培养失分化或未分化甲状腺癌类器官的方法及甲状腺癌培养基技术

本公开涉及一种培养失分化或未分化甲状腺癌类器官的方法，该方法包括将失分化或未分化甲状腺癌组织细胞与甲状腺癌培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述甲状腺癌培养基中含有nicotinamide和BM‑Cyclin，以所述甲状腺癌培养基为基准，所述nicotinamide的浓度为5～20mM，所述BM‑Cyclin的浓度为5～30μg/ml；对所述待培养物进行培养扩增，得到失分化或未分化甲状腺癌类器官。本公开提供的失分化或未分化甲状腺癌类器官的培养方法中，由于所采用的甲状腺癌培养基中含有特定浓度的nicotinamide和BM‑Cyclin，这有利于促进失分化或未分化甲状腺癌类器官的体外生长，因此，利用本公开提供的方法进行失分化或未分化甲状腺癌类器官培养时，培养成功率较高。

【技术实现步骤摘要】
培养失分化或未分化甲状腺癌类器官的方法及甲状腺癌培养基
本公开涉及生物医药
，具体涉及一种培养失分化或未分化甲状腺癌类器官的方法、一种用于失分化或未分化甲状腺癌类器官培养的甲状腺癌培养基、失分化或未分化甲状腺癌类器官。
技术介绍
甲状腺癌是一种起源于甲状腺滤泡上皮细胞和滤泡旁上皮细胞的恶性肿瘤，包括分化型甲状腺癌和未分化型甲状腺癌。分化型甲状腺癌(differentiatedthyroidcarcinoma，DTC)占所有甲状腺癌的90％，包括甲状腺乳头状癌(papillarythyroidcarcinoma，PTC)和甲状腺滤泡癌(follicularthyroidcarcinoma，FTC)。DTC肿瘤细胞具有正常甲状腺细胞的碘摄取能力，可以采用手术切除结合131I放疗及甲状腺激素代替抑制疗法进行治疗，因此多数DTC患者的预后良好。但是，DTC发生转移后，会有部分DTC发生失分化，发展为失分化甲状腺癌。失分化和未分化甲状腺癌细胞不具有碘摄取能力，因此对131I放疗无响应，导致失分化或未分化甲状腺癌患者的预后性较差，例如，未分化甲状腺癌的5年生存率低于10％，12个月致死率达80.7％。因此，失分化和未分化甲状腺癌是目前甲状腺癌治疗与研究的重点。由于失分化和未分化甲状腺癌的发病率较低、死亡率较高，获取原生组织的难度较高，导致难以进行大样本的随机对照研究，缺乏可信度较高的循证医学证据，因此，建立与失分化和未分化甲状腺癌原生组织相似性较高的细胞模型，对失分化及未分化甲状腺癌的病理机制研究、靶向药物开发具有重要意义。
技术实现思路
本公开的目的是提供一种培养失分化或未分化甲状腺癌类器官的方法、一种用于失分化或未分化甲状腺癌类器官培养的甲状腺癌培养基、失分化或未分化甲状腺癌类器官。为了实现上述目的，第一方面，本公开提供一种培养失分化或未分化甲状腺癌类器官的方法，该方法包括：将失分化或未分化甲状腺癌组织细胞与甲状腺癌培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述甲状腺癌培养基中含有nicotinamide和BM-Cyclin，以所述甲状腺癌培养基为基准，所述nicotinamide的浓度为5～20mM，所述BM-Cyclin的浓度为5～30μg/ml；对所述待培养物进行培养扩增，得到失分化或未分化甲状腺癌类器官。可选地，所述甲状腺癌培养基中，以所述甲状腺癌培养基为基准，所述nicotinamide的浓度为8～15mM，所述BM-Cyclin的浓度为10～25μg/ml。可选地，所述待培养物中，所述失分化或未分化甲状腺癌组织细胞的浓度为1×104～5×104个/mL，所述基质胶的含量为2～20体积％。可选地，所述甲状腺癌培养基中还含有DMEM/F12培养基、penicillin/streptomycin、B27supplement(withoutvitaminA)、glutamax、N-acetyll-cysteine、A83-01、Rspo-1conditionedmedium、recombinanthuman(Leu15)-gastrinI和recombinanthumanEGF。可选地，以所述甲状腺癌培养基为基准，所述penicillin/streptomycin的含量为0.1～10体积％，所述B27supplement(withoutvitaminA)的含量为0.1～10体积％，所述glutamax的含量为0.1～10体积％，所述N-acetyll-cysteine的浓度为0.5～5mM，所述A83-01的浓度为0.5～10μM，所述Rspo-1conditionedmedium的含量为5～20体积％，所述recombinanthuman(Leu15)-gastrinI的浓度为1～20nM，所述recombinanthumanEGF的浓度为5～100ng/ml，余量为所述DMEM/F12培养基。可选地，所述失分化或未分化甲状腺癌组织细胞由失分化或未分化甲状腺癌原生组织经酶解处理得到，其中，所述酶解处理包括：将所述失分化或未分化甲状腺癌原生组织与酶解液混合，得到待酶解物，其中，所述酶解液中含有2～10体积％的FBS、0.5～5mg/ml的胶原蛋白水解酶及余量的DMEM/F12培养基；将所述待酶解物进行培养酶解，得到酶解产物；对所述酶解产物进行分离处理，得到所述失分化或未分化甲状腺癌组织细胞。第二方面，本公开提供一种用于失分化或未分化甲状腺癌类器官培养的甲状腺癌培养基，所述甲状腺癌培养基中含有nicotinamide和BM-Cyclin，以所述甲状腺癌培养基为基准，所述nicotinamide的浓度为5～20mM，所述BM-Cyclin的浓度为5～30μg/ml；优选地，以所述甲状腺癌培养基为基准，所述nicotinamide的浓度为8～15mM，所述BM-Cyclin的浓度为10～25μg/ml。可选地，所述甲状腺癌培养基中还含有DMEM/F12培养基、penicillin/streptomycin、B27supplement(withoutvitaminA)、glutamax、N-acetyll-cysteine、A83-01、Rspo-1conditionedmedium、recombinanthuman(Leu15)-gastrinI和recombinanthumanEGF。可选地，以所述甲状腺癌培养基为基准，所述penicillin/streptomycin的含量为0.1～10体积％，所述B27supplement(withoutvitaminA)的含量为0.1～10体积％，所述glutamax的含量为0.1～10体积％，所述N-acetyll-cysteine的浓度为0.5～5mM，所述A83-01的浓度为0.5～10μM，所述Rspo-1conditionedmedium的含量为5～20体积％，所述recombinanthuman(Leu15)-gastrinI的浓度为1～20nM，所述recombinanthumanEGF的浓度为5～100ng/ml，余量为所述DMEM/F12培养基。第三方面，本公开提供第一方面中任意一项所述的方法培养得到的失分化或未分化甲状腺癌类器官。通过上述技术方案，本公开提供的失分化或未分化甲状腺癌类器官的培养方法中，由于所采用的甲状腺癌培养基中含有特定浓度的nicotinamide和BM-Cyclin，这有利于促进失分化或未分化甲状腺癌类器官的体外生长，因此，利用本公开提供的方法进行失分化或未分化甲状腺癌类器官培养时，培养成功率较高。本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。具体实施方式以下对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。本公开的第一方面提供一种培养失分化或未分化甲状腺癌类器官的方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种培养失分化或未分化甲状腺癌类器官的方法，其特征在于，该方法包括：/n将失分化或未分化甲状腺癌组织细胞与甲状腺癌培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述甲状腺癌培养基中含有nicotinamide和BM-Cyclin，以所述甲状腺癌培养基为基准，所述nicotinamide的浓度为5～20mM，所述BM-Cyclin的浓度为5～30μg/ml；/n对所述待培养物进行培养扩增，得到失分化或未分化甲状腺癌类器官。/n

【技术特征摘要】
1.一种培养失分化或未分化甲状腺癌类器官的方法，其特征在于，该方法包括：
将失分化或未分化甲状腺癌组织细胞与甲状腺癌培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述甲状腺癌培养基中含有nicotinamide和BM-Cyclin，以所述甲状腺癌培养基为基准，所述nicotinamide的浓度为5～20mM，所述BM-Cyclin的浓度为5～30μg/ml；
对所述待培养物进行培养扩增，得到失分化或未分化甲状腺癌类器官。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述甲状腺癌培养基中，以所述甲状腺癌培养基为基准，所述nicotinamide的浓度为8～15mM，所述BM-Cyclin的浓度为10～25μg/ml。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述待培养物中，所述失分化或未分化甲状腺癌组织细胞的浓度为1×104～5×104个/mL，所述基质胶的含量为2～20体积％。


4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述甲状腺癌培养基中还含有DMEM/F12培养基、penicillin/streptomycin、B27supplement(withoutvitaminA)、glutamax、N-acetyll-cysteine、A83-01、Rspo-1conditionedmedium、recombinanthuman(Leu15)-gastrinI和recombinanthumanEGF。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，以所述甲状腺癌培养基为基准，所述penicillin/streptomycin的含量为0.1～10体积％，所述B27supplement(withoutvitaminA)的含量为0.1～10体积％，所述glutamax的含量为0.1～10体积％，所述N-acetyll-cysteine的浓度为0.5～5mM，所述A83-01的浓度为0.5～10μM，所述Rspo-1conditionedmedium的含量为5～20体积％，所述recombinanthuman(Leu15)-gastrinI的浓度为1～20nM，所述recombinanthumanEGF的浓度为5～100ng/ml，余量为所述DMEM/F12培养基。


6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述失分化或未分化甲状腺癌组织细胞由...

【专利技术属性】
技术研发人员：李程，黄思颖，李堃，孙志坚，康平，
申请(专利权)人：浙江科途医学科技有限公司，北京科途医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33