细胞因子融合蛋白制造技术

提供了细胞因子融合蛋白，所述细胞因子融合蛋白包括与第二细胞因子融合的第一细胞因子，例如与肿瘤坏死因子‑α(TNF‑α)的N末端融合的白介素‑2(IL‑2)或干扰素‑β(IFN‑β)；以及用于治疗癌症的相关组合物和其使用方法，所述相关组合物呈单独药剂或与自体肿瘤疫苗和/或免疫检查点调节剂的组合的形式。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞因子融合蛋白相关申请的交叉引用本申请要求于2018年12月4日提交的申请第PCT/CN2018/119071号；以及于2018年1月24日提交的申请第PCT/CN2018/073940号的权益，所述申请中的每个申请均通过引用以其整体并入。关于序列表的声明与本申请相关的序列表以文本格式提供以代替纸质副本，并且特此通过引用并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称为BEPE_004_02WO_ST25.txt。文本文件为58KB，创建于2019年1月23日并且通过EFS-Web以电子方式提交。
本公开部分涉及细胞因子融合蛋白，所述细胞因子融合蛋白包括与第二细胞因子融合的第一细胞因子，例如，与人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的N末端融合的人白介素-2(IL-2)或干扰素-β(IFN-β)，以及用于治疗癌症的呈单独药剂或与自体肿瘤疫苗和/或免疫检查点调节剂的组合的形式的相关组合物和其使用方法。
技术实现思路
本公开的实施例包含细胞因子融合蛋白，其包括第一人细胞因子，所述第一人细胞因子与第二人细胞因子的N末端融合，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞因子融合蛋白，其包括第一人细胞因子，所述第一人细胞因子与第二人细胞因子的N末端融合，其中所述第一细胞因子不同于所述第二细胞因子，并且其中所述第一细胞因子和所述第二细胞因子选自IL-2、TNF-α、IFN-β、IFN-α(任选地选自IFNA1、IFNA2、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA7、IFNA8、IFNA10、IFNA13、IFNA14、IFNA16、IFNA17、IFNA21)、IFN-γ、IL-12、GM-CSF、IL-7、IL-23和IL-27，并且任选地其中所述第一细胞因子和所述第二细胞因子由肽连接子分离。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180124 CN PCT/CN2018/073940;20181204 CN PCT/CN201.一种细胞因子融合蛋白，其包括第一人细胞因子，所述第一人细胞因子与第二人细胞因子的N末端融合，其中所述第一细胞因子不同于所述第二细胞因子，并且其中所述第一细胞因子和所述第二细胞因子选自IL-2、TNF-α、IFN-β、IFN-α(任选地选自IFNA1、IFNA2、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA7、IFNA8、IFNA10、IFNA13、IFNA14、IFNA16、IFNA17、IFNA21)、IFN-γ、IL-12、GM-CSF、IL-7、IL-23和IL-27，并且任选地其中所述第一细胞因子和所述第二细胞因子由肽连接子分离。


2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中IL-2、TNF-α、IFN-β、IFN-α、IFN-γ、IL-12、GM-CSF、IL-7、IL-23和/或IL-27的氨基酸序列选自表C1，包含其具有细胞因子信号传导活性和/或抗肿瘤活性的片段和变体。


3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述第一细胞因子为IL-2或IFN-β，并且其中所述第二细胞因子为TNF-α。


4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述IL-2包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：与SEQIDNO:1或2或SEQIDNO:1或2的残基21-153至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同并且具有细胞因子信号传导活性和/或抗肿瘤活性的氨基酸序列。


5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中所述IL-2包括C125S或C125A突变。


6.根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述IFN-β包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：与SEQIDNO:15至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同并且具有细胞因子信号传导活性和/或抗肿瘤活性的氨基酸序列。


7.根据权利要求3到6中任一项所述的融合蛋白，其中所述TNF-α包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：与SEQIDNO:3-6中的任一个至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同并且具有细胞因子信号传导活性和/或抗肿瘤活性的氨基酸序列。


8.根据权利要求7所述的融合蛋白，其中所述TNF-α包括至少一个突变，所述至少一个突变将TNF-α的比活性降低约或至少约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍或12倍和/或相对于与TNFR2的优先结合，增加与TNFR1的优先结合，任选地其中所述至少一个突变选自S86T、R31E和R32W，包含其组合。


9.根据权利要求1到8中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包括肽连接子，任选地生理稳定的连接子或可释放连接子，任选地柔性连接子或刚性连接子。


10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其中所述肽连接子的长度为约1-100个氨基酸、约1-90个氨基酸、约1-80个氨基酸、约1-70个氨基酸、约1-80个氨基酸、约1-50个氨基酸、约1-40个氨基酸、约1-30个氨基酸、约1-20个氨基酸、约1-10个氨基酸或约1-5个氨基酸，或长度为约1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个、60个、70个、80个、90个或100个氨基酸。


11.根据权利要求9或10所述的融合蛋白，其中所述肽连接子选自表L1。


12.根据权利要求1到11中任一项所述的融合蛋白，其包括以下结构：
IL-2(C125S)-(GGGGS)3-TNF-α(S86T)(SEQIDNO:19)；或
IL2(C125A)-(GGGGS)2-TNF-α(S86T)(SEQIDNO:20)；
IL2(C125A)-(GGGGS)2-TNF-α(R32W)(SEQIDNO:21)；
IL2(C125A)-PAPAP-TNF-α(S86T)(SEQIDNO:22)；
IL2(C125A)-PAPAP-TNF-α(R32W)(SEQIDNO:23)；
IL2(C125A)-PAEAAAKEAAAKA-TNF-α(S86T)(SEQIDNO:24)；
IL2(C125A)-PAEAAAKEAAAKA-TNF-α(R32W)(SEQIDNO:25)；
IL-2(C125S)-(GGGGS)3-TNF-α(R31E，S86T)；或
IFN-β-(GGGGS)2-TNF-α(SEQIDNO:26)。


13.根据权利要求1到12中任一项所述的融合蛋白，其包括以下、由以下组成或基本上由以下组成：与选自表F1的序列至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同并且具有细胞因子信号传导活性和/或抗肿瘤活性的氨基酸序列。


14.一种分离的多核苷酸，其对根据权利要求1到13中任一项所述的融合蛋白进行编码，一种包括所述分离的多核苷酸的表达载体或一种包括所述分离的多核苷酸或所述表达载体的宿主细胞。


15.一种治疗组合物或疫苗组合物，其包括根据权利要求1到13中任一项所述的融合蛋白和药学上可接受的载剂。


16.根据权利要求15所述的治疗组合物或疫苗组合物，其包括延时释放调配物。


17.根据权利要求16所述的治疗组合物或疫苗组合物，其中所述延时释放调配物包括以下中的任何一种或多种：聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)、聚乙二醇(PEG)、聚(乳酸)(PLA)、聚(乙醇酸)(PGA)、聚己内酯(PCL)、微颗粒/微球、纳米颗粒/纳米球和/或脂质体，包含其任何组合。


18.根据权利要求16或17所述的治疗组合物或疫苗组合物，其中所述延时释放调配物包括PLGA纳米颗粒和/或PLGA-PEG纳米颗粒。


19.根据权利要求15到18中任一项所述的治疗组合物或疫苗组合物，其包括来自受试者的自体肿瘤细胞疫苗。


20.根据权利要求19所述的治疗组合物或疫苗组合物，其中所述自体肿瘤细胞疫苗包括全肿瘤细胞疫苗和/或其细胞裂解物。


21.根据权利要求19或20所述的治疗组合物或疫苗组合物，其中所述肿瘤细胞来自选自以下中的一种或多种的癌症：黑色素瘤(例如，转移性黑色素瘤)、胰腺癌、骨癌、前列腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、间皮瘤、白血病(例如，淋巴细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、急性髓性白血病、复发性急性髓性白血病)、淋巴瘤、肝癌(肝细胞癌)、肉瘤、B细胞恶性肿瘤、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤、原发性CNS淋巴瘤、原始神经外胚层瘤(成神经管细胞瘤)、肾癌(例如，肾细胞癌)、膀胱癌、子宫癌、食管癌、脑癌、头颈癌、宫颈癌、睾丸癌、甲状腺癌和胃癌。


22.根据权利要求19到21中任一项所述的治疗组合物或疫苗组合物，其中所述自体肿瘤细胞疫苗包括癌抗原，所述癌抗原选自以下中的一种或多种：人Her2/neu、Her1/EGF受体(EGFR)、Her3、A33抗原、B7H3、CD5、CD19、CD20、CD22、CD23(IgE受体)、MAGE-3、C242抗原、5T4、IL-6、IL-13、血管内皮生长因子VEGF(例如，VEGF-A)、VEGFR-1、VEGFR-2、CD30、CD33、CD37、CD40、CD44、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CD152、CD200、CD221、CCR4、HLA-DR、CTLA-4、NPC-1C、腱生蛋白、波形蛋白、胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)、α甲胎蛋白、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、碳酸酐酶9(CA-IX)、癌胚抗原(CEA)、鸟苷酸环化酶C、NY-ESO-1、p53、存活蛋白、整合蛋白αvβ3、整合蛋白α5β1、叶酸受体1、跨膜糖蛋白NMB、成纤维细胞活化蛋白α(FAP)、糖蛋白75、TAG-72、MUC1、MUC16(或CA-125)、磷脂酰丝氨酸、前列腺特异性膜抗原(PMSA)、NR-LU-13抗原、TRAIL-R1、肿瘤坏死因子受体超家族成员10b(TNFRSF10B或TRAIL-R2)、SLAM家族成员7(SLAMF7)、EGP40泛癌抗原、B细胞活化因子(BAFF)、血小板源性生长因子受体、糖蛋白EpCAM(17-1A)、程序性死亡-1、蛋白质二硫键异构酶(PDI)、肝再生磷酸酶-3(PRL-3)、前列腺酸性磷酸酶、Lewis-Y抗原、GD2(在神经外胚层来源的肿瘤上表达的双唾液酸神经节苷脂)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y·陈，D·郭，
申请(专利权)人：北京智康博药肿瘤医学研究有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11