测定免疫水平的诊断制剂制造技术

本发明专利技术公开了一种测定免疫水平的诊断制剂，属于生物医学领域。本发明专利技术先将磁性介孔二氧化硅经氨基硅烷偶联剂，γ‑巯丙基三甲氧基硅烷，N‑异丙基丙烯酰胺，N‑羟丙基丙烯酰胺，浓硫酸和双氧水联合改性制得改性介孔二氧化硅，然后将改性介孔二氧化硅与聚烯丙胺盐酸盐混合，并加入氯金酸，搅拌混合后，再加入柠檬酸三钠还原，制得产品坯料，最后将产品坯料与抗原混合，制得测定免疫水平的诊断制剂。本发明专利技术制备的测定免疫水平的诊断制剂具有灵敏的免疫诊断性能，且对免疫水平具有较好的判断效果。

【技术实现步骤摘要】
测定免疫水平的诊断制剂
本专利技术涉及生物医学领域，具体是一种测定免疫水平的诊断制剂。
技术介绍
免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，其发展十分迅速，在生物医学各研究领域，特别是在医学检验中得到了日益广泛的应用。胶体金已成为继荧光素、放射同位素和酶之后，在免疫标记技术中较为常用的一种非放射性标剂。胶体金是由氯金酸在还原剂如鞣酸、柠檬酸三钠的作用下聚合形成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，它具有高电子密度、能与多种生物大分子结合的特点。免疫金标记技术主要利用了金颗粒的这一特征，在金标蛋白结合处于显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或紫红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。免疫磁性粒子技术是近年来发展起来的新技术，多用于分离浓缩等试验中。磁性粒子能与蛋白质以共价方式结合而不影响其活性，所以常用来捕获特定蛋白或分离蛋白。其原理如下：将某抗体标记磁性粒子，放入含目的抗原的溶液中，经充分混合反应后，形成抗原抗体磁性粒子混合物，使溶液通过一磁性柱，由于磁性粒子被吸附而使目的抗原截留下来。同时它又能用作定量检测，可根据磁性强弱确定捕获抗体或抗原量的多少。目前，免疫胶体金技术在金标检测试剂上运用具有下列缺点：1.由于方法学的限制，只使用免疫胶体金技术建立的诊断制剂，其灵敏度较低。2.对于某些抗原或抗体含量极低的样本，如使用此种技术建立的快速诊断制剂由于灵敏度限制，导致无法对免疫水平实现直接有效的判断。专利
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种测定免疫水平的诊断制剂及其制备方法，以解决现有技术中的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种测定免疫水平的诊断制剂，其特征在于，所述测定免疫水平的诊断制剂主要包括以下重量份数的原料组分：20~30份改性介孔二氧化硅，10~12份抗原，2~4份柠檬酸三钠和5~8份氯金酸；改性介孔二氧化硅的加入可吸附抗原，从而实现免疫诊断的处理中，抗体与抗原的有效接触。一种测定免疫水平的诊断制剂，其特征在于，所述测定免疫水平的诊断制剂还包括以下重量份数的原料组分：5~10份聚烯丙胺盐酸盐；聚烯丙胺盐酸盐的加入可使氯金酸中氯金根离子吸附于改性介孔二氧化硅内部，在柠檬酸三钠的处理下可在改性介孔二氧化硅内部形成金单质，并被抗原所封闭，当抗原倍抗体吞噬时，抗原的大分子性消失，从而使改性介孔金单质和磁性粒子与抗体结合，形成肉眼可见的红色或紫红色斑点，实现免疫诊断功能。作为优化，所述改性介孔二氧化硅由磁性介孔二氧化硅经氨基硅烷偶联剂，γ-巯丙基三甲氧基硅烷，N-异丙基丙烯酰胺，N-羟丙基丙烯酰胺，浓硫酸和双氧水联合改性制得；所述磁性介孔二氧化硅由纤维素，介孔二氧化硅和磁性粒子混合制得；纤维素的加入可提高介孔二氧化硅对抗原的吸附性能。作为优化，所述一种测定免疫水平的诊断制剂主要包括以下重量份数的原料组分：28份改性介孔二氧化硅，10份抗原，4份柠檬酸三钠，6份氯金酸和8份聚烯丙胺盐酸盐。作为优化，一种测定免疫水平的诊断制剂的制备方法主要包括以下制备步骤：（1）将磁性介孔二氧化硅先经浓硫酸和双氧水处理后，再经氨基硅烷偶联剂，γ-巯丙基三甲氧基硅烷，N-异丙基丙烯酰胺和N-羟丙基丙烯酰胺联合改性，过滤，干燥；（2）将步骤（1）所得物质与聚烯丙胺盐酸盐溶液混合后，依次加入氯金酸和柠檬酸三钠，搅拌反应后，过滤，干燥；（3）将步骤（2）所得物质于碱性条件下与抗原分散液混合，搅拌反应后，过滤，干燥；（4）对步骤（3）所得物质进行指标分析。作为优化，一种测定免疫水平的诊断制剂的制备方法主要包括以下制备步骤：（1）将98%的浓硫酸与30%的双氧水按体积比7：3混合，得混合处理液，将混合处理液与磁性介孔二氧化硅按质量比10：1~12：1混合，搅拌反应后，过滤，洗涤，干燥，得改性介孔二氧化硅坯料；将改性介孔二氧化硅坯料与无水乙醇按质量比1：50混合，并加入改性介孔二氧化硅坯料质量0.1~0.3倍的氨丙基三甲氧基硅烷和改性介孔二氧化硅坯料质量0.1~0.2倍的γ-巯丙基三甲氧基硅烷，搅拌反应后，离心分离，得预处理改性介孔二氧化硅坯料，将预处理改性介孔二氧化硅坯料与N,N-二甲基甲酰胺按质量比1：10混合，并加入预处理改性介孔二氧化硅坯料质量2倍的丁二酸酐，搅拌反应后，过滤，干燥，得预处理改性介孔二氧化硅；将预处理改性介孔二氧化硅与四氢呋喃按质量比1：20~1：30混合，并加入预处理改性介孔二氧化硅质量10~12倍的N-异丙基丙烯酰胺，预处理改性介孔二氧化硅质量0.8~1.2倍的N-羟甲基丙烯酰胺和预处理改性介孔二氧化硅质量0.01~0.03倍的偶氮二异丁腈，于氮气氛围下，搅拌反应后，过滤，洗涤，干燥；（2）将聚烯丙胺盐酸盐与水按质量比1：10混合，并加入聚烯丙胺盐酸盐质量4~5倍的步骤（1）所得物质，搅拌混合后，得混合分散液，将混合分散液与氯金酸按质量比50：1~80：1混合，并加入混合分散液质量0.02~0.05倍的柠檬酸三钠，搅拌反应后，过滤，干燥；（3）将抗原与水按质量比1：10混合，于pH为8的条件下超声分散后，加入抗原质量4~6倍的步骤（2）所得物质，搅拌反应后，于磁滤器中过滤，去除滤液后，干燥；（4）对步骤（3）所得物质进行指标分析。作为优化，步骤（1）所述磁性介孔二氧化硅为将质量分数为2%的十六烷基三甲基溴化铵的水溶液与纳米四氧化三铁按质量百200：1~300：1混合，并加入十六烷基三甲基溴化铵水溶液质量0.1~0.2倍的1,3,5-三甲苯和十六烷基三甲基溴化铵水溶液质量0.1~0.3倍的氨水，超声分散后，得十六烷基三甲基溴化铵的混合水溶液，将十六烷基三甲基溴化铵的混合水溶液与正硅酸乙酯按质量比40：1混合，并加入正硅酸乙酯质量4~8倍的微纤化纤维素纤维，搅拌反应后，过滤，干燥，得磁性介孔二氧化硅坯料；将磁性介孔二氧化硅坯料硝酸铵按质量比1：2混合，并加入磁性介孔二氧化硅坯料质量10倍的无水乙醇，冷凝回流后，过滤，干燥，得磁性介孔二氧化硅。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：（1）本专利技术在制备测定免疫水平的诊断制剂时使用改性介孔二氧化硅，并同时加入聚烯丙胺盐酸盐；首先，改性介孔二氧化硅在经过改性后，改性介孔二氧化硅内部的孔隙上接枝有丙烯酰胺，从而使改性介孔二氧化硅具有pH敏感性，即在酸性条件下，改性介孔二氧化硅的孔隙会扩张，而当pH为碱性时，改性介孔二氧化硅的孔隙缩小，因此，在改性介孔二氧化硅与氯金酸混合后，当氯金酸在柠檬酸三钠的作用下被还原时，改性介孔二氧化硅内部的孔隙同时发生收缩，从而可将氯金酸被柠檬酸三钠还原形成的金单质固定于改性介孔二氧化硅内部的空隙中，其次，在改性介孔二氧化硅与抗原混合后，由于改性介孔二氧化硅中介孔的收缩，可防止金粒子与抗原结合，产生显色反应，提高产品在使用过程中的敏感性；再者，在产品制备过程中加入聚烯丙胺盐酸盐，由于经过改性处理的介孔二氧化硅内部表面带有负电荷，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定免疫水平的诊断制剂，按重量份数计，主要包括以下重量份数的原料组分：28份改性介孔二氧化硅，10份抗原，4份柠檬酸三钠，6份氯金酸和8份聚烯丙胺盐酸盐；/n所述测定免疫水平的诊断制剂的制备方法包括以下制备步骤：/n（1）将98%的浓硫酸与30%的双氧水按体积比7：3混合，得混合处理液，将混合处理液与磁性介孔二氧化硅按质量比12：1混合，于温度为45℃，转速为300r/min的条件下搅拌反应2h后，过滤，得滤饼，将滤饼用水洗涤5次后，于温度为80℃的条件下干燥6h，得改性介孔二氧化硅坯料；将改性介孔二氧化硅坯料与无水乙醇按质量比1：50混合于烧杯中，并向烧杯中加入改性介孔二氧化硅坯料质量0.3倍的氨丙基三甲氧基硅烷和改性介孔二氧化硅坯料质量0.2倍的γ-巯丙基三甲氧基硅烷，于温度为65℃，转速为320r/min的条件下，搅拌反应8h后，离心分离，得预处理改性介孔二氧化硅坯料，将预处理改性介孔二氧化硅坯料与N,N-二甲基甲酰胺按质量比1：10混合于烧瓶中，并向烧瓶中加入预处理改性介孔二氧化硅坯料质量2倍的丁二酸酐，于温度为60℃，转速为300r/min的条件下，搅拌反应6h后，过滤，得滤渣，将滤渣于温度为80℃的条件下干燥3h，得预处理改性介孔二氧化硅；将预处理改性介孔二氧化硅与四氢呋喃按质量比1：30混合于四口烧瓶中，并向四口烧瓶中加入预处理改性介孔二氧化硅质量12倍的N-异丙基丙烯酰胺，预处理改性介孔二氧化硅质量1.2倍的N-羟甲基丙烯酰胺和预处理改性介孔二氧化硅质量0.03倍的偶氮二异丁腈，向四口烧瓶中以50mL/min的速率通入氮气，于温度为80℃，转速为280r/min的条件下，搅拌反应24h后，过滤，去除滤液，并用去离子水洗涤3次，于温度为60℃的条件下干燥2h；/n（2）将聚烯丙胺盐酸盐与水按质量比1：10混合，并向聚烯丙胺盐酸盐与水的混合物中加入聚烯丙胺盐酸盐质量5倍的步骤（1）所得物质，于温度为40℃，转速为300r/min的条件下，搅拌混合30min后，得混合分散液，将混合分散液与氯金酸按质量比80：1混合，并向混合分散液与氯金酸的混合物中加入混合分散液质量0.05倍的柠檬酸三钠，于温度为40℃，转速为280r/min的条件下，搅拌反应3h后，过滤，真空干燥；/n（3）将抗原与水按质量比1：10混合，用质量分数为2%的氢氧化钠溶液调节抗原与水混合物的pH为8，于频率为45kHz的条件下超声分散10min后，向抗原与水的混合物中加入抗原质量6倍的步骤（2）所得物质，于温度为30℃，转速为300r/min的条件下，搅拌反应5h后，磁滤去除滤液，得坯料，将坯料于温度为40℃的条件下干燥12h；/n（4）对步骤（3）所得物质进行指标分析；/n步骤（1）所述磁性介孔二氧化硅为将质量分数为2%的十六烷基三甲基溴化铵的水溶液与纳米四氧化三铁按质量百300：1混合，并加入十六烷基三甲基溴化铵水溶液质量0.2倍的1,3,5-三甲苯和十六烷基三甲基溴化铵水溶液质量0.3倍的氨水，超声分散后，得十六烷基三甲基溴化铵的混合水溶液，将十六烷基三甲基溴化铵的混合水溶液与正硅酸乙酯按质量比40：1混合，搅拌反应后，过滤，干燥，得磁性介孔二氧化硅坯料；将磁性介孔二氧化硅坯料硝酸铵按质量比1：2混合，并加入磁性介孔二氧化硅坯料质量10倍的无水乙醇，冷凝回流后，过滤，干燥，得磁性介孔二氧化硅。/n...

【技术特征摘要】
1.一种测定免疫水平的诊断制剂，按重量份数计，主要包括以下重量份数的原料组分：28份改性介孔二氧化硅，10份抗原，4份柠檬酸三钠，6份氯金酸和8份聚烯丙胺盐酸盐；
所述测定免疫水平的诊断制剂的制备方法包括以下制备步骤：
（1）将98%的浓硫酸与30%的双氧水按体积比7：3混合，得混合处理液，将混合处理液与磁性介孔二氧化硅按质量比12：1混合，于温度为45℃，转速为300r/min的条件下搅拌反应2h后，过滤，得滤饼，将滤饼用水洗涤5次后，于温度为80℃的条件下干燥6h，得改性介孔二氧化硅坯料；将改性介孔二氧化硅坯料与无水乙醇按质量比1：50混合于烧杯中，并向烧杯中加入改性介孔二氧化硅坯料质量0.3倍的氨丙基三甲氧基硅烷和改性介孔二氧化硅坯料质量0.2倍的γ-巯丙基三甲氧基硅烷，于温度为65℃，转速为320r/min的条件下，搅拌反应8h后，离心分离，得预处理改性介孔二氧化硅坯料，将预处理改性介孔二氧化硅坯料与N,N-二甲基甲酰胺按质量比1：10混合于烧瓶中，并向烧瓶中加入预处理改性介孔二氧化硅坯料质量2倍的丁二酸酐，于温度为60℃，转速为300r/min的条件下，搅拌反应6h后，过滤，得滤渣，将滤渣于温度为80℃的条件下干燥3h，得预处理改性介孔二氧化硅；将预处理改性介孔二氧化硅与四氢呋喃按质量比1：30混合于四口烧瓶中，并向四口烧瓶中加入预处理改性介孔二氧化硅质量12倍的N-异丙基丙烯酰胺，预处理改性介孔二氧化硅质量1.2倍的N-羟甲基丙烯酰胺和预处理改性介孔二氧化硅质量0.03倍的偶氮二异丁腈，向四口烧瓶中以50mL/min的速率通入氮气，于温度为80℃，转速为280r/min的条件下，搅...

【专利技术属性】
技术研发人员：何金星，
申请(专利权)人：何金星，
类型：发明
国别省市：江苏;32