一种PDA@CRISPR/Cas9/sgHMGA2NPs复合体、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种PDA@CRISPR/Cas9/sgHMGA2 NPs复合体、制备方法及应用，该复合体是由聚多巴胺包裹CRISPR/Cas9核糖核蛋白复合物构成的一种纳米颗粒，该复合体利用聚多巴胺的生物分子转运功能及其良好的生物相容性，高效且安全地将CRISPR/Cas9核糖核蛋白复合物运送到细胞内，实现对靶基因HMGA2的高效编辑，该复合体能够实现对CRISPR/Cas9基因编辑系统的高效递送及对癌细胞基因组HMGA2的高效靶向敲除，可用于开发CRISPR/Cas9基因编辑系统的精确靶向治疗方法，作为一种针对HMGA2高表达型癌症的新型靶向治疗手段进行研究，用于揭示CRISPR/Cas9基因编辑系统对HMGA2高表达型癌症治疗过程中的功能作用，为PDA包裹CRISPR/Cas9基因编辑系统对HMGA2高表达的癌症患者进行精准靶向生物治疗提供临床前数据依据。行精准靶向生物治疗提供临床前数据依据。行精准靶向生物治疗提供临床前数据依据。

【技术实现步骤摘要】
一种PDA@CRISPR/Cas9/sgHMGA2 NPs复合体、制备方法及应用


[0001]本专利技术属于生物
，特别涉及一种PDA@CRISPR/Cas9/sgHMGA2 NPs复合体、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]高迁移率基因A2(HMGA2)是一种由HMGA2编码的非组蛋白染色体蛋白。它的作用是通过影响染色质结构来调节转录。生理条件下，HMGA2在胚胎发生过程中表达较高，在正常成体组织中基本不表达或表达量极低；病理情况下，它在多种类型的癌组织中重新表达，故推测HMGA2在癌变过程中必不可少。据报道，HMGA2可以通过参与细胞凋亡、细胞周期、血管生成、上皮
‑
间质转化(EMT)以及耐药性来调节肿瘤发生、转移和复发。HMGA2这种在癌组织中重新表达的特征及其在癌症中的重要作用，决定其将成为癌症精准治疗的新候选靶基因。
[0003]CRISPR/Cas9系统是一种强大的基因组编辑工具。在sgRNA的定向引导下，CRISPR/Cas9核酸内切酶对基因组DNA特定位点进行靶向切割，实现靶基因序列突变或缺失本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种PDA@CRISPR/Cas9/sgHMGA2 NPs复合体，其特征在于，所述复合体是由聚多巴胺包裹CRISPR/Cas9核糖核蛋白复合物构成的一种纳米颗粒，所述CRISPR/Cas9核糖核蛋白复合物包括CRISPR/Cas9
‑
3NLS
和sgHMGA2，所述CRISPR/Cas9
‑
3NLS
为带有3个核定位信号系统的核酸内切酶，所述sgHMGA2为三个特异性靶向HMGA2基因的单链向导RNA， sgHMGA2对应的DNA序列为SEQ ID NO.:4、5、6中任意一条所示。2.一种PDA@CRISPR/Cas9/sgHMGA2 NPs复合体的制备方法，其特征在于，所述复合体的制备方法包括以下步骤：S1、CRISPR/Cas9
‑
3NLS
的制备；S1.1、根据pET28a/Cas9
‑
Cys载体序列，设计SEQ ID NO.:1所示特异性引物 N3
‑
F，设计SEQ ID NO.:2 所示特异性引物N3
‑
R；S1.2、使用N3
‑
F和N3
‑
R引物及高保真酶POD
‑
plus
‑
Neo对底物 pET28a /Cas9
‑
Cys进行PCR扩增；S1.3、扩增产物经琼脂糖凝胶电泳纯化后回收目的PCR产物；S1.4、PCR产物经磷酸化及自连，亚克隆到大肠杆菌 DH5α中，再经菌落PCR及测序，鉴定筛选包含可编码三个NLS的核苷酸序列的载体；S1.5、以感受态细胞Rosetta为原核表达系统，诱导CRISPR/Cas9
‑
3NLS
的表达，回收纯化浓缩获得高纯度的CRISPR/Cas9
‑
3NLS
；S2、sgHMGA2的制备；S2.1、针对 SEQ ID NO.:3所示的 HMGA2基因片段设计SEQ ID NO.:4、SEQ ID NO.:5和SEQ ID NO.:6所示的 CRISPR/Cas9 靶标序列；S2.2、合成 SEQ ID NO.: 7、SEQ ID NO.:8、SEQ ID NO.:9 、SEQ ID NO.:10 、SEQ ID NO.:11和SEQ ID NO.:12 所示的带接头的靶标序列及其互补序列；S2.3、再经退火处理获得三个针对HMGA2基因的sgRNA 双链 DNA 片段作为插入片段，将其分别与内切酶处理过的DR274 载体重组连接，形成三个可转录sgHMGA2的重组原核表达质粒：DR274
‑
sgHMGA2
‑
1、DR274
‑
sgHMGA2
‑
2和DR274
‑
sgHMGA2
...

【专利技术属性】
技术研发人员：俞兰，武洲英，霍雪，武婷，冯宗琪，王敏，李凤，
申请(专利权)人：内蒙古自治区人民医院，
类型：发明
国别省市：