一种复合酶催化纤维素制备低聚龙胆糖的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种复合酶催化纤维素制备低聚龙胆糖的方法及其应用，属于酶工程技术领域。本发明专利技术在Thermotoga sp.KOL6来源的β‑葡萄糖苷酶基础上，通过定点突变的方式获得突变体，以巴斯德毕赤酵母KM71为表达宿主，实现突变体基因在毕赤酵母中的高效表达。同时，本发明专利技术的复合酶可有效转化纤维素生成低聚龙胆糖；以磷酸膨胀纤维素和葡萄糖为底物酶催化转化制备低聚龙胆糖，复配纤维素酶和β‑葡萄糖苷酶突变体Q34G/Y200F时，原料的总转化率19.1％，相比野生型β‑葡萄糖苷酶分别提高74.7％。本发明专利技术的技术方案具有很高的工业应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种复合酶催化纤维素制备低聚龙胆糖的方法及其应用
本专利技术涉及一种复合酶催化纤维素制备低聚龙胆糖的方法及其应用，属于酶工程

技术介绍
低聚龙胆糖是葡萄糖以β-1,6糖苷键连接形成的低聚寡糖，主要成分是龙胆二糖，并含有少量的龙胆三糖和龙胆四糖，是一种新型功能性低聚糖。低聚龙胆糖具有极好的益肠道功效，与低聚异麦芽糖、低聚果糖、低聚半乳糖等功能性低聚糖相比，低聚龙胆糖具有低粘度、持水性好、对pH和热非常稳定等特点，可应用于一些其他低聚糖不耐受的食品中；且具备独特的提神苦味，可增加食品口味的丰富性。目前低聚龙胆糖在大众极为喜爱的食品中已有较为广泛的应用，是极具开发前景的高附加值糖类产品。至今国内外仍仅有日本食品化工株式会社生产该产品(商品名Gentose#45、Gentose#80)，且产量不高，仅350吨，市场缺口较大。随着市场需求的扩大，酶法制备制备低聚龙胆糖具有反应条件温和、菌种安全、污染性小、成本低廉、易于分离等优点，开始受到国内外研究人员的关注，是目前生产低聚龙胆糖的主要发展趋势，但目前未有较为理想的案例报道。早期研究者利本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第34位和/或第200位突变得到的。/n

【技术特征摘要】
1.一种β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述突变体是将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第34位和/或第200位突变得到的。


2.如权利要求1所述的一种β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述β-葡萄糖苷酶突变体为：将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第34位由谷氨酰胺突变为甘氨酸得到的；或将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第34位由谷氨酰胺突变为甲硫氨酸得到的；或将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第200位由酪氨酸突变为苯丙氨酸得到的；或将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第34位由谷氨酰胺突变为甘氨酸，同时将氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的β-葡萄糖苷酶的第200位由酪氨酸突变为苯丙氨酸得到的。


3.编码权利要求1或2所述β-葡萄糖苷酶突变体的基因。


4.携带权利要求3所述基因的表达载体。


5.携带权利要求3所述基因或权利要求4所述表达载体的微生物细胞。


6.一种多酶复配制备低...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬，夏伟，许俊勇，徐星豪，黄燕，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32