制备诊断和治疗1型糖尿病药物的分子靶标及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种制备诊断和治疗糖尿病药物的分子靶标及其应用，分子靶标为mIR‑203a，mIR‑203a的碱基序列为SEQ ID NO：1。分子靶标mIR‑203a能准确反映1型糖尿病胰岛功能损伤的进展情况，进而能够用于糖尿病的诊断。同时mIR‑203a还具有明显抑制胰岛β细胞的增殖和促进胰岛β细胞的凋亡能力，可以作为治疗1型糖尿病的分子靶标。因此，分子靶标mIR‑203a具有重要的科研理论和临床应用价值，为1型糖尿病的诊断、治疗或预后判断提供新的线索和依据，可应用于制备诊断和治疗1型糖尿病药物。

【技术实现步骤摘要】
制备诊断和治疗1型糖尿病药物的分子靶标及其应用
本专利技术涉及分子靶标领域，特别地，涉及一种制备诊断和治疗1型糖尿病药物的分子靶标及其应用。
技术介绍
1型糖尿病是常见的代谢疾病，近年来其发病率和死亡率呈逐渐上升趋势。由于1型糖尿病的演变是较为复杂的病理过程，给临床的诊断及治疗带来一定的局限性，因此亟需提供一种药物为1型糖尿病的诊断、治疗或预后判断提供新的线索和依据。
技术实现思路
本专利技术提供了一种制备诊断和治疗1型糖尿病药物的分子靶标及其应用，以解决制备1型糖尿病诊断和治疗药物的技术问题。本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术一方面提供了一种制备诊断和治疗1型糖尿病药物的分子靶标，分子靶标为mIR-203a，mIR-203a的碱基序列为SEQIDNO：1。本专利技术另一方面提供了一种分子靶标在制备诊断和治疗1型糖尿病药物中的应用，分子靶标为mIR-203a，mIR-203a的碱基序列为SEQIDNO：1。通过定量检测mIR-203a的表达水平来诊治1型糖尿病。所述定量检测包括扩增mIR-203aRNA。本专利技术另一方面提供了一种分子靶标在制备诊断和治疗1型糖尿病药物中的应用，分子靶标抑制剂为mIR-203a抑制剂，mIR-203a抑制剂的碱基序列为SEQIDNO：2，具体为：5′-CTAGTGGTCCTAAACATTTCAC-3′。进一步地，mIR-203a应用于制备1型糖尿病的诊断试剂。进一步地，mIR-203a应用于制备1型糖尿病的诊断试剂盒。进一步地，mIR-203a应用于制备1型糖尿病的治疗试剂。进一步地，mIR-203a应用于制备1型糖尿病的治疗试剂盒。本专利技术具有以下有益效果：分子靶标mIR-203a能准确反映1型糖尿病的进展情况，进而能够用于1型糖尿病诊断。同时mIR-203a还具有明显抑制胰岛β细胞增殖和促进β细胞凋亡的能力，可以作为治疗1型糖尿病的分子靶标。因此，分子靶标mIR-203a具有重要的科研理论和临床应用价值，为1型糖尿病的诊断、治疗或预后判断提供新的线索和依据，可应用于制备诊断和治疗1型糖尿病药物。除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本专利技术还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本专利技术作进一步详细的说明。附图说明构成本申请的一部分的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1为实施例1中mIR-203a在正常血糖与高血糖NOD小鼠胰岛中的表达情况图；图2为实施例1中mIR-203a在正常胰岛与炎症胰岛中的表达情况图；图3～图6为实施例2中mIR-203a对MIN6细胞凋亡的影响图；图7～图8为实施例2中mIR-203a对MIN6细胞增殖的影响图；图9为实施例3中mIR-203a对糖尿病小鼠血糖的影响图。可见，mIR-203a抑制剂能逆转降低血糖并逆转糖尿病的潜能。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的实施例进行详细说明，但是本专利技术可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。本专利技术的优选实施例提供了一种制备诊断和治疗1型糖尿病药物的分子靶标，分子靶标为mIR-203a，mIR-203a的碱基序列为SEQIDNO：1。分子靶标mIR-203a为短链非编码RNA，其碱基序列为SEQIDNO：1，具体为：5′-GUGAAAUGUUUAGGACCACUAG-3′。mIR-203a抑制剂为mIR-203a的反向互补序列，其碱基序列为SEQIDNO：2，具体为：5′-CTAGTGGTCCTAAACATTTCAC-3′。本专利技术具有以下有益效果：分子靶标mIR-203a能准确反映1型糖尿病的进展情况，进而能够用于1型糖尿病诊断。同时mIR-203a还具有明显抑制胰岛β细胞的增殖和促进胰岛β细胞凋亡的能力，可以作为治疗1型糖尿病的分子靶标。因此，分子靶标mIR-203a具有重要的科研理论和临床应用价值，为1型糖尿病的诊断、治疗或预后判断提供新的线索和依据，可应用于制备诊断和治疗1型糖尿病药物。本专利技术另一方面提供了一种分子靶标在制备诊断和治疗1型糖尿病药物中的应用，分子靶标为mIR-203a。进一步地，mIR-203a应用于制备1型糖尿病的诊断试剂。进一步地，mIR-203a应用于制备1型糖尿病的诊断试剂盒。进一步地，mIR-203a应用于制备1型糖尿病的治疗试剂。进一步地，mIR-203a应用于制备1型糖尿病的治疗试剂盒。实施例1mIR-203a在正常小鼠胰岛β细胞和1型糖尿病小鼠胰岛β细胞中的表达情况mIR-203a在胰岛β细胞中的表达情况1)获取1型糖尿病胰腺组织的标本(该组织标本分别为正常小鼠胰腺①和1型糖尿病小鼠胰岛炎期②和1型糖尿病小鼠发病期胰腺组织③)，将标本常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8um。2)石蜡切片经过常规脱蜡至水。60℃条件下，烤片30-60min，趁热放入二甲苯中，静置10min后，转移到另一新的二甲苯中，放置10min；接着置于100％乙醇中，3min，95％乙醇5min，75％乙醇5min，50％乙醇3min，无酶水中3min，最后用PBS洗3次，每次3min。3％H2O2，室温5-10min以灭活内源性酶。无酶水洗1min×3。3)暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3％柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml3％柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶)，37℃或是室温消化3-30min(视标本新旧、厚薄自行调整)(15min)。原位杂交用PBS洗5min×3，无酶水洗3min×2。4)后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液1％多聚甲醛/0.1MPBS(PH7.2～7.6)，含有1/1000DEPC。室温固定10min，无酶水洗1min×3。5)预杂交：湿盒的准备，干的杂交盒底部加20％甘油20ml以保持湿度。按每张切片20ul加预杂交液，恒温42℃2-4小时，吸取多余液体，不洗。6)杂交：将切片分为实验组(即图2所示mIR-203a组)和对照组(即图2所示NC组，NC是阴性对照，Scramble为无关序列对照，Insulin是显示胰岛的分子)，其中实验组按每张切片20ulmIR-203a探针杂交液(该杂交液含与mIR-203a结合的探针分子，该杂交探针订制于武汉博士德生物工程有限公司。检测所用的原位杂交试剂盒：敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅰ，货号MK1030，该敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅰ包括mIR-203a探针杂交液和寡核苷酸探针杂交液)加在切片上，对照组(NC组)切片按照每张切片20ul寡核苷酸探针杂交液(该杂交液含对照无关序列Nccontrol，该杂交探针订制于武汉博士德生物工程有限公司。检测所用的原位杂交试剂盒：敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅰ，货号MK1030)恒温箱42℃杂交过夜(孵育时间尽量达16本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备诊断和治疗1型糖尿病药物的分子靶标，其特征在于，所述分子靶标为mIR-203a，mIR-203a的碱基序列为SEQ ID NO：1。/n

【技术特征摘要】
1.一种制备诊断和治疗1型糖尿病药物的分子靶标，其特征在于，所述分子靶标为mIR-203a，mIR-203a的碱基序列为SEQIDNO：1。


2.一种分子靶标在制备诊断和治疗1型糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述分子靶标为mIR-203a。


3.根据权利要求2所述的分子靶标在制备诊断和治疗1型糖尿病药物中的应用，其特征在于，通过定量检测mIR-203a的表达水平来诊治1型糖尿病。


4.根据权利要求3所述的分子靶标在制备诊断和治疗1型糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述定量检测包括扩增mIR-203aRNA。


5.根据权利要求2所述的分子靶标在制备诊断和治疗1型糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述mIR-203a应用于制备1型糖尿病的诊断试剂。


6.根据权利要求2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：周智广，俞海波，
申请(专利权)人：中南大学湘雅二医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43