siRNA修饰物及其在抑制血管新生中的应用制造技术

本发明专利技术公开了siRNA修饰物及其在抑制血管新生中的应用。本发明专利技术公开的siRNA修饰物为对siRNA进行修饰得到的物质，siRNA由正义链和反义链组成，正义链的写为序列1或序列3，反义链的序列为序列2或序列5，修饰为2'氟代修饰、硫代磷酸酯键修饰、2'‑O‑甲基化修饰、锁核苷酸修饰和/或胆固醇修饰。实验证明，本发明专利技术的siRNA修饰物在抑制血管新生中具有比未修饰的siRNA更好的效果，具有很高的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
siRNA修饰物及其在抑制血管新生中的应用
本专利技术涉及生物技术和治疗领域中，siRNA修饰物及其在抑制血管新生中的应用。
技术介绍
血管内皮生长因子(VEGF)是血管内皮细胞特异性的生长因子，人VEGF基因定位于6号染色体，全长14kb，经过转录后剪切可形成5种异构体，VEGF可以诱导机体内的血管新生。具体机制为VEGF可以跟多种相应的受体结合，包括VEGFR家族，PDGFR家族和其他酪氨酸蛋白激酶等，VEGF和其受体结合后，使其受体胞内段的酪氨酸残基被磷酸化，活化胞内下游的信号通路，促进内皮细胞和肿瘤细胞的增殖，增加内皮细胞或肿瘤细胞的迁移，诱导肿瘤组织中血管生成，促进肿瘤细胞的生长等；此外，在多种与眼科相关的疾病中，尤其是老年性黄斑病变及糖尿病视网膜病变等疾病发生过程中，VEGF表达量会上升，进一步促进眼球内的血管新生。血管内皮生长因子受体1(VEGFR1，又称为FLT1)作为VEGFa，VEGFb及PGF的主要受体，调控组织内血管生成，细胞生存，细胞迁移及侵袭等，当VEGFR1与相应配体结合时，通过自身胞内段的磷酸化，激活MAPK/AKT/ERK等信号通路。siRNA是一类小RNA序列，通常是20-25nt的双链RNA。siRNA可以通过结合靶基因的编码区(CDS)，引起mRNA水平的降解，导致蛋白翻译受阻。大量的研究表明，siRNA可以作用于多种靶基因，从而治疗该基因引起的各类疾病。外泌体是一类包含了小RNA，DNA和蛋白质的膜泡结构(30-150nm)。外泌体存在于大多数的生物体液中，包括血液、唾液、尿液等，并且大多数培养的细胞也会分泌外泌体。外泌体一直被视为特异性分泌的膜泡，能够参与细胞间通讯，细胞的微环境等众多生物学功能调控。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供siRNA修饰物及其在抑制血管新生中的应用。本专利技术提供了的siRNA修饰物，为对siRNA进行修饰得到的物质，所述siRNA由正义链和反义链组成，所述正义链为如下A1)或A2)：A1)序列表中序列1的第1-19位所示的单链核酸分子；A2)将序列表中序列1的第1-19位经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1的第1-19位具有相同功能的单链核酸分子；所述反义链为如下B1)或B2)：B1)序列表中序列2的第1-19位所示的单链核酸分子；B2)将序列表中序列2的第1-19位经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2的第1-19位具有相同功能的单链核酸分子；所述修饰为2'氟代修饰、硫代磷酸酯键修饰、2'-O-甲基化修饰、锁核苷酸修饰和/或胆固醇修饰；所述2'氟代修饰是将核苷酸核糖或脱氧核糖2’位置上的羟基替换为氟原子；所述硫代磷酸酯键修饰为将连接两个相邻核苷酸的磷酸二酯键中的氧原子替换为硫原子；所述2'-O-甲氧基化修饰是将核苷酸核糖或脱氧核糖2’位置上的羟基替换为甲氧基；所述锁核苷酸修饰是将核苷酸核糖或脱氧核糖2’位置和4’位置的碳原子相连，是一种特殊的双环状核苷酸衍生物；所述胆固醇修饰是将胆固醇分子连接在单链核酸分子的5’端或3’端。所述单链核酸分子由核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸与核糖核苷酸连接得到。序列1和序列2中A、U、C和G均为核糖核苷酸，T为脱氧核糖核苷酸。所述修饰均可为对所述siRNA的正义链进行的修饰。所述siRNA修饰物中，所述2'氟代修饰可对所述正义链5’端和/或3’端核苷酸进行。所述硫代磷酸酯键修饰可对所述正义链5’端和/或3’端核苷酸间的磷酸二酯键进行。所述2'-O-甲基化修饰可对所述正义链5’端和/或3’端核苷酸进行。所述锁核苷酸修饰可对所述正义链中的尿嘧啶核苷酸进行。所述胆固醇修饰可对所述正义链5’末端核苷酸进行。所述2'氟代修饰可对所述正义链5’端3个核苷酸和/或3’端3个核苷酸进行。所述硫代磷酸酯键修饰可对所述正义链5’端3个核苷酸间和/或3’端3个核苷酸间的磷酸二酯键进行。所述2'-O-甲基化修饰可对所述正义链5’端3个核苷酸和/或3’端3个核苷酸进行。所述siRNA修饰物具体可为名称分别为VEGF-1、VEGF-2、VEGF-3、VEGF-4、VEGF-5、VEGF-6或VEGF-10的siRNA修饰物；所述VEGF-1、所述VEGF-2、所述VEGF-3、所述VEGF-4、所述VEGF-5和所述VEGF-6的正义链均为序列表中序列1所示的单链RNA，反义链均为序列表中序列2所示的单链RNA；所述VEGF-1为对所述正义链5’端3个核苷酸和3’端3个核苷酸进行2'氟代修饰、并对所述正义链5’端3个核苷酸间和3’端3个核苷酸间的磷酸二酯键进行硫代磷酸酯键修饰得到的物质；所述VEGF-2为对所述正义链5’端3个核苷酸和3’端3个核苷酸进行2'-O-甲基化修饰、并对所述正义链5’端3个核苷酸间和3’端3个核苷酸间的磷酸二酯键进行硫代磷酸酯键修饰得到的物质；所述VEGF-3为对所述正义链中的尿嘧啶核苷酸进行锁核苷酸修饰得到的物质；所述VEGF-4为对所述正义链5’末端核苷酸进行胆固醇修饰得到的物质；所述VEGF-5为对所述正义链5’端3个核苷酸和3’端3个核苷酸进行2'氟代修饰、并对所述正义链5’端3个核苷酸间和3’端3个核苷酸间的磷酸二酯键进行硫代磷酸酯键修饰、并对所述正义链5’末端核苷酸进行胆固醇修饰得到的物质；所述VEGF-6为对所述正义链5’端3个核苷酸和3’端3个核苷酸进行2'-O-甲基化修饰、并对所述正义链5’端3个核苷酸间和3’端3个核苷酸间的磷酸二酯键进行硫代磷酸酯键修饰、并对所述正义链5’末端核苷酸进行胆固醇修饰得到的物质；所述VEGF-10的正义链为序列表中序列3所示的单链RNA，反义链为序列表中序列4所示的单链RNA；所述VEGF-10为对所述正义链5’端起的第7、9、10和11位以及所述反义链5’端起的第2、6、8、9、14和16位进行2'氟代修饰、并对所述正义链以及反义链的5’端3个核苷酸间和3’端3个核苷酸间的磷酸二酯键进行硫代磷酸酯键修饰、并对所述正义链和所述反义链中未进行2'氟代修饰的核苷酸进行2'-O-甲基化修饰得到的物质。所述siRNA，也属于本专利技术的保护范围。本专利技术还提供了一种成套物质，所述成套物质包括所述siRNA修饰物和外泌体。所述成套物质可由所述siRNA修饰物和所述外泌体组成。所述成套物质具有如下任一用途：X1)抑制老年性黄斑病变；X2)抑制糖尿病视网膜病变；X3)抑制血管新生；X4)抑制眼球血管新生；X5)抑制内皮细胞或肿瘤细胞的增殖；X6)抑制内皮细胞或肿瘤细胞的迁移；X7)抑制肿瘤的血管生成；X8)抑制肿瘤细胞的生长；X9)制备抑制老年性黄斑病变产品；X10)制备抑制糖尿病视网膜病变产本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.siRNA修饰物，为对siRNA进行修饰得到的物质，所述siRNA由正义链和反义链组成，所述正义链为如下A1)或A2)：/nA1)序列表中序列1的第1-19位所示的单链核酸分子；/nA2)将序列表中序列1的第1-19位经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1的第1-19位具有相同功能的单链核酸分子；/n所述反义链为如下B1)或B2)：/nB1)序列表中序列2的第1-19位所示的单链核酸分子；/nB2)将序列表中序列2的第1-19位经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2的第1-19位具有相同功能的单链核酸分子；/n所述修饰为2'氟代修饰、硫代磷酸酯键修饰、2'-O-甲基化修饰、锁核苷酸修饰和/或胆固醇修饰；/n所述2'氟代修饰是将核苷酸核糖或脱氧核糖2’位置上的羟基替换为氟原子；/n所述硫代磷酸酯键修饰为将连接两个相邻核苷酸的磷酸二酯键中的氧原子替换为硫原子；/n所述2'-O-甲氧基化修饰是将核苷酸核糖或脱氧核糖2’位置上的羟基替换为甲氧基；/n所述锁核苷酸修饰是将核苷酸核糖或脱氧核糖2’位置和4’位置的碳原子相连；/n所述胆固醇修饰是将胆固醇分子连接在单链核酸分子的5’端或3’端。/n...

【技术特征摘要】
1.siRNA修饰物，为对siRNA进行修饰得到的物质，所述siRNA由正义链和反义链组成，所述正义链为如下A1)或A2)：
A1)序列表中序列1的第1-19位所示的单链核酸分子；
A2)将序列表中序列1的第1-19位经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1的第1-19位具有相同功能的单链核酸分子；
所述反义链为如下B1)或B2)：
B1)序列表中序列2的第1-19位所示的单链核酸分子；
B2)将序列表中序列2的第1-19位经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2的第1-19位具有相同功能的单链核酸分子；
所述修饰为2'氟代修饰、硫代磷酸酯键修饰、2'-O-甲基化修饰、锁核苷酸修饰和/或胆固醇修饰；
所述2'氟代修饰是将核苷酸核糖或脱氧核糖2’位置上的羟基替换为氟原子；
所述硫代磷酸酯键修饰为将连接两个相邻核苷酸的磷酸二酯键中的氧原子替换为硫原子；
所述2'-O-甲氧基化修饰是将核苷酸核糖或脱氧核糖2’位置上的羟基替换为甲氧基；
所述锁核苷酸修饰是将核苷酸核糖或脱氧核糖2’位置和4’位置的碳原子相连；
所述胆固醇修饰是将胆固醇分子连接在单链核酸分子的5’端或3’端。


2.根据权利要求1所述的siRNA修饰物，其特征在于：所述siRNA由序列表中序列1所示的正义链和序列2所述的反义链组成，或由序列表中序列3所示的正义链和序列4所示的反义链组成。


3.根据权利要求1或2所述的siRNA修饰物，其特征在于：所述修饰均为对所述siRNA的正义链和/或反义链进行的修饰。


4.根据权利要求1-3中任一所述的siRNA修饰物，其特征在于：所述siRNA修饰物中，所述2'氟代修饰对所述正义链5’端和/或3’端核苷酸进行；
和/或，所述硫代磷酸酯键修饰对所述正义链5’端和/或3’端核苷酸间的磷酸二酯键进行；
和/或，所述2'-O-甲基化修饰对所述正义链5’端和/或3’端核苷酸进行；
和/或，所述锁核苷酸修饰对所述正义链中的尿嘧啶核苷酸进行；
和/或，所述胆固醇修饰对所述正义链5’末端核苷酸进行；
进一步，所述2'氟代修饰对所述正义链5’端3个核苷酸和/或3’端3个核苷酸进行；
和/或，所述硫代磷酸酯键修饰对所述正义链5’端3个核苷酸间和/或3’端3个核苷酸间的磷酸二酯键进行；
和/或，所述2'-O-甲基化修饰对所述正义链5’端3个核苷酸和/或3’端3个核苷酸进行。


5.根据权利要求1-4中任一所述siRNA修饰物，其特征在于：所述siRNA修饰物为名称分别为VEGF-1、VEGF-2、VEGF-3、VEGF-4、VEGF-5、VEGF-6或VEGF-10的siRNA修饰物；
所述VEGF-1、所述VEGF-2、所述VEGF-3、所述VEGF-4、所述VEGF-5和所述VEGF-6的正义链均为序列表中序列1所示的单链RNA，反义链均为序列表中序列2所示的单链RNA；
所述VEGF-1为对所述正义链5’端3个核苷酸和3’端3个核苷酸进行2'氟代修饰、并对所述正义链5’端3个核苷酸间和3’端3个核苷酸间的磷酸二酯键进行硫代磷酸酯键修饰得到的物质；
所述VEGF-2为对所述正义链5’端3个核苷酸和3’端3个核苷酸进行2'-O-甲基化修饰、并对所述正义链5’端3个核苷酸间和3’端3个核苷酸间的磷酸二酯键进行硫代磷酸酯键修饰得到的物质；
所述VEGF-3为对所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡荣宽，王晓娜，张佩琢，
申请(专利权)人：苏州吉玛基因股份有限公司，苏州吉诺瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32