【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于多核苷酸的靶向编辑的方法和组合物序列表提供ASCII文本格式的序列表作为纸质副本的替代，该序列表是根据37C.F.R.§1.821提交的，名称为“81555_ST25.txt”，大小为82千字节，于2018年4月24日生成。这个序列表特此通过引用以其披露内容并入本说明书中。
本申请涉及用于细胞的基因组中的靶向转基因插入、靶向等位基因置换、或靶向诱变的方法和组合物。
技术介绍
在靶向基因组修饰领域中已经取得的最新进展使得常规的靶向修饰可以很快成为可能。针对开发通过与工程化的crRNA-tracrRNA双链体复合或与单引导RNA复合发挥作用的位点特异性核酸酶(例如，锌指核酸酶(ZFN)、大范围核酸酶、转录激活子样效应子核酸酶(TALENS)以及成簇规律间隔短回文重复/CRISPR相关的核酸酶(CRISPR/Cas))，靶向并且切割基因组DNA的方法和组合物，在过去几年中已经取得了显著的进展。这些位点特异性核酸酶可以诱导靶向诱变、诱导DNA序列的靶向缺失、并且促进外源供体DNA多核苷酸(例如转基因)在靶向DNA...
【技术保护点】
1.一种包含crRNA分子及其相应tracrRNA分子的DNA靶向RNA双链体，其中所述crRNA分子和tracrRNA分子分别包含以下核酸序列：SEQ ID NO:55和56、SEQ ID NO:57和58、SEQ IDNO:59和60、SEQ ID NO:61和62、SEQ ID NO:63和64、SEQ ID NO:65和66、SEQ ID NO:67和68、SEQ ID NO:69和70、SEQ ID NO:71和72、SEQ ID NO:73和74、SEQ ID NO:75和76、SEQ IDNO:77和78、SEQ ID NO:79和80、SEQ ID NO:8...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含crRNA分子及其相应tracrRNA分子的DNA靶向RNA双链体，其中所述crRNA分子和tracrRNA分子分别包含以下核酸序列：SEQIDNO:55和56、SEQIDNO:57和58、SEQIDNO:59和60、SEQIDNO:61和62、SEQIDNO:63和64、SEQIDNO:65和66、SEQIDNO:67和68、SEQIDNO:69和70、SEQIDNO:71和72、SEQIDNO:73和74、SEQIDNO:75和76、SEQIDNO:77和78、SEQIDNO:79和80、SEQIDNO:81和82、或SEQIDNO:83和84，其中所述crRNA进一步包含DNA靶向区段，所述DNA靶向区段包含与靶DNA分子中的序列互补的核酸序列，由此所述DNA靶向RNA双链体靶向靶DNA序列并且与其杂交。
2.如权利要求1所述的DNA靶向RNA双链体，其中所述crRNA分子的DNA靶向区段包含长度为至少12个核苷酸，并且与靶DNA分子中的序列具有至少80％互补性的核酸序列。
3.如权利要求1所述的DNA靶向RNA双链体，其中所述crRNA分子及其相应tracrRNA分子的双链体形成区段分别包含以下核酸序列：SEQIDNO:55和96、SEQIDNO:57和97、SEQIDNO:59和98、SEQIDNO:61和99、SEQIDNO:63和100、SEQIDNO:65和101、SEQIDNO:67和102、SEQIDNO:69和103、SEQIDNO:71和104、SEQIDNO:73和105、SEQIDNO:75和106、SEQIDNO:77和107、SEQIDNO:79和108、SEQIDNO:81和109、或SEQIDNO:83和110。
4.一种编码如权利要求1所述的crRNA或tracrRNA分子的DNA分子。
5.一种编码如权利要求1所述的crRNA分子和tracrRNA分子二者的DNA分子。
6.如权利要求4-5中任一项所述的DNA分子，其中所述crRNA分子及其相应tracrRNA分子由以下核酸序列编码，所述核酸序列分别包含SEQIDNO:3和4、SEQIDNO:5和6、SEQIDNO:7和8、SEQIDNO:9和10、SEQIDNO:11和12、SEQIDNO:13和14、SEQIDNO:15和16、SEQIDNO:17和18、SEQIDNO:19和20、SEQIDNO:21和22、SEQIDNO:23和24、SEQIDNO:28和29、SEQIDNO:30和31、SEQIDNO:32和33、或SEQIDNO:34和35、或其互补序列，其中所述crRNA进一步包含DNA靶向区段，所述DNA靶向区段包含与靶DNA分子中的序列互补的核酸序列，由此所述DNA靶向RNA双链体靶向靶DNA序列并且与其杂交。
7.一种包含至少一个crRNA区段及其相应tracrRNA区段的RNA分子，其中这些区段可操作地连接在tRNA切割序列的5’和/或3’端，由此在tRNA切割后，所述crRNA和tracrRNA区段变成能够形成DNA靶向RNA双链体的分开并且不同的分子。
8.如权利要求7所述的RNA分子，其中所述分子包含处于串联排列的tRNA-crRNA-tRNA-tracrRNA或tRNA-tracrRNA-tRNA-crRNA。
9.如权利要求7所述的RNA分子，其中所述分子包含至少两个crRNA区段及其相应tracrRNA区段，其中所述区段可操作地连接在tRNA切割序列的5’和/或3’端。
10.如权利要求9所述的RNA分子，其中所述两个crRNA包含DNA靶向区段，所述DNA靶向区段是与不同靶DNA分子中的不同序列互补的核酸序列。
11.如权利要求7所述的RNA分子，其中所述crRNA区段及其相应tracrRNA区段中的至少一个分别包含以下核酸序列：SEQIDNO:55和56、SEQIDNO:57和58、SEQIDNO:59和60、SEQIDNO:61和62、SEQIDNO:63和64、SEQIDNO:65和66、SEQIDNO:67和68、SEQIDNO:69和70、SEQIDNO:71和72、SEQIDNO:73和74、SEQIDNO:75和76、SEQIDNO:77和78、SEQIDNO:79和80、SEQIDNO:81和82、或SEQIDNO:83和84，其中所述crRNA进一步包含DNA靶向区段，所述DNA靶向区段包含与靶DNA序列中的序列互补的核酸序列。
12.如权利要求7-11中任一项所述的RNA分子，其中所述tRNA切割位点的核酸序列与SEQIDNO:112具有至少90％同一性。
13.一种编码至少一个如权利要求7所述的RNA分子的核酸分子。
14.如权利要求13所述的核酸分子，其中所述RNA分子的表达是由RNA聚合酶II驱动的启动子驱动的。
15.如权利要求14所述的核酸分子，其中所述由RNA聚合酶II驱动的启动子的核酸序列与SEQIDNO:85具有至少90％同一性。
16.如权利要求13所述的核酸分子，其中所述RNA分子的表达是由RNA聚合酶III驱动的启动子驱动的。
17.如权利要求16所述的核酸分子，其中所述由RNA聚合酶III驱动的启动子的核酸序列与SEQIDNO:86具有至少90％同一性。
18.如权利要求13所述的核酸分子，其中一个RNA分子的表达是由RNA聚合酶II驱动的启动子驱动的，并且第二RNA分子的表达是由RNA聚合酶III驱动的启动子驱动的。
19.如权利要求13-18中任一项所述的核酸分子，其中存在两个表达盒，它们各自编码crRNA和相应tracrRNA分子。
20.如权利要求13-19中任一项所述的核酸分子，其中至少一个表达盒包含SEQIDNO:87-95中任一个的序列。
21.一种用于靶向诱变的工程...
【专利技术属性】
技术研发人员：李江，许建平，S·李，耿立召，
申请(专利权)人：先正达参股股份有限公司，先正达生物科技中国有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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