用于重组蛋白的更高表达的前导序列制造技术

本发明专利技术涉及用于重组蛋白的更高表达的前导序列。本发明专利技术进一步涉及使用前导序列制备胰岛素和胰岛素类似物的方法。前导肽显著增加了前胰岛素原的表达。本发明专利技术还涉及通过将片段与本发明专利技术的前导序列融合而制备的蛋白序列。通过使用所述前导序列制备胰岛素及其类似物来证明本发明专利技术。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于重组蛋白的更高表达的前导序列
本专利技术涉及用于表达重组蛋白的新型前导序列。本专利技术还涉及使用前导序列改进重组蛋白的表达的方法。
技术介绍

技术介绍
说明包括可有助于理解本专利技术的信息。这并不是承认本文提供的任何信息是现有技术或与当前要求保护的本专利技术有关，或者明确或隐含引用的任何出版物是现有技术。重组DNA技术的应用已经使许多重组治疗蛋白可用于生物医药用途。原核和真核表达系统通常都用于重组蛋白的生产。在所有表达系统中，大肠杆菌(Escherichiacoli,E.coli)仍然是用于生产重组蛋白的最有利宿主，因为其蛋白生产更快、更廉价并且产量高。众所周知的遗传学和各种分子工具的可用性也极大地促进了大肠杆菌在生物医药工业中的应用。各种启动子、前导配偶体和突变菌株的可用性为大肠杆菌增加了巨大优势，使其成为实验室和工业水平上用于重组蛋白生产的最广泛使用的方法之一。伴随许多优点，然而，由于缺乏进行翻译后修饰诸如糖基化和重折叠以便表现出活性的复杂机制，大肠杆菌在表达更复杂的蛋白上存在局限性。<br>另一方面，许多本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于生产胰岛素和胰岛素类似物的方法，包括式1的前胰岛素原：/nR

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180618 IN 2018210226731.一种用于生产胰岛素和胰岛素类似物的方法，包括式1的前胰岛素原：
R1-X1-X2-X3
式1
作为中间体，其中，X1是胰岛素或胰岛素类似物的‘B’链，X2是选自RR或KR或RK或KK的二肽，X3是胰岛素或胰岛素类似物的‘A’链，以及R1是前导肽序列。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述前导肽选自：
a)具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的肽，
b)具有如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的肽，
c)包括以下氨基酸序列的肽：MSRIVINAYAKATQP；
d)包括以下氨基酸序列的肽：MEKHTKDQIIEAPHM；或
e)与a)、b)、c)或d)具有至少80％同源性的肽。


3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法包括由前胰岛素原制备式2：X1-X2-X3的胰岛素原，其中，X1是胰岛素或胰岛素类似物的‘B’链，X2是选自RR或KR或RK或KK的二肽，以及X3是胰岛素或胰岛素类似物的‘A’链。


4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述方法包括通过在生产培养基中培养包括编码可操作地连接至所述前导肽的胰岛素原的核酸的原核宿主细胞来表达胰岛素原。


5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述原核宿主细胞选自假单胞菌细胞或大肠杆菌细胞。


6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述生产培养基包括1％酵母提取物、1％葡萄糖、0.3％KH2PO4、1.25％K2HPO4、0.5％(NH4)2SO4、0.05％NaCl、0.1％MgSO4·7H2O和0.1％的痕量金属溶液(FeSO4、ZnSO4、CoCl2、NaMoO4、CaCl2、MnCl2、CuSO4或H3BO3于盐酸中)、卡那霉素(20μg/ml)每100ml。


7.一种多肽，包括可操作地连接至胰岛素或胰岛素类似物的前体的前导肽，其中，所述前导肽选自：
a)具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的肽，
b)具有如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的肽，
c)包括以下氨基酸序列的肽：MSRIVINAYAKATQP；
d)包括以下氨基酸序列的肽：MEKHTKDQIIEAPHM；或
e)与a)、b)、c)或d)具有至少80％同源性的肽。


8.根据权利要求7所述的多肽，其中，所述胰岛素或胰岛素类似物的前体是式2：X1-X2-X3的胰岛素原，其中，X1是胰岛素或胰岛素类似物的‘B’链，X2是选自RR或KR或RK或KK的二肽，以及X3是胰岛素或胰岛素类似物的‘A’链。


9.根据权利要求7所述的多肽，其中，所述前导肽指导所述胰岛素和胰岛素类似物在原核宿主细胞中的表达。


10.根据权利要求7所述的多肽，其中，所述原核宿主细胞选自假单胞菌细胞或大肠杆菌细胞。


11.一种前导肽序列，选自：
a)具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的肽，
b)具有如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的肽，
c)包括以下氨基酸序列的肽：MSRIVINAYAKATQP；
d)包括以下氨基酸序列的肽：MEKHTKDQIIEAPHM；或
e)与a)、b)、c)或d)具有至少80％同源性的肽。


12.一种使用式1：R1-X1-X2-X3的前胰岛素原制备的式2：X1-X2-X3的胰岛素原序列，其中，X1是胰岛素或胰岛素类似物的‘B’链，X2是选自RR或KR或RK或KK的二肽，X3是胰岛素或胰岛素类似物的‘A’链，以及R1选自：
a)具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的肽，
b)具有如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的肽，
c)包括以下氨基酸序列的肽：MSRIVINAYAKATQP；
d)包括以下氨基酸序列的肽：MEKHTKDQIIEAPHM；或
e)与a)、b)、c)或d)具有至少80％同源性的肽。


13.一种编码选自以下的前导肽的核苷酸序列：
a)具有如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：D萨特，S库马，SP巴查特，S康佩里，RS乔古尔，
申请(专利权)人：联合化学实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：印度;IN