识别铜绿假单胞菌的DNAzymes及筛选检测方法与用途技术

本发明专利技术公开了一种用于特异性识别铜绿假单胞菌（

【技术实现步骤摘要】
识别铜绿假单胞菌的DNAzymes及筛选检测方法与用途
本专利技术属致病菌检测和分子生物学
，具体涉及可用于铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）特异性检测的DNAzymes及其筛选方法，以及其用于检测铜绿假单胞菌的方法与用途。
技术介绍
铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）是自然界中广泛分布的一种革兰氏阴性杆菌，也是人体皮肤、呼吸道常见的条件致病菌。其致病特点为引起继发性感染，多发生在机体免疫力降低时。铜绿假单胞菌能引发鱼的赤皮病，使鱼体出血发炎，鳍片脱落，严重危害水产养殖。铜绿假单胞菌具有很强的生存能力和耐药性，在饮用水的生产过程中不易被消除，WHO已将铜绿假单胞菌作为瓶装矿泉水污染危害的指示菌。铜绿假单胞菌还是住院患者特别是ICU患者感染的重要病原菌，能导致人囊性肺纤维化、角膜炎、胃肠道感染和败血病等。DNAzyme是通过体外筛选获得的具有催化活性的DNA寡核苷酸。DNAzyme具有结构稳定，分子相对较小、催化效率高、易于合成和修饰，不会引起机体免疫反应等优点。DNAzyme一般是从1013~1015本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于特异性识别铜绿假单胞菌（

【技术特征摘要】
1.一种用于特异性识别铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）的DNAzymes，其特征在于：所述DNAzymes的核苷酸序列为单链DNA片段,其核苷酸序列（5’-3’）为PAE-1或者PAE-2：
PAE-1：TCCCCCTCTTGTTCCGGAGGAAGGACGGCAGGTGACCCTT
GGACGGGGTTGTCAGCAGTCTGTCCAT
PAE-2：TCCCCCTCTTGTGTGCGGGAGCACAGAGGGGGTGACGGTG
GTCTGGGGTTGTCAGCAGTCTGTCCAT。


2.根据权利要求1所述的用于特异性识别铜绿假单胞菌的DNAzymes，其特征在于：用于其检测目标物时的底物，其序列为：TGCTGACAACTrAGGACAAGAGGGGGA。


3.根据权利要求1或2所述的用于特异性识别铜绿假单胞菌的DNAzymes，其特征在于：对所述的DNAzymes序列和/或底物进行任何突变、改造所得到的序列和/或底物，并用于铜绿假单胞菌的检测。


4.根据权利要求3所述的用于特异性识别铜绿假单胞菌的DNAzymes，其特征在于：所述的突变、改造选自：改造、磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、同位素化修饰；添加生物素、地高辛、荧光物质、淬灭集团、纳米材料、聚乙二醇、肽段、蛋白、叶酸或酶标记。


5.一种如权利要求1所述的用于特异性识别铜绿假单胞菌的DNAzyme的筛选方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)合成含有35个随机碱基的寡核苷酸文库和含有切割位点及生物素标签的引物；
(2)将要检测的铜绿假单胞菌在营养肉汤液体培养基中进行培养；将菌悬液进行浓度梯度稀释并涂琼脂板以检测菌体数；
(3)将步骤（2）所得菌体离心，保留上清液即胞外产物；
(4)将初始文库...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕明生，秦铭灿，王淑军，卢静，武航婕，马小艺，范诗慧，田雪晴，
申请(专利权)人：江苏海洋大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32