一种突变型RNaseR及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，具体涉及一种突变型RNase R及其制备方法和应用。本发明专利技术提供的突变型RNase R被命名为RNase R__

【技术实现步骤摘要】
一种突变型RNase R及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种突变型RNase R及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]RNase R(Ribonuclease R)的分子量约为91.4kDa，是一种来源于大肠杆菌 RNR超家族的3
’‑5’
核糖核酸外切酶，可从3
’‑5’
方向将RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R能够消化几乎所有的线性RNA分子，但不易消化环状RNA(circRNA)、套索结构RNA(lariat RNA)、末端为双链的RNA。
[0003]目前RNase R常被用于circRNA的富集和鉴定研究。高通量测序是大批量发现circRNA最快捷的方法，但传统的全转录组测序只能发现丰度较高的 circRNA，对丰度稀少的circRNA则无能为力。而在全转录组测序的方法上再增加一步RNase R消化(RNase R+)，则可以使circRNA相对富集，最终使circRNA 的junction reads相对于“RNase R
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种突变型RNase R，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。2.如权利要求1所述的突变型RNase R，其特征在于，编码所述突变型RNase R氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。3.如权利要求1所述的突变型RNase R，其特征在于，所述氨基酸序列为E.coli来源的野生型RNase R的氨基酸序列定点突变所得；所述E.coli来源的野生型RNase R的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。4.如权利要求3所述的突变型RNase R，其特征在于，编码所述E.coli来源的野生型RNase R的氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。5.如权利要求3所述的突变型RNase R，其特征在于，所述定点突变为将E.coli来源的野生型RNase R的氨基酸序列的601至608号氨基酸截断突变所得。6.一种如权利要求1
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5任一项所述的突变型RNase R的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、构建含有编码所述突变型RNase R的核苷酸序列的载体；S2、将步骤S1获得的载体转化至表达菌株BL21大肠杆菌细胞中，获得表达菌株；S3、将步骤S2获得的表达菌株扩大培养并进行蛋白诱导表达；S4、收集扩大培养后的表达菌株，并进行洗涤及裂解；S5、进行蛋白纯化；S6、进行蛋白活性测定。7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤S1所述构建载体的过程具体如下：(1)将大肠杆菌来源的野生型RNase R与一株耐盐的Psychrobacter sp.strain ANT206来源的RNase R进行氨基酸序列比对，确定对耐盐有重要影响的氨基酸残基，并对其进行截断突变，获得如SEQ ID NO.5所述的氨基酸序列；(2)利用PCR技术对编码突变型RNase R的核苷酸序列进行扩增，分别以RNase R

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明，蔡秋杰，张婉君，张茂雷，
申请(专利权)人：广州吉赛生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：