柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-like EN03及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术提供了柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase‑like EN03，属于病虫害防治技术领域；所述柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase‑like EN03的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术通过RNA干扰沉默柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase‑like EN03的编码基因，能够使柑橘木虱翅蜕皮不完全或者蜕皮不成功导致死亡，从而达到防治柑橘木虱的效果。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03及其编码基因和应用
本专利技术涉及病虫害防治
，尤其涉及柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03及其编码基因和应用。
技术介绍
柑橘木虱(Diaphorinacitri)属半翅目木虱科，是柑橘类嫩梢期的主要害虫，也是目前研究发现的柑橘黄龙病菌自然传播的唯一虫媒载体。柑橘黄龙病(CitrusHuanglongbing，HLB)是世界柑橘产业最具毁灭性的病害，给柑橘产业造成了巨大的经济损失。严格防治柑橘木虱是当前柑橘黄龙病防控的一项关键性措施。当前对柑橘木虱的防治以化学防治和生物防治为主，即通过化学杀虫剂或者天敌昆虫及昆虫病原真菌来杀灭柑橘木虱。未见柑橘木虱本身关键基因结构和功能的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03及其编码基因和应用，本专利技术的柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03及其编码基因能够用于防治柑橘木虱。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了上述方案所述柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03的编码基因，核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。本专利技术还提供了上述方案所述编码基因的dsRNA，核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。本专利技术还提供了上述方案所述的柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03或者所述的编码基因或者所述的dsRNA在防治柑橘木虱中的应用。优选的，所述应用包括通过RNA干扰沉默Chitinase-likeEN03的编码基因来防治柑橘木虱。优选的，所述应用包括以下步骤：将柑橘木虱幼虫置于dsRNA水溶液中浸泡3～10min；所述dsRNA水溶液中dsRNA的浓度为50～300ng/μL；所述dsRNA水溶液的溶剂为无酶水。优选的，所述柑橘木虱幼虫包括4～5龄柑橘木虱幼虫。优选的，所述柑橘木虱幼虫在浸泡前饥饿处理1.5～2.5h。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术通过RNA干扰沉默柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03的编码基因，能够使柑橘木虱翅蜕皮不完全或者蜕皮不成功进而导致死亡，从而达到防治柑橘木虱的效果。附图说明图1为柑橘木虱几丁质结合蛋白的筛选示意图；图2为柑橘木虱表皮蛋白的提取以及超滤去除SDS；其中泳道1：Marker，泳道2～3：PBS洗涤第1、2、3次，泳道4～6：2％SDS洗涤第1、2、3次，泳道7：2％SDS洗涤第1、2、3次的混合液，泳道8：KCl去除SDS后的蛋白溶液，泳道9：超滤去除SDS后的蛋白溶液；图3为去除SDS后的蛋白溶液的几丁质结合蛋白筛选实验；泳道1：Marker，泳道2：去除SDS后的蛋白溶液，泳道3：流出液，泳道4～6：洗涤缓冲液洗涤第1、2、3次，泳道7：8M尿素洗脱；图4为Chitinase-likeENO3的质谱结果；图5为原核表达蛋白的几丁质体外结合实验结果；图6为RNAi后DcCHT-ENO3基因的表达水平变化；图7为沉默DcCHT-ENO3基因后柑橘木虱羽化表型变化。具体实施方式本专利技术提供了柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，具体为：MRALSVLLFVAFAIYYCEGVAKTVCYYNHKAFKRDGTAKVGPEELKPALSMCTHLVYGFAGISDSGDYHIKSLDKELDTDKNKGKELFKQITALKTFQPNLNIMLSVGGFEDDDDKEKYLEVLDDPKYRKSFIETTVAALKKYGFNGLDLAWEFPVVTEKHESYTLGSIWHKIKKTVTGPKDDNPTLHREHFTLLIREMKAAFRAENFLLSASVLPHVNYTVYFDVPSITQHLDMITLHAYDFRTPQRNPKEADYSAPLHFVYGRVPHQNANAMVRWFIEHGVELQKLVLGIPTFGRSWLLEESSHKSGIPPLVADGAGEKGTITKEEGLLSYAEICPQLVSITNAQASPSLLRKQEDPQRRLGTYAFRLADKKLKQEYGTWVSFEEPETAGYKASYAKLAGLGGVAIIDLSLDDFRGMCNSNKFPILRAARTQFV。本专利技术还提供了上述方案所述柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03的编码基因，核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，具体为：atgcgagctctaagtgttcttttgttcgtcgcttttgcgatatactactgtgaaggcgtggccaaaacggtgtgctactacaaccataaggcattcaagagagatggaacggccaaagttggacccgaggagctgaagccagccctgagcatgtgcacccatttggtgtacgggttcgctgggatttcggacagcggcgactaccacatcaagtccctggacaaggaattggacacggacaagaacaaaggcaaagagctgttcaaacagataaccgcgctgaaaactttccaacccaacctgaacattatgcttagtgtgggaggatttgaagatgatgatgacaaggagaagtatttggaagtgctggatgacccgaaatacagaaagagtttcatcgaaacaactgtggcagctctgaaaaagtacggcttcaacggattggatctggcctgggaattccccgttgtgactgaaaagcacgaatcttacactcttggatccatctggcataaaatcaagaaaaccgtcaccggacccaaggatgacaatccaacccttcatcgtgaacatttcactctgctcatccgagaaatgaaagccgccttccgagctgagaacttcctactgagtgcctccgttttgccgcacgtcaattataccgtatactttgacgtcccctccatcactcaacatctggacatgatcactctccatgcctatgacttccgtacaccccagagaaaccccaaggaggctgactattccgctccccttcactttgtctacggtagagtacctcatcagaatgctaacgctatggtgcgctggttcattgaacatggagttgaattacaaaaactggtccttggaatccccaccttcggtcgc本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-like EN03，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03，氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.权利要求1所述柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03的编码基因，核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.权利要求2所述编码基因的dsRNA，核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。


4.权利要求1所述的柑橘木虱几丁质结合蛋白Chitinase-likeEN03的蛋白抑制剂或者或者权利要求2所述的编码基因或者权利要求3所述的dsRNA在防治柑橘木虱中的应用。


5.根据权利要求4...

【专利技术属性】
技术研发人员：余海中，卢占军，谢妍馨，李宁艳，喻修道，黄爱军，易龙，苏华楠，钟八莲，
申请(专利权)人：赣南师范大学，
类型：发明
国别省市：江西;36