接体；
R1的各具体值独立地是H，烷基或烷氧基；
R2和R3各自独立地是H，OH，SH，烷基，烷氧基，烷基醚，杂烷基，-OP(＝Ra)(Rb)Rc，Q，或其经保护的形式，或L'；
R4的各具体值独立地是OH，SH，O-，S-，ORd或SRd；
R5的各具体值独立地是氧代，硫代或不存在；
Ra是O或S；
Rb是OH，SH，O-，S-，ORd或SRd；
Rc是OH，SH，O-，S-，ORd，OL'，SRd，烷基，烷氧基，杂烷基，杂烷氧基，烷基醚，烷氧基烷基醚，磷酸盐/酯，硫代磷酸盐/酯，磷酸基烷基，硫代磷酸基烷基，磷酸基烷基醚或硫代磷酸基烷基醚；
Rd是平衡离子；
L'的各具体值独立地是包含与Q的共价键的连接体，包含与靶向部分的共价键的连接体，包含与分析物分子的共价键的连接体，包含与固体载体的共价键的连接体，包含与固体载体残基的共价键的连接体，包含与核苷的共价键的连接体或包含与又一结构(I)化合物的共价键的连接体；
m的各具体值独立地是0或更大的整数，条件是m的至少一个具体值是1或更...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·杰克逊，C·博伊斯，E·松井，M·范布伦特，S·辛格，T·马特雷，
申请(专利权)人：索尼公司，美国索尼公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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