一种用于前列腺癌患病风险评估的miRNA标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种用于前列腺癌患病风险评估的miRNA标志物，所述标志物选自miR‑191、miR‑6131、miR‑1246中的一种或几种，本发明专利技术利用神经卷积网络构建了预测前列腺癌的风险评分模型，使用该模型诊断前列腺癌具有较高准确性、敏感性和特异性。

【技术实现步骤摘要】
一种用于前列腺癌患病风险评估的miRNA标志物
本专利技术属于生物医学领域，涉及一种用于前列腺癌患病风险评估的miRNA标志物。
技术介绍
前列腺癌(PCa)是美国和欧洲男性最常见的癌症，分列癌症死亡原因的第二、第三位。虽然我国目前临床前列腺癌发病率远较西方国家水平低，但近些年来前列腺癌的发病率也在逐年攀升(AcloqueH,ThieryJP,NietoMA.ThephysiologyandpathologyoftheEMT.Meetingontheepithelial-mesenchymaltransition[J].EMBORep,2008,9(4):322-326.)。血浆前列腺特异性抗原(PSA)检测应用于临床前列腺癌的筛查以来，使得很多的早期无症状的前列腺癌患者得到了诊断和治疗。然而，近年来，多数早期诊断的前列腺癌属于惰性前列腺癌，患者即使不接受治疗，也不会死于前列腺癌，所以可以采用主动监测的方式避免过度治疗。侵袭性前列腺癌如果不能在早期经根治性切除手术彻底清除，即使经雄激素剥夺治疗最终仍将发生远处转移(如骨)或者进展为去势抵抗型前列腺癌(李立夏，张颖，梁婧.针对去势抵抗性前列腺癌新型药物的研究进展指导[J].医学食疗与健康，2018(7):206,208.)。一旦病情发展到这个阶段，目前尚没有有效的治愈手段，化疗也只是让部分患者受益，且仅仅是生存期延长几个月而已。因此，积极筛选前列腺癌早期标志物，探索其预测价值及适宜的疾病进展监测模式是当前前列腺癌研究领域的热点问题，对于早期前列腺癌患者的诊断具有重要意义。随着基因测序、转录组学和生物信息学的发展，已发现越来越多的非编码RNA参与肿瘤的发生发展进程，包括微小RNAs(microRNAs,miRNAs)和长链非编码RNA(longnon-codingRNA,1ncRNA)。这为筛查新的肿瘤诊断标志物和治疗靶点提供了坚实的基础。miRNA是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA，其在细胞内具有多种重要的调节作用。主要在转录后水平调控基因表达(大约调控1/3的蛋白编码基因)，从而控制细胞的凋亡、增殖、分化、代谢以及个体的发育和肿瘤的发生、发展以及耐药。miRNA不仅具备作为前列腺癌诊断标志物的潜质，还与前列腺癌的预后以及药物疗效密切相关。MicroRNA存在多种形式，最原始的是pri-miRNA，长度大约为300～1000个碱基；pri-miRNA经过一次加工后，成为pre-miRNA即microRNA前体，长度大约为70～90个碱基；pre-miRNA再经过Dicer酶酶切后，成为长约20～24nt的成熟miRNA。miRNA差异表达谱，极有可能为前列腺癌的早期诊断，预后分析及疗效判断提供有力武器。
技术实现思路
鉴于现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于提供与前列腺癌发生发展相关的标志物，本专利技术提供的前列腺癌标志物用于前列腺癌的诊断具有较高的灵敏性和特异性，有利于实现前列腺癌的早期诊断。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术的第一方面提供了前列腺癌相关的miRNA标志物，所述miRNA标志物选自miR-191、miR-6131、miR-1246中的一种或几种。作为一种可选择的实施方式，所述miRNA标志物选自miR-191、miR-6131、miR-1246的任意一种。优选地，所述miRNA标志物选自miR-6131。作为一种优选的实施方式，所述miRNA标志物选自miR-191、miR-6131、miR-1246中的任意两种。作为一种更为优选的实施方式，所述miRNA标志物为miR-191、miR-6131、miR-1246三者的组合。本专利技术的第二方面提供了一种试剂，所述试剂能够检测本专利技术第一方面所述的miRNA标志物的表达水平。作为一种可选择的实施方式，所述试剂为检测miR-191表达水平的试剂。作为一种可选择的实施方式，所述试剂为检测miR-6131表达水平的试剂。作为一种可选择的实施方式，所述试剂为检测miR-1246表达水平的试剂。作为一种优选的实施方式，所述试剂包括检测miR-191和miR-6131表达水平的试剂。作为一种优选的实施方式，所述试剂包括检测miR-191和miR-1246表达水平的试剂。作为另外一种优选的实施方式，所述试剂包括检测miR-6131和miR-1246表达水平的试剂。作为一种更为优选的实施方式，所述试剂包括检测miR-191、miR-6131、miR-1246三种miRNA表达水平的试剂。进一步，所述试剂选自：特异性识别本专利技术第一方面所述的miRNA标志物的寡核苷酸探针；或特异性扩增本专利技术第一方面所述的miRNA标志物的引物。本专利技术的第三方面提供了一种诊断前列腺癌的产品，所述产品包括检测本专利技术第一方面所述miRNA标志物的表达水平的试剂。进一步，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测本专利技术第一方面所述miRNA标志物的表达水平的试剂。进一步，所述产品包括芯片或试剂盒。在本专利技术中，芯片的制备可采用本领域已知的生物芯片的常规制造方法，例如，如果固相载体采用的是修饰玻片或硅片，探针的5’端含有氨基修饰的聚dT串，可将寡核苷酸探针配制成溶液，然后采用点样仪将其点在修饰玻片或硅片上，排列成预定的序列或阵列，然后通过放置过夜来固定，就可得到本专利技术的miRNA芯片。如果核酸不含氨基修饰，则其制备方法也可参照：王申五主编的《基因诊断技术-非放射性操作手册》；J.L.erisi，V.R.Iyer，P.O.BROWN.Exploringthemetabolicandgeneticcontrolofgeneexpressiononagenomicscale.Science，1997；278：680和马立人，蒋中华主编.生物芯片.北京：化学工业出版社，2000，1-130。本专利技术提供了一种诊断前列腺癌的试剂盒，作为一种可选择的实施方式，所述试剂盒包含与一种或多种miRNA标志物特异性结合的一种或多种探针。作为进一步的实施方式，所述试剂盒还包含洗涤溶液。作为进一步的实施方式，所述试剂盒还包含进行杂交试验的试剂、核酸分离或纯化工具、检测工具以及阳性和阴性对照。作为更进一步的实施方式，所述试剂盒还包含使用该试剂盒的说明书，所述说明书记载了如何采用试剂盒进行检测，和如何利用检测结果对肿瘤发展进行判断、对治疗方案进行选择。这样一种试剂盒可以采用例如试纸条、膜、芯片、盘、测试条、滤器、微球、载片、多孔板或光纤。所述试剂盒的固相支持物可以是例如塑料、硅片、金属、树脂、玻璃、膜、颗粒、沉淀物、凝胶、聚合物、薄片、球、多糖、毛细管、胶片、板或载片。本专利技术的第四方面提供了一种建立前列腺癌诊断模型的方法，所述方法包括以下步骤：1)收集样本，将样本分为训练集和测试集两组，检测样本中基因的表达水平；2)对训练集数据和测试集数据本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.前列腺癌相关的miRNA标志物，其特征在于，所述miRNA标志物选自miR-191、miR-6131、miR-1246中的一种或几种；优选地，所述miRNA标志物选自miR-191、miR-6131、miR-1246中的任意一种；优选地，所述miRNA标志物选自miR-191、miR-6131、miR-1246中的任意两种；优选地，所述miRNA标志物是miR-191、miR-6131、miR-1246的组合。/n

【技术特征摘要】
1.前列腺癌相关的miRNA标志物，其特征在于，所述miRNA标志物选自miR-191、miR-6131、miR-1246中的一种或几种；优选地，所述miRNA标志物选自miR-191、miR-6131、miR-1246中的任意一种；优选地，所述miRNA标志物选自miR-191、miR-6131、miR-1246中的任意两种；优选地，所述miRNA标志物是miR-191、miR-6131、miR-1246的组合。


2.一种试剂，其特征在于，所述试剂检测权利要求1所述的miRNA标志物的表达水平。


3.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，所述试剂选自：
特异性识别权利要求1所述的miRNA标志物的寡核苷酸探针；或
特异性扩增权利要求1所述的miRNA标志物的引物。


4.一种诊断前列腺癌的产品，其特征在于，所述产品包括检测权利要求1所述的miRNA标志物的表达水平的试剂。


5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测权利要求1所述的miRNA标志物的表达水平的试剂。


6.根据权利要求4或5所述的产品，其特征在于，所述产品包括芯片或试剂盒。


7.一种建立前列腺癌诊断模型的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1)收集样本，将样本分为训练集和测试集两组，检测样...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈健，吴佳伟，
申请(专利权)人：无锡市中医医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32