新型白介素2及其用途制造技术

本发明专利技术涉及新型白介素2(IL‑2)突变蛋白及其用途。具体地，本发明专利技术涉及，与野生型IL‑2相比，具有降低的IL‑2Rα受体结合能力和/或提高的IL‑2Rβ受体结合能力的IL‑2突变蛋白。本发明专利技术还提供包含该IL‑2突变蛋白的融合蛋白、免疫缀合物，以及编码该IL‑2突变蛋白的核酸、包含该核酸的载体和宿主细胞。本发明专利技术进一步提供制备该IL‑2突变蛋白的方法、包含该IL‑2突变蛋白的药物组合物和该突变蛋白的治疗用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型白介素2及其用途
本专利技术涉及新型白介素2(IL-2)突变蛋白及其用途。具体地，本专利技术涉及与野生型IL-22相比，具有降低的IL-2Rα受体结合能力和/或提高的IL-2Rβ受体结合能力的IL-2突变蛋白。本专利技术还提供包含该IL-2突变蛋白的融合蛋白、免疫缀合物，以及编码该IL-2突变蛋白的核酸、包含该核酸的载体和宿主细胞。本专利技术进一步提供制备该IL-2突变蛋白的方法、包含该IL-2突变蛋白的药物组合物和该突变蛋白的治疗用途。
技术介绍
白介素2(IL-2)，也称作T细胞生长因子(TCGF)，是一种主要由活化的T细胞，尤其是CD4+T辅助细胞产生的多能细胞因子。在真核细胞中，人IL-2(uniprot:P60568)作为153个氨基酸的前体多肽合成，在去除N端20个氨基酸后，产生成熟的分泌性IL-2。其它物种的IL-2的序列也已经公开，参见NCBIRefSeqNo.NP032392(小鼠)、NP446288(大鼠)或NP517425(黑猩猩)。白介素2具有4个反平行的、两亲性α螺旋，此4个α螺旋形成其功能必不可少的四级结本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种IL-2突变蛋白，其与野生型IL-2(优选人IL-2，更优选包含SEQ ID NO:1序列的IL-2)相比包含至少一个突变，所述突变消除或降低对IL-2Rα受体的结合亲合力和/或增强对IL-2Rβ受体的结合亲合力,优选地，所述突变蛋白与SEQ ID NO:1具有至少80％，85％,90％，95％，或96％的同一性，优选地，所述突变蛋白在125位置具有氨基酸残基S。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180921 CN 201811108649X一种IL-2突变蛋白，其与野生型IL-2(优选人IL-2，更优选包含SEQIDNO:1序列的IL-2)相比包含至少一个突变，所述突变消除或降低对IL-2Rα受体的结合亲合力和/或增强对IL-2Rβ受体的结合亲合力,优选地，所述突变蛋白与SEQIDNO:1具有至少80％，85％,90％，95％，或96％的同一性，优选地，所述突变蛋白在125位置具有氨基酸残基S。


权利要求1的IL-2突变蛋白，其包含在选自与SEQIDNO:1的以下位置的相应的位置上的突变：
K35/R38/T41/K43；K35/R38/F42/Y45；K35/T37/R38/F42；K35/T37/F42/K43；K35/R38/K43/L72；K35/T37/E61/L72；K35/Y45/E61/E68；K35/R38/T41/F42；K35/R38/T41/E68；T37/K43/E68/L72；T41/F42/K43/E68；F42/Y45/E61/E68；
尤其是以下位置的突变：K35/T37/R38/F42；K35/R38/T41/K43；K35/R38/F42/Y45；K35/R38/K43/L72，
优选地，上述位点的突变选自以下：








位点
优选的突变




35
K35D/E


37
T37D/E/W/K/Y,尤其是T37D/E


38
R38D/E/W/V/F/K,尤其是R38D/E/W


41
T41Y/E/K/Q/R,尤其是T41E


42
F42A/Q/E/K/R,尤其是F42A/Q/E


43
K43W/D/E/Y/D，尤其是K43E/Y


45
Y45R/K


61
E61R/K/W/L/Y,尤其是E61R//K/W


68
E68K/R/Y/W，尤其是E68R/Y


72
L72K/F






任选地，所述突变蛋白还可以包含在与SEQIDNO:1的35,37,38,41,42,43,45,61,62,68或72位置相应的位置上的一个或多个其它突变。


权利要求1-2的IL-2突变蛋白，其中降低或消除对IL-2Rα受体的结合亲合力的突变包括在选自与SEQIDNO:1的以下位置相应的位置上的突变：
K35/T37/R38/T41/K43；
K35/T37/R38/T41/K43/L72；
K35/T37/R38/K43/Y45/L72；
K35/R38/T41/K43；
K35/R38/T41/K43/L72；
K35/R38/T41/K43/E61/L72；
K35/R38/T41/K43/Y45/L72；
K35/R38/T41/K43/Y45/E61/L72；
K35/R38/F42/Y45；
K35/R38/F42/Y45/E61/E68；
K35/R38/F42/E68/L72；
K35/R38/F42/K43/Y45/E68；
K35/R38/F42/K43/Y45/E61/E68；
K35/R38/F42/K43/Y45/E61/E68/L72；
K35/T37/R38/F42；
K35/T37/R38/F42/Y45/E61/E68；
K35/T37/R38/F42/K43/Y45/E61/E68；
K35/T37/R38/T41/F42/K43/Y45/E61/E68；
K35/T37/R38/F42/Y45/E61/E62/E68/L72；
K35/T37/R38/F42/Y45/E62/E68；
K35/T37/R38/F42/K43/E68；
K35/T37/F42/K43；
K35/T37/R38/T41/L72；
K35/T37/R38/T41/F42；
K35/T37/R38/T41/F42/K43/E68；
K35/T37/R38/T41/F42/K43/Y45；
K35/T37/R38/T41/F42/K43/Y45/L72；
T37/R38/T41/F42/K43/Y45；
K35/T37/T41/F42/K43/Y45；
K35/T37/T41/F42/K43/E61/E68/L72；
K35/T41/F42/K43/E68；
K35/T37/R38/T41/K43/Y45；
K35/T37/R38/T41/K43/Y45/L72；
K35/T37/R38/T41/K43/Y45/E61/L72；
K35/T37/R38/K43/L72；
K35/R38/K43/L72；
K35/T37/E61/L72；
K35/Y45/E61/E68；
K35/R38/T41/F42；
K35/R38/T41/F42/Y45；
K35/R38/T41/F42/Y45/E68；
K35/R38/T41/E68；
K35/R38/Y45/E68/L72；
T37/K43/E68/L72；
T37/K43/Y45/E68/L72；
T37/K43/Y45/E61/E68/L72；
T37/F42/Y45/E61/E68/L72；
T37/T41/Y45/E61/E68/L72；
R38/T41/F42/Y45/E61/E68；
T41/K43/Y45/E61/E68/L72。


权利要求1-3的IL2突变蛋白，其中降低或消除对IL-2Rα受体的结合亲合力的突变包括选自以下的突变组合：
K35D/T37K/R38E/T41K/F42Q/K43D/E68Y；
K35D/T37D/T41F/F42E/K43D/Y45K；
K35D/T37K/R38D/T41E/K43E；
K35D/R38E/T41E/K43E；
K35D/R38F/F42E/Y45K；
K35E/R38D/T41E/K43E/L72F；
K35D/T37E/R38D/K43E/L72F；
K35E/R38D/T41E/K43E/E61K/L72F；
K35E/T37D/R38W/F42Q/Y45K/E61K/E68R；
T37E/K43E/Y45K/E68K/L72K；
K35E/R38E/T41M/F42E/Y45K；
K35D/T37E/R38D/T41E/K43E；
K35D/T37D/R38E/K43E/L72F；
K35E/T37D/R38D/K43E/L72F；
K35D/R38D/T41E/K43E/Y45K/E61W/L72F；
K35D/T37E/R38D/T41E/K43E/L72F；
K35D/R38W/F42E/E68R/L72F；
K35D/T37E/R38D/K43Y/Y45K/L72F；
K35E/T37D/R38W/T41E/F42A/K43F/Y45K；
K35D/T37E/R38D/T41R/F42Q；
K35E/R38D/T41E/K43D/L72F；
K35E/T41Q/F42R/K43D/E68Y；
K35E/T37Y/R38W/T41Y/F42E/K43E/Y45K/L72K；
K35D/T37E/R38D/K43Y/Y45R/L72F；
K35E/T37E/R38D/T41E/K43Y；
T37E/T41K/Y45R/E61L/E68K/L72K；
K35E/R38W/F42Q/Y45R/E61W/E68R；
K35D/T37E/R38E/T41E/L72F；
K35D/T37D/R38D/T41E/L72F；
K35D/R38E/T41E/K43E/L72F；
K35E/T37D/R38D/T41E/K43Y/Y45K；
K35D/T37D/F42A/K43E；
K35E/R38E/T41E/K43Y/Y45K/L72F；
K35D/R38W/F42E/K43Y/Y45R/E61R/E68Y；
R38K/T41R/F42Q/Y45K/E61Y/E68W；
K35E/R38W/F42Q/Y45K/E61L/E68R；
K35D/T37E/R38E/T41E/K43E/Y45K/L72F；
K35E/R38D/K43E/L72F；
K35E/R38E/K43E/L72F；
K35D/T37E/R38D/L72F；
K35E/R38E/T41E/K43E/L72F；
K35E/T37E/R38E/F42A；
K35D/R38F/T41E/F42E/Y45K/E68Y；
K35E/T37K/R38E/T41E/K43E/L72F；
K35D/R38D/K43E/L72F；
K35D/R38A/T41Q/F42R；
K35D/T37E/R38F/F42E/K43E/E68R；
K35D/T37E/R38D/T41E/K43E/Y45K/E61W/L72F；
T37D/R38F/T41F/F42E/K43E/Y45R；
K35D/R38W/F42E/K43E/Y45K/E68K；
K35E/T37D/R38E/T41E/K43Y；
K35E/R38W/F42E/Y45K；
K35E/T37D/R38W/F42E/Y45K/E68Y/L72R；
K35E/T37D/R38W/F42Q/Y45R/E62R/E68R；
K35E/T37D/T41F/F42A/K43E/E61W/E68K/L72W；
T41K/K43D/Y45R/E61L/E68K/L72K；
K35E/T37E/R38W/F42Q/Y45R/E61R/E68R；
K35E/T37D/R38W/F42Q/Y45R/E61K/E68R；
K35E/T37D/R38W/F42Q/Y45K/E61W/E68R；
K35E/R38W/F42Q/Y45K/E61K/E68R；
K35E/R38W/F42Q/Y45K/E61W/E68R；
K35E/T37D/R38W/F42Q/Y45K/E61R/E68R；
K35E/R38D/Y45K/E68R/L72K；
K35E/R38W/F42Q/Y45R/E61R/E68R；
T37E/K43D/E68Y/L72R；
K35E/Y45R/E61L/E68W；
K35E/T37D/R38W/F42Q/Y45R/E61R/E68R；
K35E/T37D/R38V/F42E/K43W/Y45R/E61L/E68W；
K35E/T37W/R38E/T41Y/F42R/K43D/Y45K/E61K/E68W；
K35D/R38W/F42K/K43Y/Y45R/E61R/E68W/L72K；
K35E/T37E/E61W/L72K；
K35E/R38Y/T41E/E68Y；
K35E/T37E/R38W/F42Q/Y45R/E61K/E68R；
T37D/K43D/Y45R/E61Y/E68K/L72R；
K35D/R38W/F42E/K43Y/Y45R/E61R/E68Y/L72K；
T37E/F42R/Y45R/E61Y/E68K/L72K；
K35E/T37D/R38V/F42A/Y45K/E61R/E62W/E68Y/L72R。


权利要求1-2的IL2突变蛋白，其中降低或消除对IL-2Rα受体的结合亲合力的突变包括在选自以下的位置上的突变：
K35/R38/F42/T37；
K35/R38/F42/Y45/E61/E68；
K35/R38/F42/Y45/E61/E68/T37；
优选地所述突变包括：
K35E,R38E,F42A,T37E；或
K35E,R38W,F42Q,Y45R/K,E61K/W/R,E68R，和任选地T37D/E；
最优选地所述突变为选自以下的突变组合：
K35E/R38E/F42A/T37E；
K35E/R38W/F42Q/Y45K/E61K/E68R；
K35E/R38W/F42Q/Y45K/E61W/E68R；
K35E/R38W/F42Q/Y45R/E61R/E68R；
K35E/R38W/F42Q/Y45K/E61K/E68R/T37D；
K35E/R38W/F42Q/Y45R/E61K/E68R/T37D；
K35E/R38W/F42Q/Y45K/E61W/E68R/T37D；
K35E/R38W/F42Q/Y45K/E61R/E68R/T37D；
K35E/R38W/F42Q/Y45R/E61R/E68R/T37D；
K35E/R38W/F42Q/Y45R/E61R/E68R/T37E；
K35E/R38W/F42Q/Y45R/E61K/E68R/T37E。


权利要求1-2的IL2突变蛋白，其中降低或消除对IL-2Rα受体的结合亲合力的突变包括在选自以下的位置上的突变：
K35/R38/F42/Y45/E61/E68/K43；
K35/R38/F42/Y45/E61/E68/K43/L72；
K35/R38/F42/Y45/E61/E68/K43/T37；
K35/R38/F42/Y45/E61/E68/K43/T37/T41；
优选地所述突变包括：
K35D/E,R38W/V/E,F42E/K/R,Y45R/K,E61R/L/K,E68Y/W,K43Y/W/D,任选地还包含T37D/W,T41Y；L72K中的一个或多个；
更优选所述突变为选自以下的突变组合：
K35D/R38W/F42E/Y45R/E61R/E68Y/K43Y；
K35D/R38W/F42E/Y45R/E61R/E68Y/K43Y/L72K；
K35D/R38W/F42K/Y45R/E61R/E68W/K43Y/L72K；
K35E/R38V/F42E/Y45R/E61L/E68W/T37D/K43W；
K35E/R38E/F42R/Y45K/E61K/E68W/T37W/K43D/T41Y；
更优选所述突变为：K35D/R38W/F42E/Y45R/E61R/E68Y/K43Y/L72K。


权利要求1-2的IL2突变蛋白，其中降低或消除对IL-2Rα受体的结合亲合力的突变包括在选自以下的位置上的突变：
K35/R38/T41/K43；
K35/R38/T41/K43/T37；
K35/R38/T41/K43/L72；
K35/R38/T41/K43/T37/L72；
K35/R38/T41/K43/E61/L72；
K35/R38/T41/K43/Y45/L72；
K35/R38/K43/T37/L72；
K35/R38/K43/T37/L72/Y45；
优选地所述突变包括：K35D/E,R38D/E,T41E,K43E/Y,任选地还包括选自T37K/E,Y45K,E61K,L72F中的一者或两者；或者
优选地所述突变包括：K35D/E,R38D,K43E/Y,T37D/E,L72F,任选地还包括Y45K；
更优选地所述突变为选自以下的突变组合：
K35D/R38E/T41E/K43E；
K35D/T37K/R38D/T41E/K43E；
K35E/R38E/T41E/K43E/L72F；
K35D/T37E/R38D/T41E/K43E/L72F；
K35E/R38D/T41E/K43E/E61K/L72F；
K35E/R38E/T41E/K43Y/Y45K/L72F；
K35D/T37E/R38D/K43E/L72F；
K35E/T37D/R38D/K43E/L72F；
K35D/T37E/R38D/K43Y/Y45K/L72F；
更优选所述突变为选自以下的突变组合：
K35D/T37E/R38D/T41E/K43E/L72F；
K35E/R38D/T41E/K43E/E61K/L72F；
K35E/R38E/T41E/K43Y/Y45K/L72F；
K35D/T37E/R38D/K43E/L72F；
K35E/T37D/R38D/K43E/L72F；
K35D/T37E/R38D/K43Y/Y45K/L72F；
最优选地所述突变为：
K35D/R38E/T4...

【专利技术属性】
技术研发人员：康立山，顾春银，付凤根，周帅祥，史新震，刘军建，
申请(专利权)人：信达生物制药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32