一种用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于分子诊断领域，具体涉及一种用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒，所述试剂盒包括p16基因提取试剂组、p16基因甲基化修饰试剂组、荧光定量PCR检测试剂组和p16基因甲基化水平校准品；与现有技术相比，本发明专利技术的有益效果：本发明专利技术通过超顺磁性磁珠提取患者外周血中的p16基因，通过荧光定量PCR进行检测，检测样本更易获取，DNA提取更加简便快速，有利于试剂盒的商品化推广应用；此外，本发明专利技术采用的甲基化检测引物能够更高效的检测p16基因的甲基化水平；而且，本发明专利技术试剂盒中p16基因甲基化水平校准品能够保证检测结果的可靠性。

【技术实现步骤摘要】
一种用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒
本专利技术属于分子诊断领域，具体涉及一种用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒。
技术介绍
我国是鼻咽癌(肿瘤)高发国之一，南方发病率高于北方，尤其是广西、广东、福建、湖南等省份发病率最高，可达到15/10万～30/10万。鼻咽癌很难自己发现，即使发现一些症状到医院检查时，有80％已到晚期。由于鼻咽位置隐蔽，检查不易，同时鼻咽癌的早期症状比较复杂，缺乏特征，故容易被人忽视，延误诊断和治疗，所以必须提高警惕性。甲基化是指从活性甲基化合物(如S-腺苷基甲硫氨酸)上将甲基催化转移到其他化合物的过程。可形成各种甲基化合物，或是对某些蛋白质或核酸等进行化学修饰形成甲基化产物。在生物系统内，甲基化是经酶催化的，这种甲基化涉及重金属修饰、基因表达的调控、蛋白质功能的调节以及核糖核酸(RNA)加工。p16基因异常甲基化水平对于高危人群鼻咽癌的发现和和判断预后具有重要意义，但是目前针对p16基因异常甲基化水平的检测过程复杂、耗时长、成本高。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的不足，本专利技术提供一种成本低、速度快的用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒，所述试剂盒包括p16基因提取试剂组、p16基因甲基化修饰试剂组、荧光定量PCR检测试剂组和p16基因甲基化水平校准品；其中，所述p16基因提取试剂组采用磁珠法提取外周血中p16基因；其中，所述p16基因甲基化修饰试剂组包括甲基化检测上游引物和甲基化检测上游引物下游引物；其中，所述p16基因甲基化水平校准品含有不同甲基化水平的p16基因。优选地，所述p16基因甲基化修饰试剂组包括甲基化检测上游引物为SEQIDNO.1:5’-GGCCGTTGCTTGGATTTGGCTT-3’。优选地，所述p16基因甲基化修饰试剂组包括甲基化检测下游游引物为SEQIDNO.2:5’-AACACGGCCTAGAACAACATCTA-3’。优选地，所述试剂盒的检测步骤：步骤一，采集患者外周血，然后使用p16基因提取试剂组从血清中提取p16基因DNA；步骤二，采用超微量紫外分光光度仪上检测步骤一中提取的DNA浓度及质量；步骤三，取经过步骤二检测的DNA1.5-5.5ng，使用p16基因甲基化修饰试剂组进行甲基化修饰；步骤四，采用荧光定量PCR检测试剂组对步骤三甲基化修饰后的p16基因进行扩增检测。优选地，所述p16基因甲基化水平校准品采用人血清基质，所述人血清基质包括人血清、非离子型表面活性剂和防腐剂。根据权利1-5所述的用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒在鼻咽癌检测中的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术通过超顺磁性磁珠提取患者外周血中的p16基因，通过荧光定量PCR进行检测，检测样本更易获取，DNA提取更加简便快速，有利于试剂盒的商品化推广应用；此外，本专利技术采用的甲基化检测引物能够更高效的检测p16基因的甲基化水平；而且，本专利技术试剂盒中p16基因甲基化水平校准品能够保证检测结果的可靠性。具体实施方式以下对本专利技术的实施例进行详细说明，但是本专利技术可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。实施例1一种用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒，所述试剂盒包括p16基因提取试剂组、p16基因甲基化修饰试剂组、荧光定量PCR检测试剂组和p16基因甲基化水平校准品；所述p16基因提取试剂组采用磁珠法提取外周血中p16基因；所述p16基因甲基化修饰试剂组包括甲基化检测上游引物和甲基化检测上游引物下游引物；所述p16基因甲基化水平校准品含有不同甲基化水平的p16基因。进一步地，所述p16基因甲基化修饰试剂组包括甲基化检测上游引物为SEQIDNO.1:5’-GGCCGTTGCTTGGATTTGGCTT-3’，所述p16基因甲基化修饰试剂组包括甲基化检测下游游引物为SEQIDNO.2:5’-AACACGGCCTAGAACAACATCTA-3’。收集153例医院就诊的鼻咽癌患者外周血，其中男83例，女70例，年龄25-70岁，均经病理确诊，Ⅰ期25例，Ⅱ期73例，Ⅲ期43例，Ⅳ12例。将收集患者外周血分离去血清后，-80℃冰箱保存备用。采用p16基因甲基化水平校准品进行试剂盒校准，然后使用p16基因提取试剂组从血清中提取p16基因DNA；采用超微量紫外分光光度仪上检测步骤一中提取的DNA浓度及质量，调整DNA浓度至10ng/μL,取DNA5ng，使用p16基因甲基化修饰试剂组进行甲基化修饰；采用荧光定量PCR检测试剂组对步骤三甲基化修饰后的p16基因进行扩增检测，结果显示，153例患者的外周血中有128例检出p16基因异常甲基化，阳性检出率83.66％，其中19例甲基化水平为1-20％，83例甲基化水平为20-60％，26例甲基化水平为60-100％。从以上实施例可以看出，本专利技术检测试剂盒能够快速的检测患者外周血中的p16基因异常甲基化水平。以上所述仅为本专利技术的优选实施例，并非因此限制本专利技术的专利范围，凡是利用本专利技术说明书内容所作的简单修改或变换，或直接或间接运用在其他相关的
，均同理包括在本专利技术的专利保护范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括p16基因提取试剂组、p16基因甲基化修饰试剂组、荧光定量PCR检测试剂组和p16基因甲基化水平校准品；/n其中，所述p16基因提取试剂组采用磁珠法提取外周血中p16基因；/n其中，所述p16基因甲基化修饰试剂组包括甲基化检测上游引物和甲基化检测上游引物下游引物；/n其中，所述p16基因甲基化水平校准品含有不同甲基化水平的p16基因。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括p16基因提取试剂组、p16基因甲基化修饰试剂组、荧光定量PCR检测试剂组和p16基因甲基化水平校准品；
其中，所述p16基因提取试剂组采用磁珠法提取外周血中p16基因；
其中，所述p16基因甲基化修饰试剂组包括甲基化检测上游引物和甲基化检测上游引物下游引物；
其中，所述p16基因甲基化水平校准品含有不同甲基化水平的p16基因。


2.根据权利要求1所述的用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述p16基因甲基化修饰试剂组包括甲基化检测上游引物为SEQIDNO.1：5’-GGCCGTTGCTTGGATTTGGCTT-3’。


3.根据权利要求1所述的用于鼻咽癌诊断的多基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述p16基因甲基化修饰试剂组包括甲基化检测下游游引物为SEQIDNO.2：5’-AA...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俊利，杨凤莲，陈文成，韦贵将，王春芳，韦玉霞，庞晓霞，覃海媚，陈兴鸿，石凤，宋延伦，
申请(专利权)人：右江民族医学院，
类型：发明
国别省市：广西;45