一株转移潜能高的胃癌细胞系及其建立方法和应用技术

本发明专利技术公开了一株转移潜能高的胃癌细胞系及其建立方法和应用，该胃癌细胞系由胃癌临床肿瘤标本移植裸鼠成瘤后，将瘤组织体外培养传代建系。该肿瘤细胞系皮下移植裸鼠后，发生肝和肺转移。该肿瘤细胞核型为超二倍体，与正常细胞二倍体不同，染色体众数集中在50‑57之间。细胞群体倍增时间为48小时。细胞迁移实验显示该肿瘤细胞随着时间增加细胞迁移能力增强。细胞侵袭实验显示该肿瘤细胞具有明显的侵袭力。因此，本发明专利技术建立的胃癌细胞系为胃癌的治疗和转移机制研究提供例如良好的实验工具。

【技术实现步骤摘要】
一株转移潜能高的胃癌细胞系及其建立方法和应用
本专利技术属于医药生物
，涉及一株转移潜能高的胃癌细胞系及其建立方法和应用。
技术介绍
胃癌(GC)是最常见的恶性肿瘤之一，虽然通过手术和化疗有所改善，但晚期胃癌的预后仍然很差，5年生存率接近20％。侵袭和转移是该病致死的主要原因，并极大影响治疗效果。由于胃癌转移的发生与诸多肿瘤相关基因密切相关，不同病人应存在各自的特征。因此，急需建立与临床生物学和行为特征更为接近的个体化转移模型，确定胃癌转移的关键基因并了解其预后和治疗的分子机制，而建立相应的肿瘤细胞系是制备胃癌转移模型的重要基础。目前建立胃癌细胞系较常用的方法是将病人组织块(或腹水)直接培养，由于受手术切除标本大小的限制，肿瘤细胞和正常细胞交替存在，很难获到大量的瘤细胞，同时人体单细胞体外生长需要严格的培养条件，大部分肿瘤细胞无法在体外稳定、持续传代。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一株转移潜能高的胃癌细胞系及其建立方法和应用，该胃癌细胞系具有良好的侵袭能力和迁移能力，能够有效提升肿瘤细胞的建系效能，稳定传代。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：本专利技术公开了一株胃癌细胞系，该胃癌细胞系由胃癌临床肿瘤标本移植裸鼠成瘤后，将瘤组织体外培养传代建立，命名为C61262，该胃癌细胞系于2019年12月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C202001。优选地，该胃癌细胞系皮下移植裸鼠后能够发生肝和肺转移。优选地，该胃癌细胞系的细胞核型为超二倍体，与正常细胞二倍体不同，染色体众数集中在50-57之间。优选地，STR分型显示该胃癌细胞系为人源性细胞。优选地，肿瘤特异性标志物CEA和CA19-9在该胃癌细胞系中表达均呈阳性；胃癌特异性标志物MGb2和MGb7在该胃癌细胞系中表达均为阳性。进一步优选地，肿瘤标志物CEA在该胃癌细胞系的细胞膜和细胞质表达，呈强阳性(+++)；肿瘤标志物CA199在该胃癌细胞系的细胞膜表达，呈弱阳性(+)；胃癌特异性标志物MGb2和MGb7在该胃癌细胞系的细胞膜表达，均呈强阳性(+++)。优选地，该胃癌细胞系的肿瘤细胞随着时间增加细胞迁移能力增强。本专利技术还公开了上述的胃癌细胞系的建立方法，取离体的新鲜胃癌细胞组织，移植于免疫缺陷小鼠的皮下，待形成肿瘤后，取肿瘤组织在免疫缺陷小鼠的体内连续传代；取第三代肿瘤组织进行体外培养，获得目标胃癌细胞系C61262。本专利技术还公开了上述的胃癌细胞系在研究胃癌发生机理、筛选防治胃癌药物中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术首次公开了一株转移潜能高的胃癌细胞系，将该胃癌细胞系命名C61262，并将其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C202001。本专利技术建立的胃癌细胞系模型，较好的保持了原发瘤的异质性，利用该模型获得肿瘤组织较好的适应了机体内环境，再经过体外培养，可有效提升肿瘤细胞的建系效能，稳定传代。进一步地，该肿瘤细胞核型为超二倍体，与正常细胞二倍体不同，染色体众数集中在50-57之间。细胞群体倍增时间为48小时。肿瘤标志物CEA主要在细胞膜和细胞质表达，呈强阳性(+++)；CA199主要在细胞膜表达，呈弱阳性(+)；MGb2和MGb7主要在细胞膜表达，均呈强阳性(+++)。细胞迁移实验显示该肿瘤细胞随着时间增加细胞迁移能力增强。细胞侵袭实验显示该肿瘤细胞具有明显的侵袭力。本专利技术公开的胃癌细胞系C61262的建立方法是将临床离体的新鲜肿瘤标本首先移植免疫缺陷小鼠建立异种移植模型(patient-derivedtumorxenograft，PDX模型)进行筛选，进一步取荷瘤鼠肿瘤组织进行体外培养，建立细胞系，该方法可有效提升肿瘤细胞的建系效能，稳定传代。本专利技术公布的胃癌细胞系C61262与已有的胃癌细胞系相比，移植免疫缺陷裸鼠后可模拟胃癌病人的临床特征，发生肝转移和肺转移，具有良好的转移潜能，因此，该胃癌细胞模型可有效应用于胃癌的转移机制研究和相关药物筛选。菌株保藏胃癌细胞系命名为C61262，保藏在中国典型培养物保藏中心，地址是中国武汉武昌珞珈山，保藏编号为CCTCCNO：C202001，保藏日期为为2019年12月17日。附图说明图1为本专利技术制备的PDX模型组织结构；其中，(a)为Human(人)(×400)；(b)为Mouse(鼠)(×400)。图2为本专利技术建立的胃癌细胞C61262形态；其中，(a)为(×100)；(b)为(×200)。图3为C61262细胞HE染色结果；其中，(a)为(×100)；(b)为(×200)。图4为C61262细胞生长曲线。图5为C61262细胞生长周期。图6为C61262细胞STR分型结果；其中，(a)为原发肿瘤；(b)为转移瘤。图7为C61262细胞染色体特征；其中，(a)为随机选取的视野1；(b)为随机选取的视野2。图8为免疫组织化学检测C61262肿瘤标志物的表达；其中，(a)为CEA；(b)为CA199；(c)为MGb7；(d)为MGb2。图9为C61262细胞组织划痕实验；其中，(a)为0h；(b)为24h。；(c)为48h。图10为C61262细胞侵袭实验；其中，(a)为(×100)；(b)为(×400)。图11为C61262细胞异种移植肿瘤生长曲线。图12为C61262细胞异种移植发生转移后脏器组织结构(HE染色)。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。需要说明的是，本专利技术的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本专利技术的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。下面结合附图对本专利技术做进一步详细描述：1.胃癌PDX模型的建立将临床获得新鲜的胃癌手术标(编号为61262)本剪碎为3mm3，混合适量的基质胶，利用穿刺针移植到裸鼠背部皮下，成瘤后当体积生长至800mm3～1000mm3时(命名为P1代)，异氟烷麻醉小鼠，手术获取肿瘤组织在另一只裸鼠皮下进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株胃癌细胞系，其特征在于，该胃癌细胞系由胃癌临床肿瘤标本移植裸鼠成瘤后，将瘤组织体外培养传代建立，命名为C61262，该胃癌细胞系于2019年12月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202001。/n

【技术特征摘要】
1.一株胃癌细胞系，其特征在于，该胃癌细胞系由胃癌临床肿瘤标本移植裸鼠成瘤后，将瘤组织体外培养传代建立，命名为C61262，该胃癌细胞系于2019年12月17日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C202001。


2.如权利要求1所述的胃癌细胞系，其特征在于，该胃癌细胞系皮下移植裸鼠后能够发生肝和肺转移。


3.如权利要求1所述的胃癌细胞系，其特征在于，该胃癌细胞系的细胞核型为超二倍体，与正常细胞二倍体不同，染色体众数集中在50-57之间。


4.如权利要求1所述的胃癌细胞系，其特征在于，STR分型显示该胃癌细胞系为人源性细胞。


5.如权利要求1所述的胃癌细胞系，其特征在于，肿瘤特异性标志物CEA和CA19-9在该胃癌细胞系中表达均呈阳性；胃癌特异性标志物MGb2和MGb7在该胃癌细胞系...

【专利技术属性】
技术研发人员：师长宏，王洁，张彩勤，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61