新型白介素2及其用途制造技术

本发明专利技术涉及新型白介素2(IL‑2)突变蛋白。本发明专利技术还提供包含该IL‑2突变蛋白的融合蛋白、免疫缀合物，以及编码该IL‑2突变蛋白的核酸、包含该核酸的载体和宿主细胞。本发明专利技术进一步提供制备该IL‑2突变蛋白的方法、包含该IL‑2突变蛋白的药物组合物和该突变蛋白的治疗用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型白介素2及其用途
本专利技术涉及新型白介素2(IL-2)突变蛋白及其用途。具体地，本专利技术涉及，与野生型IL-2相比，具有改善的性质，例如，改善的成药性、降低的IL-2Rα受体结合能力和/或提高的IL-2Rβ受体结合能力的IL-2突变蛋白。本专利技术还提供包含该IL-2突变蛋白的融合蛋白、免疫缀合物，以及编码该IL-2突变蛋白的核酸、包含该核酸的载体和宿主细胞。本专利技术进一步提供制备该IL-2突变蛋白的方法、包含该IL-2突变蛋白的药物组合物和该突变蛋白的治疗用途。
技术介绍
白介素-2(IL-2)，也称作T细胞生长因子(TCGF)，是一种主要由活化的T细胞，尤其是CD4+T辅助细胞产生的多能细胞因子。在真核细胞中，人IL-2(uniprot:P60568)作为153个氨基酸的前体多肽合成，在去除N端20个氨基酸后，产生成熟的分泌性IL-2。其它物种的IL-2的序列也已经公开，参见NCBIRefSeqNo.NP032392(小鼠)、NP446288(大鼠)或NP517425(黑猩猩)。白介素2具有4个反平行的、两亲性α螺旋，此4本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白，与野生型IL-2(优选人IL-2，更优选包含SEQ ID NO:26序列的IL-2)相比，包含至少一个突变，所述突变在选自以下的氨基酸位置引入一个或多个糖基化基序N-X-S/T：/n35N-36X-37T/S；38N-39X-40T/S；41N-42X-43T/S；43N-44X-45T/S；45N-46X-47T/S；62N-63X-64T/S；68N-69X-70T/S；72N-73X-74T/S；74N-75X-76T/S，其中，X是除脯氨酸外的任何氨基酸，优选地X是与野生型IL-2相应位置的氨基酸相同的氨基酸，或是其保守取代残基；/n其中氨基酸位...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180921 CN 201811108663X一种IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白，与野生型IL-2(优选人IL-2，更优选包含SEQIDNO:26序列的IL-2)相比，包含至少一个突变，所述突变在选自以下的氨基酸位置引入一个或多个糖基化基序N-X-S/T：
35N-36X-37T/S；38N-39X-40T/S；41N-42X-43T/S；43N-44X-45T/S；45N-46X-47T/S；62N-63X-64T/S；68N-69X-70T/S；72N-73X-74T/S；74N-75X-76T/S，其中，X是除脯氨酸外的任何氨基酸，优选地X是与野生型IL-2相应位置的氨基酸相同的氨基酸，或是其保守取代残基；
其中氨基酸位置根据SEQIDNO:26编号。


权利要求1的突变蛋白，其中，所述突变蛋白包含一个或多个选自以下的突变糖基化基序：35N-36X-37T/S；38N-39X-40T/S；和74N-75X-76T/S，其中氨基酸位置根据SEQIDNO:26编号，
其中，与野生型IL-2相比，所述突变蛋白，当在哺乳动物细胞中表达时，优选地以Fc融合蛋白形式表达时，具有改善的表达和/或纯度(优选地，通过在表达和一步亲和纯化后测定突变蛋白的纯度)。


权利要求2的突变蛋白，其中，与野生型IL-2相比，所述突变蛋白包含选自以下的突变糖基化基序：
(i)K35N-L36-T37；
(ii)R38N-M39-L40S；
(iii)Q74N-S75-K76T；优选所述突变蛋白包含突变糖基化基序K35N-L36-T37。


根据权利要求2和3的突变蛋白，其中，所述突变蛋白包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、或98％的同一性的序列：SEQIDNO:31，32和38。


根据权利要求1的突变蛋白，其中所述突变蛋白包含一个或多个选自以下的突变糖基化基序：41N-42X-43T/S；43N-44X-45T/S；45N-46X-47T/S；68N-69X-70T/S；72N-73X-74T/S，优选糖基化基序43N-44X-45T/S，其中氨基酸位置根据SEQIDNO:26编号，
其中，与野生型IL-2相比，所述突变蛋白具有降低的或消除的IL-2Rα结合。


权利要求5的突变蛋白，其中，与野生型IL-2相比，所述突变蛋白包含选自以下的突变糖基化基序：
(i)T41N-F42-K43S；
(ii)K43N-F44-Y45T；
(iii)Y45N-M46-P47S；
(iv)E68N-V69-L70S；
(v)L72N-A73-Q74T；
优选地，所述突变蛋白包含突变糖基化基序K43N-F44-Y45T。


权利要求5-6的突变蛋白，其中，所述突变蛋白还包含：
(i)选自35N-36X-37T/S；38N-39X-40T/S；和74N-75X-76T/S的突变糖基化基序；和/或
(ii)突变K35Q，
其中，与野生型IL-2相比，所述突变蛋白具有降低的或消除的IL-2Rα结合，且在以Fc融合蛋白形式在哺乳动物细胞中表达时具有改善的表达和纯度。


根据权利要求5-7的突变蛋白，其中，所述突变蛋白包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、或98％同一性的序列：SEQIDNO:33,34,35,37，39，和45-47。


一种IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白，与野生型IL-2(优选人IL-2，更优选包含SEQIDNO:26序列的IL-2)相比，包含缩短的B’C’环区(即，氨基酸残基aa72和aa84之间的连接序列)，优选地，所述缩短的环区具有小于10，9,8，7，6，或5个的氨基酸长度，且优选7个氨基酸长度，其中氨基酸残基根据SEQIDNO:26编号。


权利要求9的突变蛋白，其中所述突变蛋白，相对于野生型IL-2，包含
(i)对aa73至aa83序列的替代，例如替代为来自四螺旋短链细胞因子IL家族成员的短B’C’环序列，如IL15的B’C’环序列，优选地经替代的环区具有序列SGDASIH；或
(ii)对aa73至aa83序列的截短，例如自C端截短1、2、3或4个氨基酸；优选地截短的环区具有序列A(Q/G)S(K/A)N(F/I)H，优选所述截短的环区具有序列AQSKNFH或AGSKNFH。


权利要求8-10的突变蛋白，其中所述突变蛋白，相对于野生型IL-2，具有增强的IL-2Rβ结合，和/或改善的表达产量和/或纯度。


权利要求8-11的突变蛋白，其中所述突变蛋白包含与选自以下的氨基酸序列具有至少90％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、或98％同一性的序列：SEQIDNO:40-44，优选SEQIDNO:40-42，更优选SEQIDNO:40或41。


一种IL-2突变蛋白，其中所述突变蛋白，与野生型IL-2(优选人IL-2，更优选包含SEQIDNO:26序列的IL-2)相比，包含组合突变：(i)选自41N-42X-43T/S；43N-44X-45T/S；45N-46X-47T/S；68N-69X-70T/S；72N-73X-74T/S的突变糖基化基序；和(ii)在氨基酸位置aa72至aa84之间的、选自SGDASIH和A(Q/G)S(K/A)N(F/I)H的缩短B’C’环区序列，其中氨基酸位置根据SEQIDNO:26编号。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：康立山，付凤根，周帅祥，史新震，刘军建，
申请(专利权)人：信达生物制药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32