一种环形RNA敲低方法及其应用技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及一种环形RNA的靶向敲低方法及其应用。本发明专利技术环形RNA敲低方法是使用dCas13蛋白融合表达HRSP12，再利用dCas13和配套的gRNA特异靶向环形RNA，通过dCas13‑HRSP12融合蛋白募集RNase P/MRP复合物，实现对环形RNA的特异靶向降解，具有对体内稳态环境干扰少，使实验结果更真实可靠和具备高效特异靶向敲低效率等有益效果。

【技术实现步骤摘要】
一种环形RNA敲低方法及其应用
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种环形RNA敲低方法及其应用。
技术介绍
环形RNA(circularRNAs,circRNA)是一类主要由一个以上外显子构成的环形RNA分子，大量存在于真核细胞中，其表达具有一定的组织和时序特异性，且不易被核酸外切酶降解，比线性RNA更稳定。环形RNA可以作为miRNA海绵，调控宿主转录活性、直接翻译蛋白质，影响基因的调控与表达，在脑发育、帕金森、阿尔兹海默病和肿瘤发生中发挥重要作用，可望成为新型的疾病临床诊断标志物。大部分circRNA是由蛋白质编码基因(宿主基因)的外显子反向剪接产生的，由于其反向剪切成环，与亲本基因有相同的序列，仅环化位点处序列具有特异性，使得环形RNA敲除和敲低的实验设计存在难度高、受限多等问题。目前对环形RNA敲低研究中广泛应用的是siRNA或shRNA敲低方法，但环形RNA与亲本RNA有相同的序列，仅在环化位点处序列有特异性，siRNA设计长度为19～21nt，因此只能针对环形RNA的环化位点处序列设计靶标，序列可选少，筛选设计符合GC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种环形RNA敲低方法，其特征在于，所述方法是用dCas13蛋白融合表达HRSP12得到融合蛋白，再利用融合蛋白募集RNase P/MRP复合物，实现对环形RNA的特异靶向降解。/n

【技术特征摘要】
1.一种环形RNA敲低方法，其特征在于，所述方法是用dCas13蛋白融合表达HRSP12得到融合蛋白，再利用融合蛋白募集RNaseP/MRP复合物，实现对环形RNA的特异靶向降解。


2.根据权利要求1所述的环形RNA敲低方法，其特征在于，所述dCas13蛋白包括dLwaCas13a，dPspCas13b和dRfxCas13d，所述dLwaCas13a，dPspCas13b和dRfxCas13d分别融合HRSP12进行表达的融合蛋白，分别命名为KDHP-a，KDHP-b和KDHP-d，所述KDHP-a，KDHP-b和KDHP-d的氨基酸序列为SEQIDNO.1、SEQIDNO.2和SEQIDNO.3。


3.根据权利要求1所述的的环形RNA敲低方法，其特征在于，所述dCas13蛋白与HRSP12蛋白之间以柔性linker串联，柔性linker选自GS、GSGSGS、GGSG、GGSGGGSG、GGSGGS、GGGS、GGGGS中的一种或多种。


4.根据权利要求1所述的的环形RNA敲低方法，其特征在于，所述HRSP12蛋白之后串联一个或多个蛋白标签，所述蛋白标签选自Myc、...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明，李自强，王超，刘景磊，蔡秋杰，
申请(专利权)人：广州吉赛生物科技股份有限公司，中华人民共和国泰安海关，
类型：发明
国别省市：广东;44