一种gE基因及表达该基因的载体制造技术

本发明专利技术涉及一种gE基因及表达该基因的载体。本发明专利技术公开了一种具有免疫原性的蛋白及其编码基因。本发明专利技术还公开了所述具有免疫原性的蛋白的制备方法。

【技术实现步骤摘要】
一种gE基因及表达该基因的载体
本专利技术属于生物医药领域，具体而言，本专利技术涉及一种重组带状疱疹疫苗组合物及其制备方法和用途。
技术介绍
水痘带状疱疹病毒（varicellazostervirus，VZV）是八种人类疱疹病毒之一，也叫做3型人疱疹病毒。水痘-带状疱疹病毒遍布全球，具有很强的传染性，迄今只发现一种血清型，在自然界VZV仅感染人类。既可引发水痘，也可引发带状疱疹（herpeszoster，HZ），水痘通常见于儿童期，带状疱症则在成年以后才会发病。在原发感染水痘后，病毒可潜伏在宿主的神经节中，随着年龄增长、免疫功能受损或免疫抑制，VZV可以被重新激活并引发带状疱疹。带状疱疹临床表现为单侧性水泡样皮疹，明显的特征是仅局限于单一皮肤节段，通常伴神经根性疼痛。患者可有明显疼痛和不适，症状可持续数周或数月，在重症患者中甚至可持续数年，导致生活质量下降，极少数情况下带状疱疹也可无皮疹出现。约25%患带状疱疹的人会发生并发症，并且随着年龄的增长而增加。最常见的严重并发症是带状疱疹后神经痛（post-herpeticneuralgia,PHN），即疱疹急性期后仍持续存在的疼痛，在带状疱疹患者中发生率为10%-30%，疼痛可持续数月甚至数年，严重影响患者生活质量。影响带状疱疹发病的危险因素有年龄、免疫功能缺陷、性别以及其他潜在因素。大多数原发的VZV感染发生在童年，然后VZV潜伏在神经节中，成年后VZV可以被再激活。研究表明，约99%的40岁及以上的美国人有感染过VZV的血清学证据；90%的20-29岁的欧洲人抗VZV血清反应为阳性；在南美洲、澳大利亚和亚洲的一些国家，原发性VZV感染可能会发生得晚一些，但90%的40岁以上人群会出现VZV血清阳性反应。因此在全球范围内，绝大多数成年人都有发生带状疱疹及其相关并发症的危险。全球带状疱疹的发病率为（3~5）/1000人年，亚太地区为(3~10)/1000人年，并逐年递增2.5％~5.0％，住院率(2~25)/10万人年，死亡率(0.017~0.465)/10万人年，复发率1％~6%。目前我国属于高程度老年化状态，HZ带来的社会经济负担也在逐年加重，对个体而言，HZ给患者尤其是老年患者生活质量带来了巨大的负面影响。据国家统计局公布的数据估计2017年40岁以上人口约6.5亿，若按照HZ发病率为2.5/1000人年保守估计我国每年新发HZ约160万例。由于药物治疗只能缓解症状，接种疫苗是预防HZ及其并发症的最佳策略。目前全球仅有2款HZ疫苗上市销售（HZ减毒活疫苗Zostavax和HZ亚单位疫苗Shingrix）。默沙东的Zostavax为减毒活疫苗，所含病毒株与水痘疫苗所用的VZVOka株相同，该疫苗配方所采用的最低效力为19400PFU，于2006年获得FDA批准上市，迄今已在60多个国家获准可在50岁以上人群中皮下接种1剂。葛兰素史克开发的Shingrix是一种基于重组gE蛋白辅以新型佐剂AS01B的亚单位疫苗，三期临床试验数据显示该亚单位疫苗在老年人中有着优于Zostavax的免疫原性和有效性，并于2017年获FDA批准上市，适用于50岁及以上人群，需接种2剂。目前Shingrix已被条件性批准在中国上市，但国内在研疫苗均为减毒活疫苗，其保护效力和免疫持久性会低于Shingrix，而Shingrix因产能等问题全球缺货，因此国内急需一种自主研发的亚单位疫苗帮助减少由带状疱疹及其并发症引起的疾病负担。尽管现有技术中已经开发了一些针对VZV的疫苗，然而还存在VZVgE蛋白表达效率低下，表达获得的蛋白活性低，免疫效果不理想等问题。因此，本领域还有必要开发改进的VZV疫苗产品。
技术实现思路
根据本专利技术的第一方面为提供一种重组带状疱疹疫苗组合物，该组合物中包含一种VZV病毒的gE蛋白，该蛋白可通过CHO细胞高效地获得。在一个优选的实施方式中，上述gE蛋白具有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。在本专利技术的第二方面，提供了一种编码VZV病毒的gE蛋白的gE基因，所述基因为能够在CHO细胞中表达的gE基因，所述基因具有SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。在本专利技术的第三方面，提供一种表达载体，所述的表达载体中含有所述的gE基因的序列。根据本领域的常规知识，表达载体包含启动子和编码gE蛋白质的序列的克隆位点，使得启动子和序列可操作地连接。表达载体还可存在其它元件，诸如信号肽序列(有时称为前导序列）、标签序列、转录终止信号、复制起点以及编码可选产物的序列。在一优选的实施方式中，所述的表达载体通过将gE基因5’和3’端分别引入XbaI和NotI限制性内切酶酶切位点，分别克隆至携带杀稻瘟菌素抗性基因的质粒表达载体和携带博莱霉素抗性基因的质粒表达载体中来获得。在一优选的实施方式中，所述表达载体含有前述gE基因。VZVgE蛋白的制造通常是通过在培养细胞中表达或通过化学合成来实现。常常使用并且适合用于产生蛋白质的宿主细胞包括大肠杆菌、酵母、昆虫以及哺乳动物。在本专利技术的第四方面，提供一种基因工程化的细胞，所述的细胞含有所述的表达载体，或其基因组中整合有前述gE基因。在一个优选的实施方式中，前述细胞为CHO细胞。在一优选的实施方式中，所述细胞为含有本专利技术的gE基因或表达载体的CHO细胞，所述细胞能够高水平地表达生产gE蛋白。在本专利技术的第五方面，提供一种具有免疫原性的蛋白，所述的蛋白为VZV病毒的gE蛋白，所述的gE蛋白是由CHO细胞表达的。在一优选的实施方式中，所述的具有免疫原性的蛋白通过以下方法制备获得：(1)培养所述的基因工程化的细胞，从而在细胞内表达所述的VZV病毒的gE蛋白；(2)分离所述的VZV病毒的gE蛋白。在本专利技术的第六方面，提供所述的疫苗组合物的用途，用于预防或治疗带状疱疹病毒感染相关疾病或病症。在本专利技术的第七方面，提供了一种在CHO细胞中表达VZV病毒的gE蛋白的方法，包括下述步骤：(1)将本专利技术的gE基因克隆入表达载体中；(2)将步骤(1)所得的表达载体转化至CHO细胞中；(3)通过迷你细胞群的筛选和单克隆筛选，获得稳定表达gE蛋白的细胞株；(4)使用步骤(3)所得的细胞株进行表达，获得VZV蛋白。根据本专利技术的一个具体实施方案，所述步骤(1)中所述的表达载体为携带杀稻瘟菌素抗性基因的质粒表达载体和/或携带博莱霉素抗性基因的质粒表达载体。根据本专利技术的一个具体实施方案，所述步骤(2)中使用的CHO细胞为CHO-K1细胞。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。具体实施方式实施例1水痘带状疱疹病毒gE蛋白的克隆构建、表达与纯化1、gE蛋白的选择与（gE基因的）合成通过NCBI数据库和文献检索，选择了一段保守的截短gE蛋白氨基酸序列作为进行基因优化的基础，蛋白序列如下，全长546个氨基酸（SEQIDNO：1），具体如下，该序列中包括了信号肽和抗原主体部分，但不包括野生型gE蛋白中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种gE基因，其编码水痘-带状疱疹病毒的gE蛋白，其特征在于，所述gE基因能够在CHO细胞中表达gE蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种gE基因，其编码水痘-带状疱疹病毒的gE蛋白，其特征在于，所述gE基因能够在CHO细胞中表达gE蛋白。


2.如权利要求1所述的gE基因，该基因序列如SEQIDNO：2所示。


3.一种表达载体，所述的表达载体中含有权利要求1或2所述的基因的序列。


4.如权利要求3所述的表达载体，所述的表达载体为携带杀稻瘟菌素抗性基因的质粒表达载体和/或携带博莱霉素抗性基因的质粒表达载体。


5.一种基因工程化的细胞，所述的细胞含有权利要求3所述的表达载体，或其基因组中整合有权利要求1或2所述的基因。


6.如权利要求5所述的细胞，其特征在于，所述的细胞是CHO细胞。


7.一种具有免疫原性的蛋白，所述的蛋白为VZV病毒的gE蛋白，所述的gE蛋白是由CHO细胞表达的。


8.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：周晨亮，何强，沈巧英，周凌云，江元翔，刘革，曾宪放，史力，莫呈钧，张智，
申请(专利权)人：怡道生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32