一种活性提高的Cas蛋白以及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种活性提高的Cas蛋白以及应用，属于核酸编辑领域，特别是规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)技术领域。具体而言，本发明专利技术提供了一种优化的Cas蛋白，具有广泛的应用前景。前景。前景。

【技术实现步骤摘要】
一种活性提高的Cas蛋白以及应用


[0001]本专利技术涉及基因编辑领域，特别是规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)
具体而言，本专利技术涉及一种活性提高的Cas蛋白以及应用。

技术介绍

[0002]CRISPR/Cas技术是一种被广泛使用的基因编辑技术，它通过RNA引导对基因组上的靶序列进行特异性结合并切割DNA产生双链断裂，利用生物非同源末端连接或同源重组进行定点基因编辑。
[0003]CRISPR/Cas9系统是最常用的II型CRISPR系统，它识别3
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NGG的PAM基序，对靶标序列进行平末端切割。CRISPR/Cas Type V系统是一类新发现的CRISPR系统，它具有5
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TTN的基序，对靶标序列进行粘性末端切割，例如Cpf1, C2c1, CasX, CasY。然而目前存在的不同的CRISPR/Cas各有不同的优点和缺陷。例如Cas9, C2c1和CasX均需要两条RNA进行指导RNA，而Cpf1只需要一条指导RNA而且可以用来进行多重基因编辑。CasX具有980个氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种优化的Cas突变蛋白，所述突变蛋白与亲本Cas蛋白的氨基酸序列相比，在对应于SEQ ID No.1所示氨基酸序列的以下任一或任意几个氨基酸位点处存在突变：第417位、第638位；所述第417位氨基酸突变为K，所述第638位氨基酸突变为N。2.一种融合蛋白，所述融合蛋白包括权利要求1所述的Cas突变蛋白以及其他的修饰部分。3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为编码权利要求1所述Cas突变蛋白的多核苷酸序列，或编码权利要求2所述融合蛋白的多核苷酸序列。4.一种载体，其特征在于，所述载体包含权利要求3所述的多核苷酸以及与之可操作连接的调控元件。5.一种CRISPR
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Cas系统，其特征在于，所述系统包括权利要求1所述的Cas突变蛋白以及至少一种gRNA；所述gRNA包括能够结合权利要求1所述的Cas突变蛋白的同向重复序列和能够靶向靶序列的引导序列。6.一种组合物，其特征在于，所述组合物包含：(i) 蛋白组分，其选自：权利要求1所述的Cas突变蛋白或权利要求2所述的融合蛋白；(ii) 核酸组分，其为gRNA，所述gRNA包括能够结合权利要求1所述的Cas突变蛋白的同向重复序列和能够靶向靶序列的引导序列；所述蛋白组分与核酸组分相互结合形成复合物。7.一种活化的CRISPR复合物，所述活化的CRISPR复合物包含：(i) 蛋白组分，其选自：权利要求1所述的Cas突变蛋白或权利要求2所述的融合蛋白；(ii) 核酸组分，其为gRNA，所述gRNA包括能够结合权利要求1所述的Cas突变蛋白的同向重复序列和能够靶向靶序列的引导序列；(iii)结合在（ii）中所述gRNA上的靶序列。8.一种工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包含权利要求1所述的Cas突变蛋白，或权利要求2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的多核苷酸，或权利要求4所述的载体，或权利要求5所述的CRISPR
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Cas系统，或权利要求6所述的组合物，或权利要求7所述的活化的CRISPR复合物。9.权利要求1所述的Cas突变蛋白，或权利要求2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的多核苷酸，或权利要求4所述的载体，或权利要求5所述的CRISPR
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Cas系统，或权利要求6所述的组...

【专利技术属性】
技术研发人员：王林，褚洪官，贾楠楠，
申请(专利权)人：山东舜丰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：