一种β-葡萄糖苷酶突变体的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种β‑葡萄糖苷酶突变体的应用，属于酶工程技术领域。本发明专利技术通过定点突变构建获得转苷/水解比提高的β‑葡萄糖苷酶突变体G224A、G224N、G224V，在最优条件下，制备低聚半乳糖产率分别为46.7％、43.8％和38.4％，分别是野生型的1.84倍、1.73倍和1.51倍；制备己基糖苷的产率分别为51.8％、56.9％和38.8％，分别是野生型的2.79倍、3.07倍和2.09倍，具有较好的工业化应用潜力。

【技术实现步骤摘要】
一种β-葡萄糖苷酶突变体的应用
本专利技术涉及一种β-葡萄糖苷酶突变体的应用，属于酶工程

技术介绍
GH1β-葡萄糖苷酶，本质上是一种水解酶，其主要活性为水解寡糖或糖苷衍生物中的β-糖苷键。但GH1β-葡萄糖苷酶已经被证明具备独特的转糖基活性，且在糖基底物识别方面表现出一定的杂泛性，能够催化多种不同类型糖基单元的糖苷键水解或转苷合成，如能以葡萄糖为底物通过转糖苷作用生成槐糖，还能以乳糖为底物转移半乳糖基而生成低聚半乳糖。与糖基转移酶的合成活性相比，糖基转移酶需要昂贵的核苷酸糖作为底物生成寡糖，而GH1β-葡萄糖苷酶可以使用低成本的原料进行合成，例如天然单糖或者二糖。因此，在工业合成生产中，GH1β-葡萄葡萄糖苷酶具有极大的优势。低聚半乳糖(Galactooligosaccharides,GOS)是一类在乳糖的半乳糖基一侧连接上1个或多个半乳糖分子的结合寡糖，具有较高的耐热性和耐酸性，因此能够在人体消化道保持较高的稳定性，促进双歧杆菌的生长。GOS口感清爽，甜度较低，热量也只为蔗糖的一半，是极优的低热值食物配料，可以改善乳品口味本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第224位突变得到的。/n

【技术特征摘要】
1.一种β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述突变体是将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第224位突变得到的。


2.如权利要求1所述的一种β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶突变体为：将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第224位由甘氨酸突变为丙氨酸得到的；或将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第224位由甘氨酸突变为天冬酰胺得到的；或将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第224位由甘氨酸突变为缬氨酸得到的。


3.编码权利要求1或2所述β-葡萄糖苷酶突变体的基因。


4.携带权利要求3所述基因的表达载体。


5.携带权利要求3所述基因或权利要求4所述表达载体的微生物细胞。


6.一种制备低聚半乳糖的方法，其特征在于，所述方法为将权利要求1或2所述的β-葡萄糖苷酶突变体添加至含有乳糖的反应体系中进行反应，得到反应液；从反应液中分离得到低聚半乳糖。


7.如权利要求6...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄燕，夏伟，许俊勇，盛玲玲，吴敬，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32